研究背景納米氧化鋅廣泛應(yīng)用于口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。動(dòng)物體內(nèi)研究表明,其顆粒能通過(guò)血腦屏障和神經(jīng)通路進(jìn)入個(gè)體中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）,并導(dǎo)致腦組織損傷。目前引起損傷的分子機(jī)制雖尚無(wú)定論,但線粒體損傷是公認(rèn)的的早期毒性表現(xiàn)。線粒體自噬是一種選擇性清除多余或受損線粒體的途徑,在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)量、維持線粒體正常功能等方面發(fā)揮重要作用。那么,納米氧化鋅引起的CNS毒性過(guò)程中,是否有線粒體自噬參與?目前尚未見(jiàn)到相關(guān)研究對(duì)其進(jìn)行探討。研究目的本項(xiàng)目擬通過(guò)基因干擾技術(shù)構(gòu)建PINK1基因沉默的BV-2細(xì)胞模型,然后通過(guò)比較納米氧化鋅處理后,兩種類型細(xì)胞在增殖能力、細(xì)胞內(nèi)線粒體自噬的啟動(dòng)、線粒體膜電位的變化、以及線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平等方面的差異。探討在納米氧化鋅顆粒導(dǎo)致的BV-2細(xì)胞毒性中,PINK1/Parkin通路介導(dǎo)的線粒體自噬所發(fā)揮的作用。材料與方法采用TEM、DLS、Zeta、BET測(cè)量?jī)x及X射線能譜儀對(duì)材料進(jìn)行表征。通過(guò)RNAi技術(shù)獲得PINK1基因沉默細(xì)胞株,用含不同濃度納米氧化鋅培養(yǎng)基分別處理正常細(xì)胞,通過(guò)CCK8法確定最佳濃度。然后根據(jù)納米氧化鋅作用時(shí)間,將野生型和基因沉默型兩種細(xì)胞各... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１?ＰＩＮＫｌ／Ｐａｒｋｉｎ介導(dǎo)的線粒體自噬示意圖

??ＲａｏｏｒｃＭｉＺｎＯｌｌ??圖１－２納米氧化鋅顆粒的水合粒徑，可見(jiàn)顆粒在去離子水中的粒徑主要分布在５００．８?ｎｍ左右??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ－ｗｅｉｇｈｔｅｄ?ａｖｅｒａｇｅ?ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ?ｄｉａｍｅｔｅｒ?ｏｆ?ＺｎＯ?ＮＰｓ．?Ｔｈｅ?ｆｉｇｕｒｅ?ｓｈｏｗｓ??ｔｈｅ?ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｓｉｚｅ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ?ｗａｔｅｒ?ｉｓ?ｍａｉｎｌｙ?ａｂｏｕｔ?５００．８?ｎｍ．??２．３納米氧化鋅顆粒的衍射圖譜分析??ＸＲＤ結(jié)果顯示待測(cè)顆粒的波峰與氧化鋅的波峰相一致（圖１－３）。??５０００－Ｉ???４０００－??Ｓ?３０００?－??ＣＤ??吝??＾?２０００－??０）??Ｉ?．?ｉ．ｉ．?｜?，?Ｉ?．?｜?，?｜?．??１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０?８０??２６°??圖１－３納米氧化鋅顆粒的Ｘ射線衍射圖譜??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｔｈｅ?Ｘ－ｒａｙ?Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ?Ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ＺｎＯ?ＮＰｓ??９??

圖２－１正常ＢＶ－２細(xì)胞形態(tài)（６〇ｘ）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｔｈｅ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｎｏｒｍａｌ?ＢＶ－２?ｃｅｌｌｓ?（６〇ｘ?）??１．３．２納米氧化鋅母液配置：??將納米氧化鋅滅菌使用６（）鈷照射滅菌后，用生理鹽水配制成１００噸／ｍＬ納顆粒混懸液母液，使用漩渦振蕩器初步混懸，置于超聲清洗儀中４°Ｃ以下超聲振??蕩８?ｈ，振動(dòng)頻率為６０?Ｈｚ，使納米顆粒分散均勻。在超聲過(guò)程中，每間隔１０?ｍｉｎ??行漩渦混勻１次，制成納米氧化鋅懸液。每次使用前再行漩渦混勻、６０?Ｈｚ超聲??分散。??１．３．３納米氧化鋅對(duì)ＢＶ－２細(xì)胞增殖能力影響??采用ＣＣＫ－８細(xì)胞増殖能力實(shí)驗(yàn)測(cè)定納米氧化鋅對(duì)ＢＶ－２活力的影響。將??ＢＶ－２細(xì)胞按照５ｘｌ〇３每孔的密度接種到９６孔板中，每孔加細(xì)胞培養(yǎng)液１００?ｐＬ，??３７°Ｃ二氧化碳培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)。２４?ｈ后觀察細(xì)胞貼壁及生長(zhǎng)情況，小心吸棄９６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]線粒體自噬的研究方法[J]. 張迎梅,邱倩,漆永梅.  蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(05)
[2]雌激素調(diào)節(jié)能量代謝的神經(jīng)元保護(hù)作用[J]. 沈麗霞,張丹參.  神經(jīng)藥理學(xué)報(bào). 2012(01)
[3]線粒體與神經(jīng)退行性疾病[J]. 周曉雯,蘇朝芬,羅煥敏.  神經(jīng)藥理學(xué)報(bào). 2011(03)

碩士論文
[1]產(chǎn)前暴露于納米氧化鋅對(duì)大鼠子代腦發(fā)育及成年期行為學(xué)特性的影響[D]. 馮曉黎.南方醫(yī)科大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3143639