【摘要】：目的:混合層中牙本質膠原的降解是導致樹脂-牙本質粘接界面破壞的主要原因。保護混合層中裸露的膠原纖維,是提高牙本質粘接界面穩(wěn)定性的有效途徑。有研究結果顯示柑橘黃烷酮類物質能夠抑制膠原降解、保持膠原穩(wěn)定,提示其應用于穩(wěn)定牙本質粘接界面的可行性。柑橘黃烷酮種類多樣,研究柑橘黃烷酮在穩(wěn)定膠原纖維方面的構效關系,分析甲基化、糖苷化對其膠原穩(wěn)定作用的影響,尋找最優(yōu)物質用以提高牙本質粘接耐久性。本研究的內容包括檢測三種柑橘黃烷酮桔皮素(Hst)、桔皮苷(Hsd)、柚皮素(Nge)對游離型和結合型膠原酶活性的影響,分析其抑制膠原酶活性的功能基團;柑橘黃烷酮處理完全脫礦的牙本質膠原,觀察膠原生物及理化性能的變化,分析柑橘黃烷酮對牙本質膠原結構的影響,探索其保護膠原的機制,為臨床改善牙本質粘接的長期穩(wěn)定性開辟新的思路。方法:1.熒光定量法檢測三種物質Hst、Hsd、Nge對游離型膠原酶活性的影響,分析甲基化、糖苷化等結構對其酶抑制效能的影響,尋找其抑制酶活性的功能基團和可能機制。2.柑橘黃烷酮處理脫礦的牙本質膠原,老化15天后檢測膠原纖維的干重質量變化、羥脯氨酸(HYP)釋放量;透射電鏡(TEM)觀察膠原纖維形態(tài)結構變化;原位明膠酶實驗進一步評價柑橘黃烷酮對牙本質基質中結合型MMPs活性的影響。3.500μg/m L的Hst、Hsd、Nge處理完全脫礦的牙本質膠原60 min后檢測膠原的彈性模量、吸水率、膠原酶降解后HYP的釋放量,分析柑橘黃烷酮對牙本質膠原的機械性能和耐酶解性能的影響;衰減全反射-傅里葉紅外光譜(ATR-FTIR)檢測柑橘黃烷酮處理前后牙本質膠原的結構變化;柑橘黃烷酮處理脫礦的牙本質表面,吹干后在掃描電鏡下觀察膠原纖維網的形態(tài)。結果:1.三種柑橘黃烷酮Hst、Hsd、Nge均能抑制游離型膠原酶的活性。抑制作用隨著濃度升高而增強,當濃度達到500μg/m L時抑制比例達到90%以上,三者的抑制程度無統(tǒng)計學差異。2.與對照組相比,老化15天后,柑橘黃烷酮處理組的牙本質膠原干重缺失比例、HYP釋放量減少,膠原纖維結構更完整;激光共聚焦檢測柑橘黃烷酮處理組的熒光釋放強度降低,這些結果顯示Hst、Hsd、Nge對結合型MMPs具有抑制作用。三者的抑制程度無統(tǒng)計學差異。3.脫礦的牙本質膠原經過Hst、Hsd、Nge處理后,牙本質膠原的彈性模量增強、吸水率降低,膠原酶浸泡后HYP釋放量降低,各組之間無統(tǒng)計學差異;ATR-FTIR結果顯示,三種物質處理后,牙本質膠原的三維結構未發(fā)生明顯變化;掃描電鏡結果顯示,脫礦的牙本質表面經過柑橘黃烷酮處理并吹干后,暴露的牙本質膠原仍能保持原有的網狀結構。實驗結果表明柑橘黃烷酮能夠通過對牙本質膠原的生物改性增強膠原自身的抗酶解性能,達到穩(wěn)定膠原的目的。綜上所述,柑橘黃烷酮能夠抑制MMPs活性并且可以對牙本質膠原進行生物改性,保護膠原不被酶降解,提示柑橘黃烷酮具有改善牙本質粘接耐久性的潛力。
【圖文】：

酮物質是一類重要的活性物質，柑橘屬植物中有多種類黃酮物質在柑橘屬中含量最為豐富，廣泛存在于橙子、檸檬、柚子等子、果實、花以及皮中。他們以苷元或者糖苷的形式存在于各比較常見的苷元形式有桔皮素（Hesperitin）和柚皮素（Naringen式為桔皮苷（Hesperidin）。表明它們具有較多的生理功能。首先它們能夠清除氧自由基，且隨著黃酮上的酚羥基數目的增加，其抗氧化能力也顯著增強多的酚羥基，所以其抗氧化能力強于單酚，而糖苷化在一定黃定程度的下降[90]；桔皮苷能夠減少水腫的發(fā)生、緩解炎癥，具；桔皮素能夠抑制甘油三酯的增加，控制血漿中膽固醇和甘油三能夠在較低濃度下通過引發(fā)細胞凋亡抑制癌細胞的增長[92]；桔黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、陰溝腸桿菌、傷寒沙門桿菌等制效果[93]。

計分析使用 SPSS 22.0 軟件進行統(tǒng)計學分析，，Levene 方差齊性檢驗后，采用單因One -way ANOVA）比較各處理組膠原酶活性的總體差異，Tukey 檢驗進行，檢驗標準 α = 0.05。驗結果桔皮素對游離型膠原酶的作用Hst 對膠原酶活性的抑制百分比結果如圖 1.1。1-10-P 對膠原酶活性的抑制80.19 ±2.45%。隨著濃度升高，Hst 對酶活性的抑制比例增大。125 μg/mL、L 的 Hst 對膠原酶的抑制百分比分別為 5.90 ±2.47%、35.62 ±4.55%；當濃 μg/mL 時，抑制比例達到 91.78 ±1.90%。各組間差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.
【學位授予單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R783.1

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本文編號：2635079