發(fā)布時間：2021-02-27 21:07

　　第一部分香草醛交聯(lián)rhBMP-2/殼聚糖微球的制備及其對間充質(zhì)干細胞的影響研究背景：RhBMP-2是一種重要的骨誘導活性蛋白,它在體內(nèi)具有很強的誘導骨組織生成的能力。而既往的研究表明rhBMP-2在體內(nèi)的釋放模式對其誘導成骨的作用具有重要的影響,rhBMP-2早期的突釋結(jié)合后期的持續(xù)釋放較短時間大劑量釋放能夠更高效的誘導骨組織生成。殼聚糖是一種來源廣泛的天然生物材料,具有良好的生物相容性,它可作為許多細胞因子的緩釋載體。同時香草醛與傳統(tǒng)的交聯(lián)劑（戊二醛等）相比生物相容性更好。因此用香草醛為交聯(lián)劑有可能制備出生物相容性更好,且具有良好緩釋性能的rhBMP-2/殼聚糖微球。目的：以香草醛為交聯(lián)劑來制備rhBMP-2/殼聚糖微球,明確該微球在體外rhBMP-2的緩釋性能,并且明確微球緩釋的rhBMP-2對骨髓間充質(zhì)干細胞的影響。方法：利用乳化交聯(lián)法來制備包載rhBMP-2的殼聚糖微球,用電鏡觀察微球的形態(tài)。以微球浸提液為實驗組,以空白培養(yǎng)基為對照組來培養(yǎng)人間充質(zhì)干細胞,以檢測微球的細胞毒性和對細胞增殖的影響。用動態(tài)浸泡的方法來檢測rhBMP-2的體外釋放特征。通過比較緩釋3天和7天獲取的微球... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１：掃描電鏡觀察合成微球的形貌??．?－

??的釋放量最大（２５４．０６±％．１９ｎｇ／ｍＬ）（如圖２所示），呈現(xiàn)突釋效應�；拢停校�??的釋放速度隨著時間的延長逐漸下降。到第１９天測得的緩釋液中ｒｈＢＭＰ－２的濃??度為２１６．?１４?＋?２０．?ＯＯｎｇ／ｍＬ。緩釋１９天累積釋放的ｒｈＢＭＰ－２的含量約占３９．?６％。??３００?］??２５０?－?■■??－圓?ｉ??１?２００?－?＾?Ｔ?■??疆巧。Ａ丄Ｉ?Ｉ?Ｉ??ＩＩ??Ｑ?Ｊ＿＿＿１１Ｍ，，……Ｉ；纖齡Ｈ?ＨＨＬ???ｉｎｎ?１１１?ＨＨ?ＩＩＭ?ＨＨ．??１?３?５?７?１０?１４?１９??時間／天??圖２．每個時間點收集的緩釋液濃度，結(jié)果表示為Ｘ±Ｓ，ｎ＝３。??４．?ＡＬＰ活性檢測??為了檢測所包載的ｒｈＢＭＰ－２是否還具有成骨誘導活性，本實驗將ｒｈＢＭＰ－２的??緩釋液與ｈＭＳＣｓ細胞共培養(yǎng)７天，結(jié)果表明緩釋３天與緩釋７天所收集的緩釋液??均能夠促進ｈＭＳＣｓ細胞堿性碟酸酶活性的増高（分別為０．?５０４?＋?０．?０６日和０．?６８４??±?０．０６０?Ｕ?ｍｏｌ?ｐＮＰＰ／ｍｉｎ／ｍｇ?ｐｒｏｔｅｉｎ?），與對照組（０．?１３５?±?０．０１１?ｙ?ｍｏｌ??ｐＮＰＰ／ｍｉｎ／ｍｇ?ｐｒｏｔｅｉｎ）相比有盈著性差異（八０．０５）。并且緩釋７天組謗導細胞??表達的ＡＬＰ活性較緩釋３天組高（代０．?０５）。??討論??人骨形態(tài)形成蛋白屬于轉(zhuǎn)化成生長因子－目（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ??ｇ

本研究Ｗ膠原為媒介，將香草酸交聯(lián)的ｒｈＢＭＰ－２殼聚糖微球粘附于多孔??矮基磯灰石支架的表面，使所制各的ＨＣＣ支架能夠逐漸的緩釋ｒｈＢＭＰ－２促??進骨組織長入ＨＡ支架內(nèi)部，模式圖如圖１所示。??２．２．１?膠原徐層?ＨＡ?支架的蒂�。蕚洌ǎ龋粒茫铮欤欤幔纾澹�?ｓｃａｆｆｏｌｄ，?ＨＣ）??將Ｉ型牛膠原溶解于己酸（化０５Ｍ）溶液中，待膠原充分洛解后，用氨氧??化鋼溶液將ＰＨ調(diào)節(jié)至中性，用ＭＥＳ緩沖液將膠原溶液濃度調(diào)節(jié)為Ｏ．ｌｇ／ｍｌ，??將高溫蒸汽滅菌的ＨＡ支架浸入膠原溶解中浸泡化。將溶解于ＭＥＳ水中的??ＥＤＣ和ＮＨＳ加入上述膠原溶液中使最終濃度為２．５?ｍｇ／ｍｌ?ＥＤＣ和０．６３?ｍｇ／ｍｌ??ＮＨＳ對膠原進行交聯(lián)［１氣然后將吸附有膠原溶液的支架取出，在室溫下真空??干燥２４小時，然后用ＰＢＳ水輕柔的沖洗支架２次，在室溫下真空干燥２４小??時后，于－２０°低溫冷凍保存，Ｗ上均在無菌的條件下進行。??２．２．２?膠原／ｒｈＢＭＰ－２?殼聚糖微球支架的制備（ＨＡ／Ｃｏｌｌａｇｅｎ／ＲｈＢＭＰ－２?ｃｈｉｔｏｓａｎ??ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ?ｓｃａｆｆｏｌｄ?，?ＨＣＣ）??本實驗用滴加的方法將微球與膠原／ＨＡ支架復合


本文編號：3054800