發(fā)布時(shí)間：2017-04-03 05:12

  本文關(guān)鍵詞：多孔鉭對(duì)人成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC及OPN表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究多孔鉭支架材料對(duì)MG63人成骨細(xì)胞增殖、分泌功能以及成骨基因COL-Ⅰ、OC、OPN及蛋白表達(dá)影響,探討多孔鉭支架材料作為骨組織工程支架材料來(lái)修復(fù)骨缺損,恢復(fù)骨組織正常生理結(jié)構(gòu)與功能的可行性,為進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1掃描電鏡觀察多孔鉭支架材料形態(tài)特征。2 MG63人成骨細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定。分組:以α-MEM完全培養(yǎng)基為浸提介質(zhì)制備鉭浸提液,A組為鉭浸提液組(鉭浸提液與成骨細(xì)胞共培養(yǎng)),B組為鉭支架組(鉭支架材料與成骨細(xì)胞共培養(yǎng)),C組為空白組(單純成骨細(xì)胞培養(yǎng))。3 CCK-8法分別檢測(cè)各組成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖狀態(tài)。4倒置相差顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡觀察成骨細(xì)胞在多孔鉭支架上黏附、增殖及超微結(jié)構(gòu)變化。5 ELISA法分別檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞分泌COL-Ⅰ與OC功能的影響。6免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC、OPN的蛋白表達(dá)并通過(guò)圖像半定量分析測(cè)定光密度(IOD)值。7 Western-blot法檢測(cè)多孔鉭支架對(duì)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC、OPN蛋白表達(dá)的影響。8實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)多孔鉭支架對(duì)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC、OPN m RNA表達(dá)的影響。結(jié)果1多孔鉭支架材料外觀為灰色,光潔,表面粗糙,凹凸不平,質(zhì)硬,材料表面及斷面可見(jiàn)均勻分布的蜂窩狀、針尖大小的孔隙。掃描電鏡下觀察,多孔鉭具有大量分散微孔結(jié)構(gòu),孔隙間相互連通,類似人松質(zhì)骨結(jié)構(gòu)。2 CCK-8結(jié)果顯示,隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),3組細(xì)胞能夠良好的貼壁及生長(zhǎng)增殖,數(shù)量由緩慢到快速增殖,而后穩(wěn)定生長(zhǎng)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出,3組間細(xì)胞增殖比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3倒置相差顯微鏡觀察:多孔鉭邊緣及四周黏附大量成骨細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)正常,呈現(xiàn)多角形及長(zhǎng)梭形。掃描電鏡顯示,隨著多孔鉭與成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),成骨細(xì)胞數(shù)量隨之增多,向材料孔隙生長(zhǎng),細(xì)胞伸出偽足,分泌的基質(zhì)逐漸覆蓋材料表面及孔隙。透射電鏡顯示,A組與B組成骨細(xì)胞胞漿內(nèi)具有豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體及高爾基體等細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。4成骨細(xì)胞COL-Ⅰ及OC分泌功能的檢測(cè):第3d時(shí),A、B及C組之間比較OC分泌差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);第5d與7d時(shí),B組OC分泌量高于A、C組(P0.05)。而在不同時(shí)間點(diǎn)3組間COL-Ⅰ分泌量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示:第5d時(shí),3組細(xì)胞均有COL-Ⅰ、OC、OPN的表達(dá),胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量棕黃色顆粒,其中B組OC與OPN表達(dá)的IOD值高于A、C組(P0.05),而COL-Ⅰ表達(dá)的IOD值在3組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6 Western-blot結(jié)果顯示:第5d時(shí),3組細(xì)胞均有COL-Ⅰ、OC、OPN蛋白的表達(dá),B組OC與OPN表達(dá)高于A、C組(P0.05),而3組間COL-Ⅰ蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示:第5d時(shí),A、B組OC、OPN m RNA的表達(dá)均高于C組,B組的表達(dá)高于A組(P0.05),而3組間COL-Ⅰm RNA表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1多孔鉭支架(三維結(jié)構(gòu))與多孔鉭浸提液(二維結(jié)構(gòu))均有利于人成骨細(xì)胞早期生長(zhǎng)、黏附及增殖作用。提示:多孔鉭具有良好的細(xì)胞親和力和生物相容性。2多孔鉭三維空間構(gòu)型可促使人成骨細(xì)胞在材料表面黏附并分泌OC,維持骨形成及骨吸收之間平衡并有利于骨礦化過(guò)程;而成骨細(xì)胞COL-Ⅰ分泌則不受多孔鉭空間構(gòu)型影響,始終貫穿于成骨全過(guò)程,以成骨早期最為顯著。3 Western-blot及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果提示:人成骨細(xì)胞在多孔鉭三維結(jié)構(gòu)培養(yǎng)條件下,成骨基因OC與OPN及相應(yīng)蛋白的表達(dá)均高于二維培養(yǎng)。說(shuō)明多孔鉭-成骨細(xì)胞復(fù)合物在特定條件下可作為骨移植支架材料修復(fù)骨缺損并具有促成骨作用。
