本文關(guān)鍵詞：光動(dòng)力療法對(duì)MRSA及其生物被膜作用的體外實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究新型光敏劑亞芐基環(huán)戊酮化合物(P2)介導(dǎo)的光動(dòng)力療法(Photodynamic therapy, PDT)對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)及其生物被膜的體外作用。方法(1)將3株MRSA臨床菌株配制成濃度為2× 108CFU/ml的細(xì)菌懸液,與濃度為5、10、20、50μM的光敏劑P2溶液等體積混勻,孵育30 min,用波長(zhǎng)為532 nm、功率密度40 mW/cm2的連續(xù)激光照射10 min,能量密度為24 J/cm2。并設(shè)空白對(duì)照組、單純光敏劑組及單純光照組。每組3個(gè)樣本,重復(fù)3次。處理后即刻采用稀釋平板法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),評(píng)價(jià)P2-PDT對(duì)MRSA浮游菌的體外殺傷效果。(2)培養(yǎng)MRSAO生物被膜,按方法(1)進(jìn)行P2-PDT處理(P2濃度為10 gM)。處理后,采用SYTO9(標(biāo)記活細(xì)菌,顯示綠色熒光)、PI(標(biāo)記死細(xì)菌,顯示紅色熒光)熒光探針標(biāo)記膜內(nèi)細(xì)菌,通過激光共聚焦顯微鏡觀察生物被膜內(nèi)細(xì)菌的死亡情況。培養(yǎng)MRSAO生物被膜,按方法(1)進(jìn)行P2-PDT處理(P2濃度為10、25μM),并設(shè)空白對(duì)照組、單純光敏劑組及單純光照組。每組6個(gè)樣本,重復(fù)3次。處理后,采用XTT法檢測(cè)生物被膜內(nèi)細(xì)菌的存活率。(3)培養(yǎng)MRSAO生物被膜,按方法(1)進(jìn)行P2-PDT處理(P2濃度為10、25μM)。采用結(jié)晶紫染色法光鏡下觀察生物被膜致密度、菌落形態(tài)以及網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的變化,并用酶標(biāo)儀定量檢測(cè)生物被膜的破壞程度。采用FITC-Cona(產(chǎn)生綠色熒光)熒光探針標(biāo)記被膜中的多糖,通過激光共聚焦顯微鏡觀察多糖的變化。在微孔濾膜管內(nèi)培養(yǎng)MRSAO生物被膜,按方法(1)對(duì)其進(jìn)行P2-PDT處理(P2濃度為10μM),處理后加入10μg/ml左氧氟沙星(Levofloxacin, LVFX)溶液400μ1,孵育6小時(shí)后采用高壓液相色譜儀檢測(cè)透過生物被膜的LVFX的濃度。并設(shè)空白對(duì)照組。每組6個(gè)樣本。(4) P2-PDT與LVFX聯(lián)合殺傷生物被膜內(nèi)細(xì)菌在96孔板中進(jìn)行,按方法(1)對(duì)MRSAO生物被膜進(jìn)行P2-PDT處理后(P2濃度為10μM),分別加入濃度為10μg/ml與20μg/ml的LVFX溶液,24 h后XTT法檢測(cè)生物被膜內(nèi)細(xì)菌的存活率。并設(shè)空白對(duì)照組、單純LVFX組及單純PDT組。每組6個(gè)樣本。比較各組細(xì)菌存活率。結(jié)果(1) P2-PDT對(duì)3株MRSA臨床菌株均有不同程度的殺傷作用。當(dāng)光敏劑P2濃度為5μM時(shí),3株MRSA臨床菌株的菌落數(shù)均下降3 log1o以上,達(dá)到有效殺傷；P2濃度為10μM時(shí),達(dá)到最大殺傷。(2)激光共聚焦顯微鏡觀察到,經(jīng)P2-PDT處理的生物被膜內(nèi)綠色熒光的平均強(qiáng)度(299.84 a.u. ± 53.39 a.u.)明顯弱于對(duì)照組(485.44 a.u. ± 120.21 a.u.) (P 0.01),在綠色熒光與紅色熒光的混合圖像中,綠色熒光所占比例(31.87%±6.25%)明顯低于空白對(duì)照組(61.67%±11.07%)(P0.01),表明生物被膜內(nèi)細(xì)菌死亡數(shù)量增加。XTT結(jié)果顯示,PDT后生物被膜內(nèi)細(xì)菌存活率明顯下降,P2濃度25μM組的殺菌作用強(qiáng)于10 μM組(P0.05),25μM組細(xì)菌存活率為6.25%±1.7%,10 μM組細(xì)菌存活率為15.77%±3.5%。(3)光鏡下可見PDT后生物被膜致密度降低,菌落變得稀疏,呈點(diǎn)狀分布,菌落間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)消失,光敏劑濃度25 μM組破壞程度強(qiáng)于10μM組。定量分析發(fā)現(xiàn),PDT組的OD值低于空白對(duì)照組,且P2濃度25 μM組的OD值(1.046±0.157)明顯低于10μM濃度組(1.283±0.280)(P0.01)。激光共聚焦顯微鏡觀察到,經(jīng)P2-PDT處理的生物被膜內(nèi)的綠色熒光強(qiáng)度(183.41 a.u.± 0.31 a.u.)明顯弱于空白對(duì)照組(474.57 a.u.± 117.26 a.u.)(P0.01),表明生物被膜內(nèi)多糖減少。經(jīng)P2-PDT處理后,生物被膜對(duì)LVFX的滲透性增強(qiáng),即PDT組LVFX濃度為2.016± 0.348μg/ml,空白對(duì)照組為1.602±0.474μg/ml (P 0.01).(4) P2-PDT與LVFX聯(lián)合應(yīng)用對(duì)生物被膜內(nèi)細(xì)菌的殺傷作用。四組生物被膜內(nèi)細(xì)菌的存活率分別為：A組為(100.00±0)%、B組(86.49±3.5)%、C組(57.42±0.9)%、D組(0.76±0.6)%,其中D組生物被膜內(nèi)細(xì)菌的存活率顯著低于B組和C組,三組比較差異有非常顯著意義(P0.01)。結(jié)論：1. P2-PDT在體外能夠有效殺傷MRSA臨床菌株的浮游菌。2. P2-PDT在體外能夠殺傷MRSAO生物被膜內(nèi)的細(xì)菌,但達(dá)到相同殺傷效果所需P2濃度較浮游菌高。3. P2-PDT可以破壞生物被膜的結(jié)構(gòu),并且可能通過破壞生物被膜而增強(qiáng)其對(duì)抗生素(左氧氟沙星)的滲透性。4. P2-PDT與左氧氟沙星聯(lián)合應(yīng)用對(duì)殺傷生物被膜內(nèi)細(xì)菌有協(xié)同作用。
【關(guān)鍵詞】：光動(dòng)力療法 亞芐基環(huán)戊酮 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 生物被膜 左氧氟沙星
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R454.2
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-19
• 第一部分：P2-PDT對(duì)MRSA浮游菌的體外殺傷作用19-24
• 引言19
• 一. 材料與方法19-21
• 二. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-22
• 三. 討論22-23
• 四. 小結(jié)23-24
• 第二部分：P2-PDT對(duì)MRSA0生物被膜內(nèi)細(xì)菌的體外殺傷作用24-31
• 引言24
• 一. 材料與方法24-26
• 二. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-28
• 三. 討論28-30
• 四. 小結(jié)30-31
• 第三部分：P2-PDT對(duì)生物被膜結(jié)構(gòu)的破壞作用31-41
• 引言31
• 一. 材料與方法31-35
• 二. 結(jié)果35-38
• 三. 討論38-40
• 四. 小結(jié)40-41
• 第四部分：P2-PDT與抗生素聯(lián)合應(yīng)用對(duì)生物被膜內(nèi)細(xì)菌的殺傷效應(yīng)41-45
• 引言41
• 一. 材料與方法41-42
• 二. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-43
• 三. 討論43-44
• 四. 小結(jié)44-45
• 總結(jié)與展望45-46
• 參考文獻(xiàn)46-53
• 文獻(xiàn)綜述53-64
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況64-65
• 致謝65

