發(fā)布時間：2020-10-15 05:48

　　 目的:觀察鈦離子作用于Jurkat T淋巴細(xì)胞后KCa3.1通道表達(dá)情況及阻斷KCa3.1通道前后細(xì)胞膜電位、胞內(nèi)鈣離子變化,探討KCa3.1通道在鈦離子對JurkatT淋巴細(xì)胞活化中可能存在的作用機(jī)制。方法:1、體外培養(yǎng)Jurkat T淋巴細(xì)胞,采用植物凝血素(PHA)預(yù)活化,CCK8法檢測不同濃度鈦離子對活化Jurkat T淋巴細(xì)胞的增殖影響。2、根據(jù)是否被植物凝血素(PHA)預(yù)活化,將Jurkat T淋巴細(xì)胞分為PHA(+)及PHA(-)兩大組,兩組分別加入濃度為0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L鈦離子,作用12h后,實時熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)(Real-time PCR)檢測KCa3.1通道的表達(dá)量。流式細(xì)胞術(shù)檢測TRAM-34阻斷前后Jurkat T淋巴細(xì)胞膜電位及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。結(jié)果:1、鈦離子對預(yù)活化Jurkat T淋巴細(xì)胞隨著鈦離子的濃度的增加增殖更加明顯(P﹤0.05)。2、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L濃度的鈦離子在PHA(-)Jurkat T淋巴細(xì)胞作用的下培養(yǎng)12小時,隨著鈦離子濃度的增加KCa3.1mRANA相對于對照組表達(dá)增加,差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05)。25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L濃度的鈦離子在PHA(+)Jurkat T淋巴細(xì)胞作用的下培養(yǎng)12小時,隨著鈦離子濃度的增加KCa3.1mRANA表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。3.KCa3.1通道被TRAM-34阻斷后,50μmol/L鈦離子(PHA-)Jurkat T淋巴細(xì)胞組的膜電位與不加鈦離子組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05),TRAM-34(+)與TRAM-34(-)組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05);50μmol/L鈦離子(PHA+)Jurkat T淋巴細(xì)胞組的膜電位與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05),TRAM-34(+)與TRAM-34(-)組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。50μmol/L鈦離子(PHA-)Jurka T淋巴細(xì)胞組的鈣離子濃度與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05),TRAM-34(+)與TRAM-34(-)組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05);50μmol/L鈦離子組(PHA+)Jurkat T淋巴細(xì)胞組的鈣離子濃度與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05),TRAM-34(+)與TRAM-34(-)組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)。結(jié)論:1.100μmol/L以內(nèi)的鈦離子能增加活化Jurkat T淋巴細(xì)胞的增殖效應(yīng)。2.鈦離子可引起活化Jurkat T淋巴細(xì)胞KCa3.1通道表達(dá)的改變。3.KCa3.1通道可在一定程度上調(diào)節(jié)鈦離子對活化Jurkat T細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及膜電位。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R783.1
【部分圖文】：

圖 1-1 不同活化狀態(tài)下的 JurkatT 淋巴細(xì)胞Figure 1-1 The different activation states of T cellsA.植物血凝素作用 12 小時，增殖形成集落，近似葡萄串；B.加入不同濃度鈦離子后集落成球形。A;PHA activated T lymphocytes.B; PHA activated T lymphocytes cultured with Titanium Ions.2.2 鈦離子對活化 Jurkat T 淋巴細(xì)胞增殖的影響

圖 1-1 不同活化狀態(tài)下的 JurkatT 淋巴細(xì)胞Figure 1-1 The different activation states of T cellsA.植物血凝素作用 12 小時，增殖形成集落，近似葡萄串；B.加入不同濃度鈦離子后集落成球形。A;PHA activated T lymphocytes.B; PHA activated T lymphocytes cultured with Titanium Ions.2.2 鈦離子對活化 Jurkat T 淋巴細(xì)胞增殖的影響A

確認(rèn)好擴(kuò)增曲線和融解曲線，分別計算同一樣本每個復(fù)孔 KCa3.1及 GAPDH的平均 Ct值，運(yùn)用公式2 ΔΔ CT得出 KCa3.1相對定量值。 ΔΔCT=（實驗組KCa3.1 Ct值-實驗組GAPDH Ct值）-（對照組KCa3.1 Ct值-對照組GAPDH Ct值）。1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)結(jié)果均以 x±s表示。計量資料三組及三組以上比較采用One-way ANOVA 分析，組組之間比較采用LSD法。 檢驗水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2.結(jié)果2.1 鈦離子對 Jurkat T 淋巴細(xì)胞 KCa3.1 通道基因表達(dá)的影響b
【參考文獻(xiàn)】

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1 侯春梅;李新穎;葉偉亮;曹曦元;肖鶴;黎燕;;MTT法和CCK-8法檢測懸浮細(xì)胞增殖的比較[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2009年04期

2 王林紅;樊立潔;谷志遠(yuǎn);;鈦離子誘導(dǎo)骨吸收的現(xiàn)象及機(jī)制[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

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1 龐振華;鈦離子對T細(xì)胞膜電位及Kv1.3通道的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

2 李秋瑩;鈦離子對T細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號：2841789