本文關鍵詞：堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）對多孔鉭—軟骨細胞復合物細胞增殖及分化影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的對比不同濃度堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）體外對多孔鉭-軟骨細胞復合物細胞生長及增殖能力，檢測bFGF增強軟骨細胞表型維持，抑制去分化作用，從而探討bFGF/多孔鉭/軟骨細胞復合物體內(nèi)移植修復關節(jié)軟骨缺損的理論依據(jù)。 方法分離培養(yǎng)3周齡幼兔膝關節(jié)軟骨細胞，II型膠原免疫細胞化學染色、番紅-O（Safranin-O）特殊染色鑒定軟骨細胞；取生長狀態(tài)良好的第3代細胞分為5組：A組（1ng/ml bFGF/多孔鉭/軟骨細胞），B組（10ng/ml bFGF/多孔鉭/軟骨細胞），C組（50ng/ml bFGF/多孔鉭/軟骨細胞），D組（多孔鉭/軟骨細胞）及E組（單純軟骨細胞）；MTT法檢測不同濃度bFGF對多孔鉭/軟骨細胞生長及增殖狀態(tài)；掃描電鏡觀察bFGF/多孔鉭/軟骨細胞復合物細胞形態(tài)及生長；I、II、IX、X型膠原免疫細胞化學染色以檢測軟骨細胞表型變化及去分化狀態(tài)；實時熒光定量PCR檢測軟骨細胞II、X型膠原mRNA表達。 結果1軟骨細胞鑒定：II型膠原免疫細胞化學染色和Safranin-O染色均呈陽性反應，證實所分離培養(yǎng)的細胞為軟骨細胞。2MTT法檢測軟骨細胞生長、增殖：不同時間點各實驗組（A、B、C、D組）軟骨細胞增殖與對照組（E組）相比較均有統(tǒng)計學差異（P0.05），實驗組（A～C）軟骨細胞增殖明顯增強，且10ng/mlbFGF/鉭/軟骨細胞組（B組）細胞增殖能力最強，同時各組間比較也存在統(tǒng)計學意義（P0.05）。3掃描電鏡觀察結果：各組軟骨細胞在多孔鉭表面及孔隙內(nèi)生長、粘附，早期呈不等的球形，24小時后胞漿延展并向周圍伸出多條突起，相互連接、延展向孔隙內(nèi)部生長，細胞間相互融合，部分區(qū)域覆蓋支架材料。4免疫細胞化學染色檢測3,7天軟骨細胞I、II、IX和X型膠原表達：10ng/ml bFGF/鉭/軟骨細胞組（B組） II和IX膠原免疫細胞化學染色呈強陽性，高于對照組（E組）（P0.05），并且各組間比較也存在統(tǒng)計學意義（P0.05）；而10ng/ml bFGF/鉭/軟骨細胞組（B組）I和X型膠原免疫細胞化學染色呈弱陽性或陰性，與對照組或其它各組比較也存在統(tǒng)計學意義（P0.05）。5實時熒光定量PCR檢測3,7天軟骨細胞II、X型膠原mRNA表達：各實驗組（A～D組）II型膠原mRNA呈高表達，與對照組（E組）相比其表達量有統(tǒng)計學差異（P0.05）；而X型膠原mRNA表達量低于對照組（P0.05）。 結論1bFGF與多孔鉭支架材料-軟骨細胞共培養(yǎng)時，能促進軟骨細胞增殖和正常表型的維持，并且能抑制軟骨細胞去分化。210ng/ml bFGF是促進多孔鉭-軟骨細胞增殖，抑制其分化的最佳濃度。3bFGF可促進多孔鉭/軟骨細胞II型膠原mRNA的表達，抑制X型膠原mRNA的表達。說明bFGF/多孔鉭/軟骨細胞復合物可能成為軟骨損傷修復材料而應用于臨床。
【關鍵詞】：堿性成纖維細胞生長因子（bFGF） 多孔鉭 細胞表型 去分化 軟骨細胞
【學位授予單位】：河北聯(lián)合大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08;R687.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 實驗研究13-41
• 1.1 材料與方法13-19
• 1.1.1 實驗藥品與試劑13-14
• 1.1.2 實驗方法與步驟14-19
• 1.2 結果19-34
• 1.2.1 軟骨細胞形態(tài)觀察與鑒定結果19-22
• 1.2.2 軟骨細胞增殖情況 MTT 法檢測結果22-24
• 1.2.3 各實驗組軟骨細胞 I、II、IX、X 型膠原免疫細胞化學染色檢測結果24-32
• 1.2.4 實時熒光定量 PCR 檢測 bFGF/多孔鉭/軟骨細胞共培養(yǎng)軟骨細胞II 型膠原和 X 型膠原 mRNA 的表達32-34
• 1.3 討論34-37
• 1.3.1 多孔鉭支架材料的選擇34-35
• 1.3.2 bFGF 功能及其對多孔鉭-軟骨細胞增殖的影響35
• 1.3.3 bFGF 對多孔鉭/軟骨細胞復合物 I、II、IX、X 型膠原表達影響及其與軟骨細胞表型的關系35-36
• 1.3.4 bFGF 促進多孔鉭/軟骨細胞復合物 II 型膠原、X 型膠原 mRNA 表達36-37
• 1.3.5 不足與展望37
• 1.4 結論37
• 參考文獻37-41
• 第2章 綜述 多孔鉭關節(jié)融合的歷史與前景41-53
• 2.1 多孔鉭的特性介紹41-46
• 2.1.1 多孔鉭的制備及力學性能42-43
• 2.1.2 多孔鉭的生物相容性43-44
• 2.1.3 多孔鉭對成骨細胞的作用及骨內(nèi)生長性44-45
• 2.1.4 多孔鉭的纖維組織增長特性及流體流動特性45
• 2.1.5 多孔鉭的軟骨傳導潛力45-46
• 2.2 多孔鉭在骨科的應用46-48
• 2.2.1 多孔鉭關節(jié)置換術中的應用46
• 2.2.2 多孔鉭在椎間關節(jié)融合中的應用46-47
• 2.2.3 多孔鉭在踝關節(jié)融合中的應用47-48
• 2.2.4 多孔鉭在腕關節(jié)融合中的應用48
• 參考文獻48-53
• 致謝53-54
• 導師簡介54-55
• 作者簡介55-56
• 學位論文數(shù)據(jù)集56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 歐陽松應,楊冬,歐陽紅生,馬鶴雯;實時熒光定量PCR技術及其應用[J];生命的化學;2004年01期

2 楊亞東;薄占東;;應用組織工程技術修復關節(jié)軟骨缺損的研究進展[J];中國矯形外科雜志;2011年14期

  本文關鍵詞：堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）對多孔鉭—軟骨細胞復合物細胞增殖及分化影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：284863