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔡蕓;趙鐵梅;王睿;;中國(guó)生物被膜相關(guān)研究文獻(xiàn)分析[J];中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志;2008年11期

2 劉彤;陳晶瑜;韓北忠;李春雷;;單核增生李斯特氏菌生物被膜的形成及控制[J];食品研究與開發(fā);2010年02期

3 葉楓,陳順存,鐘淑卿;呼吸道的生物被膜病[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2000年01期

4 郭生玉,李勝岐,劉勇,孫繼梅,周秀珍;銅綠假單胞菌感染豚鼠后生物被膜形成的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2003年04期

5 李鴻雁,夏前明,李福祥,全燕;呼吸道生物被膜病[J];西南軍醫(yī);2005年01期

6 王玎;李興祿;;生物被膜細(xì)菌的耐藥機(jī)制及其防治[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

7 張連波;高慶國(guó);張廣;;銅綠假單胞菌生物被膜研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2009年01期

8 梁歌宏;宋詩(shī)鐸;孫二琳;王哲;祁偉;;嗜麥芽窄食單胞菌生物被膜形成的體外抗菌活性研究[J];天津醫(yī)藥;2011年08期

9 金城;;李斯特菌生物被膜形成的調(diào)控[J];微生物學(xué)通報(bào);2011年09期

10 梁林慧;劉德穩(wěn);;生物被膜與細(xì)菌相關(guān)感染的機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2011年09期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 盧中秋;趙光舉;;呼吸道細(xì)菌生物被膜感染研究進(jìn)展[A];2010全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 趙善良;;生物被膜與生物被膜病——呼吸系統(tǒng)致病細(xì)菌耐藥的又一個(gè)問題[A];結(jié)核與肺部疾病論文集[C];2006年

