【摘要】：目的:利用H_2O_2發(fā)泡及控制燒結(jié)溫度合成具有不同微結(jié)構(gòu)的TCP陶瓷材料并且探討不同微結(jié)構(gòu)TCP材料對Wnt非經(jīng)典信號通路中相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)水平的影響。方法:1、配制磷酸三鈣漿料并通過雙氧水發(fā)泡完成素胚制作,將經(jīng)模具成型的素坯置于1080℃和1000℃下燒結(jié)成瓷,獲得不同微結(jié)構(gòu)的TCP材料并用Co60消毒。2、XRD實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證制備成型的陶瓷材料塊的化學(xué)成分3、SEM掃描確定制備材料的表面形貌及顆粒大小。4、壓汞實(shí)驗(yàn)測定材料的內(nèi)部結(jié)構(gòu),包括孔徑大小、孔隙率、迂曲度等。5、MG63細(xì)胞與不同微結(jié)構(gòu)的TCP材料共培養(yǎng),并以培養(yǎng)板為空白對照,利用q-PCR技術(shù)檢測各組在共培養(yǎng)3、5、7天后Wnt5a、Wnt11、ROR2、FZD1、DKK1表達(dá)水平。結(jié)果:1、XRD檢測結(jié)果:實(shí)驗(yàn)中制備的三組可植入陶瓷材料的化學(xué)成分為β-TCP(圖3-1)。2、SEM實(shí)驗(yàn):掃描電鏡下觀察TCP-compact表面孔隙較小,數(shù)目少;TCP-middle和TCP-big表面粗糙,可見明顯的溝壑形態(tài)(圖3-2)。3、MIP實(shí)驗(yàn):TCP-compact的孔隙率約34.11±1.04%,孔隙大小約0.96±0.04μm;TCP-middle的孔隙率與TCP-big相差不大,但是孔徑大小有差別意義,分別為6.51±0.30μm、10.41±0.67μm。(表3-3)。4、Wnt5a的表達(dá):具有微孔結(jié)構(gòu)材料中Wnt5a表達(dá)水平顯著上升(P0.05),微孔孔徑較大的材料中表達(dá)水平最高;在共培養(yǎng)的后期材料組與對照組沒有差異(P0.05)。5、Wnt11的表達(dá):TCP-middle組與Control組相比,Wnt11的表達(dá)處于低水平(P0.05),后期這種低水平的表達(dá)狀態(tài)有所緩解但仍低于對照組;TCP-middle組雖初期處于抑制,然而后期也表現(xiàn)出輕度促進(jìn);TCP-big則表現(xiàn)較早的擺脫抑制狀態(tài),在第5天即表現(xiàn)為促進(jìn);同時不同時間點(diǎn)也可觀察到材料組之間的表達(dá)水平是有差異的(P0.05)。6、ROR2的表達(dá):TCP-compact與Control組比較呈現(xiàn)低水平ROR2表達(dá)(P0.05);具有微孔結(jié)構(gòu)材料則表現(xiàn)為初期即有差異但不明顯,第5天時則明顯增加(P0.05),并且與TCP-big共培養(yǎng)的細(xì)胞在促進(jìn)ROR2表達(dá)時更具有效果(P0.05)。7、FZD1的表達(dá):初始時FZD1在TCP材料中相對Control組表達(dá)量較低;第5天時具有微孔結(jié)構(gòu)的材料則表達(dá)量增加(P0.05),并且孔徑較大的微孔材料對FZD1的表達(dá)具有更積極意義。8、DKK1的表達(dá):材料組中DKK1表達(dá)與Control比較表現(xiàn)為具有微結(jié)構(gòu)表面的材料促進(jìn)而TCP-compact抑制;TCP-middle在早期明顯促進(jìn)DKK1表達(dá),隨時間這種影響減弱并且幅度較大;TCP-big組的表現(xiàn)與TCP-middle組類似,但是區(qū)別在于變化幅度較小。共培養(yǎng)第7天,材料組表達(dá)無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:通過H2O2發(fā)泡及控制燒結(jié)溫度制備出具有不同微結(jié)構(gòu)的TCP材料,進(jìn)一步研究證實(shí)不同微結(jié)構(gòu)的TCP材料與MG63細(xì)胞共培養(yǎng)顯示材料影響Wnt非經(jīng)典信號通路的表達(dá)水平,其相關(guān)標(biāo)志蛋白表達(dá)水平的差異為材料微孔結(jié)構(gòu)所調(diào)控,在一定范圍內(nèi)材料孔徑越大Wnt非經(jīng)典信號通路則被明顯促進(jìn)。具有微孔結(jié)構(gòu)的TCP材料可以通過促進(jìn)Wnt非經(jīng)典信號通路的表達(dá)進(jìn)而啟動骨誘導(dǎo)的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R783.1
【圖文】：

