發(fā)布時(shí)間：2020-12-18 02:42

　　軟組織嚴(yán)重?fù)p傷時(shí),難以通過自我修復(fù),實(shí)現(xiàn)組織結(jié)構(gòu)的重建和功能的恢復(fù)。異體移植是臨床上幫助組織進(jìn)行修復(fù)和重建的重要方案。目前已有多種生物合成材料作為組織工程支架用于組織修復(fù),但這些合成材料對(duì)細(xì)胞的親和力較差,誘導(dǎo)細(xì)胞在材料表面粘附、生長(zhǎng)及分化能力弱。相反,天然膠原蛋白材料因其獨(dú)特的生物活性因子、良好的細(xì)胞相容性以及和正常組織類似的結(jié)構(gòu),成為目前較為理想的組織工程支架材料。肌腱組織含有豐富的膠原蛋白且具有良好的力學(xué)特性,是組織工程支架研究的熱點(diǎn)。目前的研究發(fā)現(xiàn),利用脫細(xì)胞肌腱支架結(jié)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植的方式能促進(jìn)損傷肌腱的修復(fù),并且膠原纖維的排列方式對(duì)干細(xì)胞分化具有重要的調(diào)控作用。因此本課題利用大鼠尾肌腱組織制備膠原纖維定向和隨機(jī)排列的脫細(xì)胞支架作為載體,在不同血清濃度條件下,探討不同支架對(duì)BMSCs分化的影響,以期利用肌腱ECM模擬干細(xì)胞分化微環(huán)境,從而調(diào)節(jié)干細(xì)胞的生物學(xué)行為,促進(jìn)BMSCs向肌腱細(xì)胞定向分化,促進(jìn)肌腱再生。本研究發(fā)現(xiàn):(1)生長(zhǎng)在定向和隨機(jī)排列膠原支架上的BMSCs活性良好;(2)在定... 

【文章來源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院)廣東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)觀察

圖 2.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物的表達(dá)。Figure 2.2 Stemness characteristics of BMSCs by FACS（左圖：CD44、CD90 干細(xì)胞表面標(biāo)記物；右圖：CD45 淋巴細(xì)胞標(biāo)記物，CD106 內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物） BMSCs 成骨和成軟骨誘導(dǎo)成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng) 14 天后，利用番紅 O 染色證明 BMSCs 具有成能力，如圖 2.2A 和 C 所示；在使用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基一段時(shí)間后，觀察態(tài)發(fā)生明顯變化，由梭形變?yōu)闄E圓形和方形；培養(yǎng) 1 周后，大約 80%以形態(tài)呈不規(guī)則多角形，細(xì)胞基質(zhì)中能明顯觀察到鈣化斑；培養(yǎng) 2 周后中有多層小結(jié)結(jié)構(gòu)，礦化物明顯，并形成鈣化結(jié)節(jié)。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)的 B素紅染色鑒定，鈣化結(jié)節(jié)呈紅色，如圖 2.2B 和 D 所示，證明分離純

圖 2.3 BMSCs 多分化能力檢測(cè)。Figure 2.3 Multi-differentiation potential evaluation of BMSCs（A，C）番紅 O 染色；（B，D）茜素紅染色。標(biāo)尺：左圖 100μm，右圖 50μm.4 小結(jié)與討論本章通過貼壁培養(yǎng)法，獲取具有多能性的大鼠 BMSCs。BMSCs 具有無限增的能力，因此是組織工程的理想種子細(xì)胞。目前骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離法有很多種，主要包括：流式細(xì)胞分離法、免疫磁珠分離法、密度梯度離心法全骨髓貼壁法，但是結(jié)合分離效率，細(xì)胞活性，操作的難易程度等考慮，全骨和密度離心法更適合分離 BMSCs。根據(jù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的貼壁特性，骨髓單核細(xì)胞提取物貼壁培養(yǎng)法通過定更換培養(yǎng)液除去懸浮的造血干細(xì)胞，從而獲取純化的 BMSCs。采取此方法時(shí)，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]RGD肽對(duì)天然瓣膜支架細(xì)胞黏附性能的影響[J]. 史嘉瑋,董念國(guó),孫宗全.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2008(02)
[2]運(yùn)動(dòng)員前交叉韌帶損傷的流行病學(xué)研究[J]. 敖英芳,田得祥,崔國(guó)慶,胡躍林,史和福,任玉衡.  體育科學(xué). 2000(04)



本文編號(hào)：2923192