3 卜倩倩;伍勇;;糞腸球菌生物被膜形成的動(dòng)態(tài)觀察及早期相關(guān)基因的表達(dá)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

4 李聰然;錢皎;王睿;;銅綠假單胞菌生物被膜密度感知系統(tǒng)分子機(jī)制的研究進(jìn)展[A];創(chuàng)新藥物及新品種研究、開發(fā)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

5 李聰然;錢皎;王睿;;銅綠假單胞菌生物被膜密度感知系統(tǒng)分子機(jī)制的研究進(jìn)展[A];2006第六屆中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

6 蔡蕓;柴棟;梁蓓蓓;白楠;王睿;;細(xì)菌生物被膜研究文獻(xiàn)計(jì)量分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆全國(guó)呼吸道感染學(xué)術(shù)大會(huì)暨第一屆多學(xué)科抗感染治療學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

7 劉原;柯蕊;和平;潘雙;李亞明;趙玉杰;楊芬;;鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜與耐藥性及外排泵系統(tǒng)關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 金卉;周銳;康名松;羅銳;蔡旭旺;陳煥春;;副豬嗜血桿菌地方分離株和標(biāo)準(zhǔn)菌株的生物被膜形成研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2006年

9 周穎;曲迪;侯征;薛小燕;羅曉星;;RIP衍生物抑制葡萄球菌生物被膜形成的試驗(yàn)研究[A];2013年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國(guó)藥師周論文集[C];2013年

10 鄒彬彬;漆涌;伍勇;;糞腸球菌相關(guān)基因,QS-frs系統(tǒng)與生物被膜形成關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 北京朝陽醫(yī)院 張洪玉教授;生物被膜病在作怪[N];健康報(bào);2000年

2 張洪玉;生物被膜病與慢性肺部感染[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

3 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 曾立明;細(xì)菌蓋“棉被”藥物難顯效[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

4 李聰然　錢皎;密度感知系統(tǒng)研究——為控制PA耐藥提供新思路[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

5 記者 董敬民;北京局科研工作再傳捷報(bào)[N];中國(guó)國(guó)門時(shí)報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周光琪;Shewanella oneidensis呼吸作用對(duì)生物被膜形成的影響及其分子基礎(chǔ)研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 侯博;TolC在腸外致病性大腸桿菌中的生物學(xué)功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 陸秀紅;十字花科黑腐病菌轉(zhuǎn)錄后全局調(diào)控蛋白R(shí)smA_(Xcc)調(diào)控生物被膜形成的分子機(jī)理研究[D];廣西大學(xué);2014年

4 趙玉林;大環(huán)內(nèi)酯類藥物對(duì)S.suis體外生物被膜QS系統(tǒng)及毒力因子的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 劉磊;RovM和RovA調(diào)控鼠疫耶爾森氏菌生物被膜形成和毒力的分子機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

6 張連波;密度感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)銅綠假單胞菌致病力及生物被膜形成影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2008年

7 崔冬清;氧濃度變化對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜生成的影響[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

8 孔晉亮;氨溴索對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜作用的體外和體內(nèi)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

9 董洪燕;腸炎沙門氏菌生物被膜形成相關(guān)基因鑒定、缺失株構(gòu)建及生物學(xué)特性研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

10 王瑛;大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥對(duì)流感嗜血桿菌生物被膜的影響[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李穎佳;雙J管生物被膜細(xì)菌耐藥及其相關(guān)基因研究[D];中南大學(xué);2011年

2 黃衛(wèi)鋒;以群感效應(yīng)分子為靶點(diǎn)的魚腥草素鈉抗銅綠假單胞菌生物被膜機(jī)制的研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 馮凡;干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)白假絲酵母菌生物被膜體外抑菌效果及分子機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 張煜琛;基于群體感應(yīng)分析對(duì)蝦優(yōu)勢(shì)腐敗菌對(duì)副溶血弧菌毒力因子的影響[D];廣東海洋大學(xué);2015年

5 李曉博;豬源糞腸球菌Esp的原核表達(dá)及部分LPXTG基序樣物質(zhì)對(duì)生物被膜形成的影響[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 許晶;蒲公英水提物對(duì)豬鏈球菌生物被膜體外干預(yù)作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 黃駿;沙門菌生物被膜形成調(diào)控基因rpoE的鑒定及缺失突變株的生物學(xué)特性研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

8 張秀平;鴨源雞桿菌的生物被膜形成能力及對(duì)雞原代輸卵管上皮細(xì)胞作用的初步研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 吳義龍;揚(yáng)子鱷源普通變形桿菌生物被膜特性及形成相關(guān)基因研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

10 孫莉娜;遲鈍愛德華氏菌生物被膜狀態(tài)下耐藥相關(guān)基因與蛋白的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：光動(dòng)力療法對(duì)MRSA及其生物被膜作用的體外實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：298974