本文關(guān)鍵詞：京尼平交聯(lián)兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料結(jié)構(gòu)完整性、免疫原性及生物力學(xué)性能的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前,脫細(xì)胞技術(shù)廣泛應(yīng)用于器官重建基質(zhì)材料制備的研究。本文旨在通過去污劑-聯(lián)合酶法(detrgent-enzymatic method, DEM)對新西蘭兔氣管實(shí)施脫細(xì)胞處理,研究經(jīng)脫細(xì)胞處理后氣管基質(zhì)材料結(jié)構(gòu)完整性、免疫原性及生物力學(xué)性能的變化；并通過對脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料進(jìn)行京尼平交聯(lián),研究經(jīng)交聯(lián)后氣管基質(zhì)材料生物相容性、生物力學(xué)性能及血管再生性能的變化。本研究內(nèi)容包括以下二部分：第一部分去污劑-聯(lián)合酶法行兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料的制備及性能評價目的：研究兔氣管支架最佳脫細(xì)胞周期,進(jìn)行氣管基質(zhì)材料細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)及生物力學(xué)性能評價。方法：選取50只健康新西蘭兔,體質(zhì)量2.5～3.0 kg,雌雄不限。隨機(jī)數(shù)字表法分為10組(n=5),A組5只氣管作為新鮮對照組,B、C、D, E、F、G、H、L J組對應(yīng)脫細(xì)胞1、3、5、6、7、8、9周期組、異體移植組、異體移植對照組。通過去污劑-聯(lián)合酶法(DEM)分別對氣管進(jìn)行周期脫細(xì)胞處理,通過HE染色、Movat五色染色、DAPI染色顯微鏡觀察,掃描電鏡(scanning electron microscope,SEM)觀察,以及生物力學(xué)性能測定,遴選出最佳脫細(xì)胞周期。選取原生氣管基質(zhì)材料及最佳脫細(xì)胞周期氣管基質(zhì)材料,應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測主要組織相容性復(fù)合體第二型(major histocompatibility complex class Ⅱ, MHC-Ⅱ)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的表達(dá),番紅O染色觀察,糖胺聚糖(glycoasminoglycan, GAG)含量、細(xì)胞含量以及DNA含量檢測。結(jié)果：與對照組相比,經(jīng)7個DEM循環(huán)之后組織工程基質(zhì)細(xì)胞核溶解、極少數(shù)細(xì)胞核殘留,組織結(jié)構(gòu)未見明顯破壞；組織學(xué)與分子生物學(xué)分析顯示,細(xì)胞成分及細(xì)胞核物質(zhì)近乎全部去除；SEM顯示脫細(xì)胞基質(zhì)依然保持完整的結(jié)構(gòu)體系：生物力學(xué)性能檢測顯示脫細(xì)胞并未對基質(zhì)形態(tài)學(xué)及機(jī)械性能產(chǎn)生明顯影響；免疫熒光分析顯示脫細(xì)胞氣管基質(zhì)細(xì)胞核物質(zhì)顯著減少(P0.05)；DNA量化結(jié)果顯示：脫細(xì)胞基質(zhì)中DNA含量為(42.39±6.66)ng/mg,與原生組織(586.78± 53.56)ng/ml相比,減少92.78%(P0.01)。結(jié)論：通過7個周期DEM處理,能夠有效獲取長段低免疫原性兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料,具有與原生氣管相似的結(jié)構(gòu)特征及生物力學(xué)性能,是一種較為理想的氣管基質(zhì)支架材料。第二部分 京尼平交聯(lián)對兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料生物力學(xué)性能及血管生成的影響目的：對經(jīng)DEM法脫細(xì)胞處理的氣管基質(zhì)材料進(jìn)行京尼平交聯(lián),研究京尼平對脫細(xì)胞氣管基質(zhì)生物力學(xué)性能及血管生成性能的影響。方法：采用去污劑-聯(lián)合酶法(DEM)對新西蘭兔氣管行脫細(xì)胞處理,用京尼平交聯(lián),對交聯(lián)后的基質(zhì)材料行生物力學(xué)測試、雞胚絨毛尿囊膜(chicken embryo chorioallantoic membrane, CAM)血管再生實(shí)驗(yàn)及氣管基質(zhì)材料異體移植實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果：與原生樣本及脫細(xì)胞樣本相比,1%京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料彈性模量明顯增加(P0.05)；經(jīng)1%京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料能夠顯著誘導(dǎo)血管生成；異體移植實(shí)驗(yàn)顯示,1%京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料體內(nèi)異體移植未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤。結(jié)論：京尼平交聯(lián)能夠有效提高脫細(xì)胞氣管基質(zhì)生物力學(xué)性能,且不影響脫細(xì)胞氣管基質(zhì)血管生成性能,也不誘發(fā)體內(nèi)炎性反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：氣管 脫細(xì)胞 細(xì)胞外基質(zhì) 京尼平 血管生成 力學(xué)性能
