【摘要】：在生命過(guò)程中,機(jī)體產(chǎn)生許多含氧物質(zhì),包括活性氧、活性硫等。過(guò)氧化氫作為一種重要的活性氧分子,參與人體的各種生理過(guò)程。但是,過(guò)量的H_2O_2會(huì)誘導(dǎo)多種疾病,如癌癥、動(dòng)脈硬化等。在本文中,我們研究了一種近紅外(NIR)比率型雙光子熒光探針(BC)檢測(cè)生物體系中H_2O_2。探針BC采用氧雜蒽基團(tuán)作為一種新型的反應(yīng)位點(diǎn)并顯現(xiàn)出近紅外發(fā)射。當(dāng)探針與H_2O_2響應(yīng),探針BC釋放出一個(gè)雙光子染料,并表現(xiàn)出非常大的發(fā)射位移為221 nm,從而更加精確的測(cè)量出峰值強(qiáng)度和比率。BC探針在長(zhǎng)時(shí)間暴露于NO中,熒光光譜幾乎沒(méi)有影響,對(duì)親電分子如H_2S、半胱氨酸或GSH幾乎沒(méi)有反應(yīng)。半胱氨酸是重要的半必需氨基酸之一,常參與多種酶促反應(yīng),具有多種生物學(xué)功能。在此,我們提出了一個(gè)靈敏度高和選擇性好的紅色熒光探針RCys檢測(cè)活細(xì)胞和動(dòng)物體內(nèi)的Cys。RCys利用羅丹明衍生物作為熒光平臺(tái),并采用丙烯酸酯為半胱氨酸反應(yīng)位點(diǎn)。當(dāng)RCys與Cys響應(yīng)時(shí),觀察到一個(gè)紅色熒光在638 nm處。RCys與Cys發(fā)生熒光反應(yīng)的時(shí)間很短,并對(duì)Cys表現(xiàn)出良好的選擇性,相比其他硫醇包括谷胱甘肽和半胱氨酸。巰基化合物是細(xì)胞中的重要分子,參與多種生理活動(dòng),例如,在損傷和氧化應(yīng)激反應(yīng)中作為抗氧化劑;用于與金屬結(jié)合的螯合劑;作為信使分子等發(fā)揮著重要作用。硫化氫,最簡(jiǎn)單的生物硫醇,在人類自身的酶和非酶過(guò)程中產(chǎn)生。硫化氫可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖呈濃度依賴性,與腫瘤生長(zhǎng)密切相關(guān)。實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)硫化氫水平對(duì)了解其在腫瘤細(xì)胞增殖和腫瘤診中的作用是非常重要的。實(shí)驗(yàn)中,我們選擇生物素作為癌細(xì)胞特異性組,疊氮基作為H_2S的反應(yīng)位點(diǎn)。由于生物素基團(tuán)對(duì)癌細(xì)胞的定位作用,BN-H_2S可成功地用于癌細(xì)胞中H_2S的雙光子成像。
【圖文】：

圖 1.4-2 共軛聚合物 H2O2探針的結(jié)構(gòu)示意圖膦在與 H2O2反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生二苯基氧化膦，因此，它作為一種方法探針中。利用這一現(xiàn)象，Imato 課題組設(shè)計(jì)了一種具有選擇性圖 1.5）。在不存在過(guò)氧化氫情況下，該探針在 PBS 緩沖溶液（熒光。由于電子供體二苯基膦中的電子向 7-羥基香豆素中發(fā)生光滅熒光。加入 H2O2時(shí)，探針的熒光強(qiáng)度發(fā)生了 20 倍的響應(yīng)，，生氧化生成了供電子能力降低的二苯基氧化膦�？梢园l(fā)現(xiàn)探針的濃度之間存在一個(gè)很好的線性關(guān)系。由于在相同的條件下，加入會(huì)出現(xiàn)強(qiáng)烈的熒光，表明探針 6 對(duì) H2O2選擇性較差。

圖 1.16 硫化氫在人體生理學(xué)中的作用圖水平，H2S 具有獨(dú)特的化學(xué)特性，作為一種良好的還原劑和親有助于闡明其信號(hào)能力，比如最近研究的親電試劑 8-nitro-cGM硫醇反應(yīng)，產(chǎn)生活性過(guò)硫化物，以及與金屬中心發(fā)生互動(dòng)可逆化學(xué)反應(yīng)性，H2S 的信號(hào)作用是多種多樣的，范圍從氧化傳感室的研究表明，包括斯奈德和唐課題組，表明半胱氨酸殘基改變某些酶的潛力，包括蛋白酪氨酸磷酸酶和 ATP 敏感鉀通道究表明，RSS 如硫烷硫，以及硫化氫的其他物種的代謝，可簡(jiǎn)單的硫醇會(huì)有不同的生理作用�；钚孕》肿釉谏矬w內(nèi)的含量不確定，所以在生物體內(nèi)可以檢關(guān)注的焦點(diǎn)。因此，開(kāi)發(fā)新技術(shù)，以更好地研究細(xì)胞、組織及 RSS，以確定這些活性物質(zhì)在生理和病理學(xué)中的更好應(yīng)用。
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R318;O657.3

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4 陳e

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