本文關(guān)鍵詞：兩種冷凍方法對(duì)人大塊卵巢組織卵泡活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 探討采用兩種不同冷凍方法凍融人大塊卵巢組織(約15mm2×2-3mm)的冷凍效果以及比較冷凍復(fù)蘇人卵巢組織與新鮮卵巢組織體外培養(yǎng)后對(duì)卵泡活性的影響。 方法 卵巢組織取自15例病人,均來自在2011年6月至2012年6月期間,山東省齊魯醫(yī)院婦產(chǎn)科非卵巢腫瘤患者需切除卵巢的手術(shù)。用滅菌剪刀將卵巢組織與周圍結(jié)締組織分離,被剪下的1/2-1/3大小卵巢組織放入盛有10ml PBS的無菌離心管巾置于冰上,10min內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室無菌層流操作臺(tái)中操作。用眼科剪及解剖刀在培養(yǎng)皿巾將卵巢組織的髓質(zhì)分離。在實(shí)體顯微鏡下將卵巢皮質(zhì)切成2-3mm厚,面積1.5cm2大小的組織塊3塊,分別為新鮮對(duì)照組(A組)、玻璃化冷凍組(B組)和兩步法冷凍組(C組),即同一病人的卵巢組織按上述方法分為3塊并隨機(jī)分配到三組中。A組組織取2/3為體外培養(yǎng)用,其余組織用4%多聚甲醛固定做組織學(xué)分析。B、C冷凍組冷凍復(fù)蘇后,比較分析三組卵泡形態(tài)學(xué)變化,計(jì)數(shù)正常形態(tài)卵泡比率。并進(jìn)行卵巢組織體外培養(yǎng)后與A組體外培養(yǎng)的卵巢組織比較,測定三組培養(yǎng)液上清中雌激素、孕激素濃度,免疫組化染色測定培養(yǎng)后的卵巢組織增殖細(xì)胞核抗原(Ki67)及B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)表達(dá)水平以及采用原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)的方法共同評(píng)估卵泡增殖及凋亡活性。 結(jié)果 1. A組正常形態(tài)卵泡比率(91.9%)顯著高于B組(71.3%)和C組(82.9%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C組高于B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。C組的始基卵泡和初級(jí)卵泡的正常形態(tài)率分別為86.8%、54.4%,均分別高于B組73.8%、44.4%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.卵巢組織體外培養(yǎng)后同一時(shí)期新鮮組、玻璃化冷凍組、兩步法冷凍組的激素分泌測定結(jié)果無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 3. C組Ki67的陽性率為73%,分別顯著高于A組50%和B組55%(P0.05),A組低于于B組(P0.05)。Bcl-2陽性率,A組為57%和C組61%之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但B組42%陽性率分別低于A組和C組(P0.05)。 4.原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測發(fā)現(xiàn)：各組巾始基卵泡、初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡巾都沒有陽性染色,但在各組中都有組織基質(zhì)巾的細(xì)胞染色呈陽性。計(jì)算凋亡細(xì)胞的比率：冷凍復(fù)蘇后體外培養(yǎng)的卵巢組織的凋亡細(xì)胞陽性率高于新鮮組卵巢組織(0.02%)：玻璃化冷凍組(0.12%)與兩步法冷凍組(0.05%),然而新鮮卵巢組織與兩步法冷凍組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.058)。玻璃化冷凍組的凋亡細(xì)胞的比率分別高于兩步法冷凍組與新鮮卵巢組織組,即B組與A組及C組分別比較,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.人大塊卵巢組織冷凍復(fù)蘇后組織內(nèi)卵泡形態(tài)結(jié)構(gòu)良好,體外培養(yǎng)后卵泡增殖及抗凋亡活性明顯,說明人大塊卵巢組織能耐受凍融過程及冷凍保存人大塊卵巢組織具有可行性。 2.玻璃化法與兩步法冷凍大塊人卵巢組織對(duì)卵巢組織分泌激素?zé)o明顯影響。 3.兩步法冷凍保存人大塊卵巢組織優(yōu)于玻璃化冷凍法。
【關(guān)鍵詞】：卵巢組織 低溫保存 玻璃化冷凍 兩步法冷凍 人類
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.52
【目錄】：

• 巾文摘要13-15
• 英文摘要15-18
• 符號(hào)說明18-20
• 前言20-22
• 材料和方法22-30
• 結(jié)果30-31
• 討論31-38
• 結(jié)論38-39
• 附圖39-44
• 附表44-46
• 綜述46-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 致謝58-59
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文59-53

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：兩種冷凍方法對(duì)人大塊卵巢組織卵泡活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：298787