【關(guān)鍵詞】：多孔鉭支架材料 骨組織工程 COL-Ⅰ OC OPN
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R318.08;R687.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究13-50
• 1.1 材料與方法13-27
• 1.1.1 細(xì)胞來(lái)源及實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.1.2 掃描電鏡觀察多孔鉭支架材料形態(tài)特征15
• 1.1.3 成骨細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定15-17
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)分組17
• 1.1.5 多孔鉭－成骨細(xì)胞復(fù)合物的制備17-18
• 1.1.6 CCK-8（Cell Counting Kit-8）法檢測(cè)多孔鉭材料對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響18-19
• 1.1.7 掃描電鏡觀察多孔鉭－成骨細(xì)胞復(fù)合物表面形態(tài)19
• 1.1.8 透射電鏡觀察多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響19
• 1.1.9 ELISA法檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞分泌Ⅰ型膠原（COL-Ⅰ）功能的影響19-20
• 1.1.10 ELISA法檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞分泌骨鈣素（OC）功能的影響1020-21
• 1.1.11免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC、OPN蛋白表達(dá)的影響21-22
• 1.1.12 Western-blot法檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC、OPN蛋白表達(dá)的影響22-25
• 1.1.13實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC、OPN mRNA表達(dá)的影響25-27
• 1.2 結(jié)果27-41
• 1.2.1 多孔鉭材料的物理特性27-28
• 1.2.2 倒置相差顯微鏡下觀察MG63人成骨細(xì)胞形態(tài)特征28-30
• 1.2.3 CCK-8 法檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響30-32
• 1.2.4 掃描電鏡觀察多孔鉭－成骨細(xì)胞復(fù)合物表面形態(tài)32
• 1.2.5 透射電鏡觀察多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響32-33
• 1.2.6 ELISA法檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞Ⅰ型膠原 (COL-Ⅰ )與骨鈣素（OC）分泌功能的影響33-35
• 1.2.7 免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC、OPN蛋白表達(dá)的影響35-37
• 1.2.8 Western-blot檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC和OPN蛋白表達(dá)的影響37-38
• 1.2.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)多孔鉭對(duì)成骨基因COL-Ⅰ、OC和OPN mRNA表達(dá)的影響38-41
• 1.3 討論41-46
• 1.3.1 多孔鉭 3D空間結(jié)構(gòu)為成骨細(xì)胞的黏附及生長(zhǎng)提供良好的環(huán)境41-42
• 1.3.2 多孔鉭與成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)有利于細(xì)胞增殖42-43
• 1.3.3 多孔鉭三維結(jié)構(gòu)對(duì)成骨細(xì)胞分泌功能及礦化有促進(jìn)作用43-45
• 1.3.4 多孔鉭對(duì)成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC、OPN基因及蛋白表達(dá)增強(qiáng)45-46
• 1.4 小結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 第2章 綜述 多孔鉭的生物學(xué)特性與關(guān)節(jié)重建50-56
• 2.1 鉭的生物學(xué)特性50-51
• 2.2 鉭在人工關(guān)節(jié)置換術(shù)中的應(yīng)用51-52
• 2.3 展望52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 結(jié)論56-57
• 附錄 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)57-59
• 致謝59-60
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介60-61
• 作者簡(jiǎn)介61-62
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉剛,胡蘊(yùn)玉,顏永年,熊卓,王哲,呂榮,白建萍,楊家驥;Ⅰ型膠原修飾的多孔材料聚乙醇酸-乳酸共聚物對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞粘附和增殖及成骨細(xì)胞基因表達(dá)的影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2003年07期

  本文關(guān)鍵詞：多孔鉭對(duì)人成骨細(xì)胞COL-Ⅰ、OC及OPN表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：283769