發(fā)布時(shí)間：2021-03-24 05:17

　　目的:關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)一直是臨床治療的難題,已有研究表明kartogenin（KGN）能夠有效促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化,進(jìn)而修復(fù)軟骨缺損。本實(shí)驗(yàn)旨在構(gòu)建一種基于軟骨細(xì)胞外基質(zhì)（CECM）的能夠緩釋KGN的復(fù)合支架,將KGN的促進(jìn)作用與CECM多孔支架的優(yōu)勢性能結(jié)合起來,達(dá)到既能緩釋KGN,延長其作用時(shí)間,又能維持支架內(nèi)部細(xì)胞保持較高活性的目的,為KGN的應(yīng)用提供新的思路和方向。方法:1.采用乳化法制備PLGA微球,采用超聲法制備PLGA納米球,通過掃描電鏡（SEM）或透射電鏡（TEM）觀察微球或納米球的形態(tài),通過Nano zs90觀察粒徑尺寸分布。采用高效液相色譜法測定KGN濃度,對比兩種粒子負(fù)載KGN的載藥量和包封率,篩選出PLGA微球進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將豬膝關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行脫脂、脫細(xì)胞等處理提取CECM,配制成3%勻漿后與適量PLGA微球充分混勻,采用冷凍干燥法制備PLGA（KGN）/CECM復(fù)合支架。為了驗(yàn)證此支架對KGN的緩釋效果,制備KNG與CECM勻漿直接復(fù)合的支架作為對照組,對比兩種支架緩釋KGN的效果差異。將KGN/CECM與PLGA（KGN）/CECM這兩種負(fù)載KG... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CECM與PLGA微球復(fù)合模式圖

圖 1.4 KGN 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖表 2 所示，設(shè)置每組 n=3，PLGA 微球樣品 280nm 處吸收峰面積869.4，即 Y=744869.4，代入公式得到 X=184.36μg/ml，PLGA 微球總體積為6.5ml，則樣品中KGN含量為1.2mg�？偼度隟GN含量為 含量為 20mg，則包封率=1.2/1.5×100%=80%，載藥量=1.2/（1.2+=5.6%。樣方法計(jì)算 PLGA 納米球的包封率和載藥量，得到 280nm 處吸收為 127，即 Y=127，代入公式得到 X=13.3μg/ml，PLGA 納米球懸積為 6.5ml，則樣品中 KGN 含量為 0.086mg�？偼度� KGN 含量為 含量為 20mg，則包封率=0.086/1.5×100%=5.7%，載藥量=0.086/（1=0.4%（表 2，圖 1.5）。此比較可發(fā)現(xiàn)，此方法制備的 PLGA 包封率和載藥量均高于 PLG此選用 PLGA 微球進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖 1.5 PLGA 微球和納米球包封率和載藥量1.2.4 CECM 復(fù)合支架體系的表征1.2.4.1 PLGA（KGN）/CECM 體系的制備如圖所示（圖 1.6），（A）為豬膝關(guān)節(jié)軟骨切取部位，（B）為切下骨片，（C）為經(jīng)過組織勻漿機(jī)低溫粉碎后得到的較為細(xì)致的組織勻漿，前經(jīng)過仔細(xì)清洗，因此勻漿中不摻雜血液以及骨組織等其他成分；（D）溫下經(jīng)過四次差速離心獲得的最細(xì)致的組織勻漿，無肉眼可見的明顯軟骨勻漿具有粘稠性和緩慢流動(dòng)性；（E）為經(jīng)過 1%Triton-X100 的 Tris-HCL處理 24 小時(shí)后的組織勻漿，溶液中產(chǎn)生大量泡沫，除此之外大體觀無明顯（F）為脫脂處理后經(jīng)過高速離心和反復(fù)清洗后得到的組織勻漿沉淀物，可骨勻漿呈白色半透明狀，肉眼觀光滑細(xì)膩無任何可見雜志或顆粒，具有更粘稠度和緩慢的流動(dòng)性；（G）為脫脂后的組織勻漿經(jīng)過 DNA 酶和 RNA合液處理后得到的混合物，可見混合液較上一階段更為透明；（H）為酶

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)源性微粒的制備及生物相容性評估[D]. 李丙巖.中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院 2014



本文編號(hào)：3097132