豬小腸黏膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)（SⅠS,Small intestinal submucosa）的主要成分為Ⅰ、Ⅲ型膠原,擬建立一種基于液相質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）的膠原類(lèi)型識(shí)別和定量檢測(cè)方法。首先利用胰蛋白酶將膠原標(biāo)準(zhǔn)品和樣品酶解,利用離子阱質(zhì)譜（Ⅰon trap mass spectrometry, LCQ）識(shí)別出Ⅰ、Ⅲ型膠原的特征多肽分別為GETGPAGPAGPVGPVGAR、GPPGAVGPSGPR,再利用三重四極桿質(zhì)譜（Triple quadrupole mass spectrometry, TSQ）對(duì)其進(jìn)行定量;然后通過(guò)膠原標(biāo)準(zhǔn)品濃度和峰面積的線(xiàn)性關(guān)系計(jì)算Ⅰ、Ⅲ型膠原的含量。結(jié)果表明VⅠDASⅠS^TM和Biodesign^?中Ⅰ、Ⅲ型膠原的含量總和與高效液相色譜法檢測(cè)結(jié)果一致,通過(guò)HPLC-MS檢測(cè)豬跟腱和真皮中Ⅰ、Ⅲ型膠原含量的結(jié)果符合其在組織中的分布規(guī)律;方法學(xué)實(shí)驗(yàn)表明HPLC-MS的精密度（RSD=2.38%）較高、穩(wěn)定性良好。 

【文章來(lái)源】：生物學(xué)雜志. 2020,37(05)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【部分圖文】：

豬膠原標(biāo)準(zhǔn)品酶解多肽總離子流圖

采用上述方法得到豬I、III型膠原的特征多肽分別為GETGPAGPAGPVGPVGAR、GPPGAVGPSGPR。圖 2和圖 3分別為豬I型膠原標(biāo)準(zhǔn)品特征多肽經(jīng)質(zhì)譜分析后獲得的提取離子流圖以及二級(jí)質(zhì)譜圖。2.2.2 豬膠原特征多肽濃度與信號(hào)強(qiáng)度關(guān)系

分別對(duì)豬I、III型膠原特征多肽的目標(biāo)離子m/z 773.9和533.09進(jìn)行選擇離子監(jiān)測(cè),以樣品濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)作線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)。圖4和圖5分別為豬I型膠原特征多肽GETGPAGPAGPVGPVGAR的提取離子流圖和線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)[y=171.04x+4.154(R2=0.9984)],二者線(xiàn)性關(guān)系良好。利用相同的方法得到豬III型膠原的線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)為y=41.54x+1.63(R2=0.9981)。按照1.2.2中的方法處理樣品,進(jìn)行定量分析。2.2.3 豬不同組織ECM中膠原類(lèi)型及含量檢測(cè)結(jié)果分析

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3049299