發(fā)布時間：2019-09-20 13:17

【摘要】：在牙周組織修復與再生的臨床實踐中，牙周支持組織缺失是大多數(shù)牙周修復失敗的主要原因之一。如何制備性能優(yōu)良的引導組織再生膜是目前牙周組織修復與再生中亟待解決的關(guān)鍵問題。天然雞蛋殼膜具有良好的微生物阻隔性、生物相容性以及相互通透的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并且一側(cè)致密一側(cè)疏松，與引導組織再生（Guided Tissue Regeneration，GTR）膜結(jié)構(gòu)極為相似，但因其力學強度差不能直接用作GTR膜。合成高分子，如聚乳酸-羥基乙酸共聚物（Poly（lactic-co-glycolic acid）, PLGA）、聚己內(nèi)酯（Polycaprolactone, PCL）等，機械強度高，可紡性好，但生物相容性較天然高分子差。與其它成膜技術(shù)相比，靜電紡絲技術(shù)制備的納米纖維膜形態(tài)結(jié)構(gòu)類似細胞間質(zhì)，更有利于細胞的粘附、生長和分化。基于GTR膜的性能要求，本研究將酸溶液水解技術(shù)、靜電紡絲技術(shù)、致孔劑瀝濾技術(shù)結(jié)合在一起，旨在構(gòu)建一種兼有良好生物相容性和一定力學強度的新型GTR膜。 本研究包含四個部分： 1. SEP/PLGA纖維膜的制備及理化性能檢測 采用酸溶液水解法從天然雞蛋殼膜中提取可溶性雞蛋殼膜蛋白（SolubleEggshell Membrane Protein, SEP），將其與PLGA按照不同比例共混電紡，制備SEP/PLGA電紡纖維膜。掃描電鏡（Scanning Electron Microscope, SEM）觀察表面形貌，檢測接觸角、拉伸強度，傅里葉紅外光譜分析混合物構(gòu)象。 結(jié)果顯示：不同質(zhì)量比的SEP/PLGA纖維膜均呈現(xiàn)相互交聯(lián)的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。紅外光譜測試表明兩者成功共混。隨著纖維膜中PLGA含量的增加，纖維膜的拉伸強度、斷裂伸長率相應增大，不同比例間有顯著差異（P0.05）；隨著SEP含量的增加，纖維膜的接觸角變小，親水性提高，但不同比例間無顯著差異（P0.05）。實驗表明SEP/PLGA纖維膜具有一定的力學強度和親水性。 2. SEP/PLGA纖維膜體外降解性能的研究 將SEP/PLGA纖維膜在模擬體液中降解，分析降解過程中纖維膜結(jié)構(gòu)、表面形貌、質(zhì)量、斷裂強度的變化。 結(jié)果顯示：SEP/PLGA纖維膜的質(zhì)量、斷裂強度隨著降解時間的延長而逐漸降低，在降解前2w下降速度較快，從2w到6w速度減慢，在降解6w時纖維吸水發(fā)生溶脹，纖維粘連，但結(jié)構(gòu)仍完整并保持一定的力學強度。 3. SEP/PLGA纖維膜細胞相容性的評價 將牙周膜細胞（Periodontal Ligament Cell, PDLC）與纖維膜復合培養(yǎng)，用四氮唑鹽（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-dimphenyltetrazolium bromide,MTT）法評價纖維膜的細胞相容性。 結(jié)果顯示：PDLC在纖維膜表面伸展充分，細胞之間通過偽足相連。MTT測試表明PDLC在纖維膜有較強的增殖能力。 4.電紡SEP/PLGA-PCL雙層不對稱纖維膜及其細胞相容性研究 采用復層電紡結(jié)合致孔劑瀝濾方法制備雙層不對稱纖維膜——含有大孔徑（疏松）的SEP/PLGA纖維膜層和小孔徑（致密）的聚己內(nèi)酯（PCL）纖維膜層。通過ImageJ軟件對電鏡照片進行測量，計算雙層纖維膜的孔徑，并將PDLC細胞與纖維膜復合培養(yǎng)，觀察細胞在致密層和疏松層生長情況，MTT法評價SEP/PLGA-PCL纖維膜的細胞相容性。 結(jié)果顯示：SEP/PLGA纖維膜層（疏松層）孔徑為21±1.3μm，PCL纖維層（致密層）孔徑為3.3±0.4μm。PDLC細胞與雙層纖維膜的復合培養(yǎng)觀察，細胞在致密層僅能貼附表面生長，而在疏松層細胞可長入孔洞內(nèi)并且數(shù)目較多。 本研究利用靜電紡絲技術(shù)構(gòu)建SEP/PLGA-PCL雙層不對稱纖維膜，并從理化性能、體外降解性和細胞相容性方面對其進行評價。結(jié)果證明SEP/PLGA-PCL纖維膜可作為一種具有潛力的GTR膜。
【圖文】：

1 Bio-Gide 膠原膜圖片：致密層（藍色箭頭）和疏松層（白色箭頭圖 2 Bio-Gide 膠原膜電鏡照片（a）致密層 (b) 疏松層R 膜的制備方法 GTR 膜需要具備良好的生物相容性、降解性、力學性能等備時要綜合考慮多種因素，包括孔徑、孔隙率、彈性模量

-13-圖 2 Bio-Gide 膠原膜電鏡照片（a）致密層 (b) 疏松層1.3 GTR 膜的制備方法由于 GTR 膜需要具備良好的生物相容性、降解性、力學性能等，因此，GTR 膜制備時要綜合考慮多種因素，包括孔徑、孔隙率、彈性模量等。目前常見的幾種制備方法都有其優(yōu)缺點和適用范圍。1.3.1 溶劑澆鑄法溶劑澆鑄法制膜技術(shù)操作簡單，，膜成品內(nèi)應力小，廣泛用于組織工程膜的制備中。包崇云等[8]采用溶劑澆鑄法制備聚羥基丁酸酯膜、聚乳酸膠原/rhBMP-2 復合膜用于引導組織再生，并且進行 了一系列降解性能和組織學評價等，證明其具有良好的機械強度、降解速率和組織相容性。Owen 等[9]將含有 MePEG 的 PLGA 澆鑄溶液制備成不同表面形貌的引導膜。粗糙表面
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R318.08

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本文編號：2538838