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-11
• 符號說明11-12
• 引言12-14
• 第一部分 去污劑-聯(lián)合酶法行兔脫細(xì)胞組織工程氣管的制備及其性能評價14-26
• 1 材料15-16
• 1.1 主要儀器設(shè)備15
• 1.2 標(biāo)本和主要試劑15-16
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物15-16
• 1.2.2 試劑耗材16
• 1.2.3 試劑盒16
• 2 方法16-20
• 2.1 主要試劑配制16-17
• 2.2 制備脫細(xì)胞氣管支架17
• 2.3 組織病理學(xué)、免疫熒光學(xué)分析17
• 2.4 掃描電子顯微鏡觀察17
• 2.5 冰凍切片免疫組織化學(xué)分析17-18
• 2.6 細(xì)胞含量測定18
• 2.7 糖胺聚糖(GAG)生物化學(xué)含量測定18-19
• 2.7.1 GAG提取18
• 2.7.2 GAG含量測定18-19
• 2.8 DNA量化19-20
• 2.9 生物力學(xué)測試20
• 2.10 氣管基質(zhì)異體移植20
• 2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理20
• 3 結(jié)果20-22
• 3.1 大體標(biāo)本觀察20
• 3.2 免疫熒光觀察20
• 3.3 組織學(xué)觀察20-21
• 3.4 掃描電鏡觀察21
• 3.5 免疫組化分析21
• 3.6 生物力學(xué)檢測21
• 3.7 細(xì)胞含量及DNA含量分析21
• 3.8 GAG量化結(jié)果比較21
• 3.9 體內(nèi)異體移植實(shí)驗(yàn)21-22
• 4 討論22-24
• 參考文獻(xiàn)24-26
• 第二部分 京尼平交聯(lián)對兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料生物力學(xué)性能及血管生成的影響26-36
• 1 材料27-28
• 1.1 主要儀器設(shè)備27
• 1.2 標(biāo)本和主要試劑27-28
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物27-28
• 1.2.2 試劑耗材28
• 1.2.3 試劑盒28
• 2 方法28-30
• 2.1 主要試劑配制28
• 2.2 制備脫細(xì)胞氣管支架28-29
• 2.3 組織病理學(xué)、免疫熒光學(xué)分析29
• 2.4 京尼平處理29
• 2.5 掃描電子顯微鏡觀察29
• 2.6 生物力學(xué)測試29-30
• 2.7 氣管基質(zhì)體內(nèi)血管生成30
• 2.8 氣管基質(zhì)異體移植30
• 2.9 受體組織分析30
• 2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理30
• 3 結(jié)果30-31
• 3.1 脫細(xì)胞氣管基質(zhì)特征30-31
• 3.2 掃描電鏡觀察31
• 3.3 生物力學(xué)性能31
• 3.4. 體內(nèi)血管再生性能觀察31
• 3.5. 體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)31
• 4 討論31-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 附：相關(guān)圖片36-49
• 全文總結(jié)49-50
• 特色與創(chuàng)新50-51
• 綜述一 體內(nèi)原位組織工程氣管干細(xì)胞種植的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展51-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 綜述二 京尼平交聯(lián)在胸心外科組織工程領(lǐng)域的應(yīng)用與研究進(jìn)展58-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 綜述三 組織工程氣管體內(nèi)原位移植的研究進(jìn)展66-74
• 參考文獻(xiàn)70-74
• 綜述四 組織工程氣管細(xì)胞來源與應(yīng)用的研究進(jìn)展74-80
• 參考文獻(xiàn)77-80
• Article Ⅰ Structural integrity, immunogenicity and biomechanical evaluation of rabbitdecelluarized tracheal matrix80-103
• References92-103
• 致謝103-104
• 攻讀碩士學(xué)位期間科研成果104-106

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本文編號：311362