目的:制備負載NGF的可注射殼聚糖透明質(zhì)酸復(fù)合水凝膠,探討其理化性能以及生物相容性。方法:首先京尼平交聯(lián)制備殼聚糖透明質(zhì)酸復(fù)合水凝膠材料,采用倒置法檢測凝膠時間;掃描電鏡觀察材料形態(tài)結(jié)構(gòu);NGF釋放實驗、體外溶脹以及降解實驗等檢測凝膠材料的物理化學(xué)性能;通過MTT實驗、NGF活性檢測、材料與細胞共培養(yǎng)檢測凝膠材料生物學(xué)性能。結(jié)果:在37℃條件下,可注射凝膠材料凝膠時間在37min左右,凝膠材料為多孔網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu),凝膠材料8周最多能夠降解76%,緩釋21天的NGF具有生物活性,凝膠材料能促進RSC96細胞的粘附、增殖、遷移以及細胞活性物質(zhì)的釋放。結(jié)論:京尼平交聯(lián)的殼聚糖透明質(zhì)酸水凝膠具有良好的生物相容性,能作為NGF的載體材料,具有成為神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)填充材料的潛能。 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2018,38(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

不同凝膠材料的紅外光譜圖分析Fig．1FTIＲspectraofdifferentgelmaterials

2018，38(4)段思騰等:負載NGF的可注射殼聚糖透明質(zhì)酸水凝膠材料理化性能及生物相容性研究圖2凍干CS-HA凝膠掃描電鏡觀察Fig．2TheSEMimagesofCS-HAhydrogels(a)GroupA(b)GroupB(c)GroupC(d)GroupD(1000×)scalebar:30μm水凝膠降解曲線如圖3(b)所示，A～D組在第7天的降解率分別為30．91±1．58%、27．98±2．44%、27．13±2．26%與28．20±1．98%，CS-HA未交聯(lián)部位在生物酶的作用下快速降解，降解速率明顯加快，在7天以后，CS-HA的降解需要克服化學(xué)鍵抵抗，降解速率減慢，隨著GN含量的增加，凝膠結(jié)構(gòu)致密，抗酶解作用增強，A～D組的降解速率逐漸降低。A～D組降解速率組間比較(P＜0．005;有統(tǒng)計學(xué)意義)，表明改變GN含量，在一定范圍內(nèi)CS-HA凝膠材料的降解率可以調(diào)控。2．5NGF釋放試驗?zāi)z材料NGF累計釋放量見圖4所示，NGF釋放主要存在兩個階段，第一階段:0～1天，NGF釋放速率是整個階最大釋放率，A～D組分別為33．72±2．16%、31．32±4．22%、28．95±3．96%、29．05±1．48%。第二圖3CS-HA溶脹比率與降解率時間動態(tài)圖Fig．3TheswellinganddegradationofCS-HAhydrogelstimedynamicgraph(a)TheswellingratioofCS-HAhydrogels(b)TheweightlossofCS-HAhydrogels階段:1～21天，隨著CS-HA材料的持續(xù)降解，NGF釋放速率保持在一個穩(wěn)定的高水平，其中A組釋放總量最多，達到79．21±2．51%，而D組總量釋放最少，為71．26±2．89%。在21天以后，NGF釋放量基本達到穩(wěn)定狀態(tài)，僅有微量增長，CS-HA對NGF的有效緩釋能達

A的降解需要克服化學(xué)鍵抵抗，降解速率減慢，隨著GN含量的增加，凝膠結(jié)構(gòu)致密，抗酶解作用增強，A～D組的降解速率逐漸降低。A～D組降解速率組間比較(P＜0．005;有統(tǒng)計學(xué)意義)，表明改變GN含量，在一定范圍內(nèi)CS-HA凝膠材料的降解率可以調(diào)控。2．5NGF釋放試驗?zāi)z材料NGF累計釋放量見圖4所示，NGF釋放主要存在兩個階段，第一階段:0～1天，NGF釋放速率是整個階最大釋放率，A～D組分別為33．72±2．16%、31．32±4．22%、28．95±3．96%、29．05±1．48%。第二圖3CS-HA溶脹比率與降解率時間動態(tài)圖Fig．3TheswellinganddegradationofCS-HAhydrogelstimedynamicgraph(a)TheswellingratioofCS-HAhydrogels(b)TheweightlossofCS-HAhydrogels階段:1～21天，隨著CS-HA材料的持續(xù)降解，NGF釋放速率保持在一個穩(wěn)定的高水平，其中A組釋放總量最多，達到79．21±2．51%，而D組總量釋放最少，為71．26±2．89%。在21天以后，NGF釋放量基本達到穩(wěn)定狀態(tài)，僅有微量增長，CS-HA對NGF的有效緩釋能達21天，說明CS-HA是NGF良好的載體材料。A～D組NGF釋放率組間比較(P＜0．005;有統(tǒng)計學(xué)意義)，表明改變凝膠材料GN濃度，能夠改變NGF釋放速率。2．6NGF生物活性測定由圖5可見，(a)組正常PC12，為不規(guī)則半貼壁細胞。(b～i)組不同時間點釋放的NGF均能夠誘導(dǎo)PC12細胞呈現(xiàn)神經(jīng)細胞表型，計數(shù)陽性細胞比例，分別與a組(陰性對照)相比(P＜0．005;有統(tǒng)計學(xué)意義)，說明CS-HA緩釋1～21天的NGF均具有生物活性。由此得出CS-HA能夠持續(xù)有效緩釋NGF。?


本文編號：3007646