TCP 材料制備流程圖2.2.2 MG63 細(xì)胞體外培養(yǎng)MG63 細(xì)胞完全培養(yǎng)基配置：將購買的 HDMEM培養(yǎng)基用 50ml 離心管分裝，加入體積分?jǐn)?shù) 10%的 FBS 和 1%雙抗溶液（青霉素及鏈霉素）配制完全培養(yǎng)基。配置完成后存放于 4℃冰箱進(jìn)行短期保存，保存期限不得超過一個月，使用前放在 37℃水浴箱中孵育 15min。MG63 細(xì)胞的復(fù)蘇及培養(yǎng)：從-150℃冰箱復(fù)蘇取出凍存的 MG63 細(xì)胞株，迅速放置入已預(yù)熱的至 37℃的水浴箱中溶解，輕輕晃動凍存管使快速解凍，避免水沒過瓶蓋以及避免溶解時間過長。待解凍后低速離心機(jī)離心（1000rpm/min，5min），然后移入已消毒的生物安全柜內(nèi)棄置上清并加入適量的完全培養(yǎng)基，混勻后轉(zhuǎn)移至 25cm2的培養(yǎng)瓶，再加入 3ml 培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基均勻鋪于瓶底。將裝有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶放在 37℃、5%的 CO2恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。MG63 細(xì)胞的傳代：在 37℃、5%的 CO2恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)中，體外培養(yǎng) MG63細(xì)胞，每隔 1 天更換完全培養(yǎng)基。每天觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)，待細(xì)胞粘附生長

第 3 章 結(jié)果第 3 章 結(jié)果3.1 TCP 植入材料的制備TCP 植入材料的微結(jié)構(gòu)可能在決定骨誘導(dǎo)發(fā)生方面起著關(guān)鍵作用[20]，Habibovic 等[40]研究發(fā)現(xiàn)不同溫度下燒結(jié)的羥基磷灰石陶瓷材料其微孔孔徑隨溫度改變而差異較明顯。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)課題組前期的技術(shù)及經(jīng)驗(yàn)積累，通過在控制燒結(jié)溫度在 1000℃和 1080℃以及調(diào)控 H2O2發(fā)泡作用制備出具有不同微結(jié)構(gòu)的TCP 材料——致密型（TCP-compact）、中等孔徑型（TCP-middle），大孔徑型（TCP-big）。對該三種材料進(jìn)行 X 射線衍射實(shí)驗(yàn)檢測，顯示本課題組制備的TCP-compact、TCP-middle、TCP-big 具有相同的化學(xué)成分，同時與標(biāo)準(zhǔn)卡片對比，明確其化學(xué)成分均為純β-磷酸三鈣（如圖 3-1、3-2、3-3）。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王倩;張珊;封國生;;Wnt經(jīng)典信號通路在結(jié)直腸癌中的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2017年05期

2 李博;張壽文;程波翔;董燕婧;蔣偉;;肝纖維化與Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及該通路干預(yù)研究現(xiàn)狀[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2017年05期

3 張靜;滕宇;趙曉婷;江妹;岳文濤;;Wnt蛋白生成抑制劑2對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞遷移與侵襲能力的影響[J];癌變·畸變·突變;2017年04期

4 閃海霞;朱幼芙;范崇桂;張懷宏;;Wnt信號通路對肝細(xì)胞肝癌的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2016年04期

5 徐偉;謝楊麗;翁土軍;金e

本文編號：2735796