由于創(chuàng)傷、腫瘤及退行性變等各種原因導致的關節(jié)軟骨損傷在臨床上常見,然而由于軟骨細胞屬于終末分化細胞,軟骨本身缺乏血管營養(yǎng)等原因導致軟骨組織很難自身修復,從而容易導致關節(jié)功能障礙乃至骨關節(jié)炎的發(fā)生；目前臨床上修復關節(jié)軟骨損傷常用的方法如關節(jié)腔清理術、關節(jié)磨削成形術、軟骨下骨鉆孔術及微骨折術等均存在一定不足,而白體或異體軟骨細胞移植也存在來源受限及不同程度免疫排斥等問題；比較而言,軟骨組織工程無疑是最有發(fā)展前景的前沿技術。本課題通過研究人臍帶沃頓膠組織來源間充質干細胞的分離培養(yǎng)及擴增探討新型組織工程種子細胞來源；并對骨髓及臍帶來源干細胞的成軟骨定向誘導分化能力進行比較研究,從而優(yōu)化選擇軟骨組織工程種子細胞。制備新型殼聚糖/P（LLA-CL）軟骨組織工程多孔支架,根據(jù)組織工程的基本原理體外構建組織工程軟骨,以期為軟骨組織工程的深入研究和發(fā)展提供一定的理論依據(jù)和實驗基礎。第一章人臍帶間充質干細胞的分離、培養(yǎng)及生物學特性研究目的研究人臍帶沃頓膠來源間充質干細胞的分離、培養(yǎng)并對其進行鑒定,對其生物學特性進行初步研究,為組織工程種子細胞研究提供實驗基礎。方法無菌獲取胎兒臍帶沃頓膠組織,采用混合酶消化... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞簡表
前言
第一章 人臍帶間充質干細胞的分離、培養(yǎng)及生物學特性研究
    1.1 材料與方法
        1.1.1 主要試劑與儀器
        1.1.2 方法與步驟
    1.2 結果
        1.2.1 臍帶間充質干細胞的形態(tài)特征
        1.2.2 細胞周期檢測
        1.2.3 臍帶間充質干細胞的表面抗原
        1.2.4 臍帶間充質干細胞的生長曲線
        1.2.5 臍帶干細胞分化潛能檢測
    1.3 討論
    1.4 結論
第二章 人臍帶與骨髓來源間充質干細胞成軟骨特性比較
    2.1 材料與方法
        2.1.1 主要試劑與儀器
        2.1.2 實驗方法與步驟
        2.1.3 統(tǒng)計學處理
    2.2 結果
        2.2.1 臍帶間充質干細胞定向誘導后形態(tài)變化
        2.2.2 定向誘導成軟骨后甲苯胺藍染色
        2.2.3 Ⅱ型膠原蛋白免疫組化染色
        2.2.4 RT-PCR檢測成軟骨特異性基因表達
    2.3 討論
    2.4 結論
第三章 殼聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架的制備及生物相容性研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 實驗動物
        3.1.4 實驗方法與步驟
        3.1.5 統(tǒng)計學處理
    3.2 結果
        3.2.1 殼聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架材料形態(tài)觀察
        3.2.2 理化性能檢測結果
        3.2.3 細胞復合支架材料觀察
        3.2.4 細胞-支架復合培養(yǎng)電鏡掃描結果
        3.2.5 MTT檢測支架對細胞增殖的影響
        3.2.6 殼聚糖/P（LLA-CL）多孔泡沫支架細胞黏附率測定
        3.2.7 動物植入實驗
    3.3 討論
    3.4 結論
第四章 HUMSCS復合殼聚糖/P（LLA-CL）多孔支架體外構建組織工程軟骨
    4.1 材料與方法
        4.1.1 主要試劑與儀器
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 實驗方法與步驟
        4.1.4 統(tǒng)計學處理
    4.2 結果
        4.2.1 細胞-材料復合體形態(tài)觀察
        4.2.2 組織化學及免疫組化染色
        4.2.3 RT-PCR檢測Sox-9、Co12a1及aggrecan mRNA表達
        4.2.4 Western-blot檢測前CoL2a1及aggrecan蛋白表達
    4.3 討論
    4.4 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人臍帶Wharton膠中間充質干細胞體外無支架組織工程軟骨的構建[J]. 侯克東,袁玫,張莉,郭全義,彭江,眭翔,趙斌,劉舒云,盧世璧.  中國組織工程研究與臨床康復. 2010(37)
[2]人臍帶Wharton’s jelly源間充質干細胞培養(yǎng)中堿性成纖維細胞生長因子的作用[J]. 巴云濤,關方霞,胡祥,楊波,杜英,張?zhí)煜?田毅,喬曉俊,王成春,谷晨熙,雷寧靜,王曉薇.  中國組織工程研究與臨床康復. 2010(19)
[3]細胞因子表達譜在人臍帶Wharton膠間質干細胞誘導分化成軟骨細胞的變化[J]. 侯克東,郭全義,張莉,袁玫,眭翔,汪愛媛,許文靜,劉舒云,盧世璧.  中國矯形外科雜志. 2009(21)
[4]關節(jié)軟骨組織工程種子細胞的研究進展[J]. 張世浩,朱立新.  中國修復重建外科雜志. 2008(12)
[5]包埋PLGA微球殼聚糖支架的構建及其對蛋白釋放的調(diào)節(jié)[J]. 韓鋼,陳海靚,孫曉譯,高建青,梁文權.  藥學學報. 2006(06)
[6]人臍帶間充質干細胞移植對大鼠脊髓損傷神經(jīng)功能恢復的評價[J]. 王革生,張慶俊,韓忠朝.  中華神經(jīng)外科雜志. 2006(01)
[7]Human umbilical cord Wharton’s Jelly-derived mesenchymal stem cells differentiation into nerve-like cells[J]. MA Lian, FENG Xue-yong, CUI Bing-lin, Frieda Law, JIANG Xue-wu,YANG Li-ye, XIE Qing-dong and HUANG Tian-huaDepartment of Pediatrics, Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College , Shantou 515041, China Shantou University Medical College, Shantou 515041,China Department of Neurosurgery, Chaozhou Central Hospital, Chaozhou 521021, China Research Center for Reproductive Medicine of Shantou University Medical College, Shantou 515041, China.  Chinese Medical Journal. 2005(23)
[8]組織工程骨的研究成果及存在的問題[J]. 楊志明.  中國修復重建外科雜志. 2005(02)
[9]Structure and function of aggrecan[J]. CHRIS KIANI, LIWEN CHEN, YAO JIONG WU, ALBERT J YEE, BURTON B YANG, Sunnybrook and Women’s College Health Sciences Centre and Department of Laboratory Medicine and Patobiology, 2 Department of Surgeny, Faculty of Medicine, University of Toronto, Canada.  Cell Research. 2002(01)



本文編號：3053899