【摘要】：目的探討一種優(yōu)化的豬骨骼肌脫細(xì)胞制備方法,以期制備理想的豬骨骼肌來源無細(xì)胞基質(zhì)(decellularized porcine muscle tissue,DPMT)支架材料。方法取市售新鮮健康成年家豬腰部骨骼肌組織,采用勻漿-球磨-去垢劑多步驟脫細(xì)胞方案制備DPMT。行組織學(xué)觀察脫細(xì)胞、脫脂效果,天狼猩紅染色分析膠原成分,掃描電鏡觀察材料內(nèi)部微結(jié)構(gòu);測(cè)定材料中DNA含量及總蛋白質(zhì)含量。取人脂肪來源干細(xì)胞(adipose derived stem cells,ADSCs)、小鼠成纖維細(xì)胞(NIH3T3)和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),置于不同濃度DPMT浸提液中,培養(yǎng)后第1、3、5天采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8法測(cè)算細(xì)胞相對(duì)增殖率,評(píng)價(jià)材料細(xì)胞毒性;通過DPMT表面接種HUVECs體外共培養(yǎng)3 d后,行活死細(xì)胞染色評(píng)價(jià)其體外細(xì)胞相容性。采用SPF級(jí)雄性SD大鼠建立DPMT大鼠背部皮下植入模型,于植入3、7、14、28 d取材,大體觀察材料降解情況,并測(cè)量其橫徑;行HE染色和CD31免疫組織化學(xué)染色觀察其生物相容性和血管新生情況。結(jié)果勻漿-球磨-去垢劑多步驟脫細(xì)胞方法操作簡(jiǎn)便,制備DPMT僅需1 d時(shí)間;檢測(cè)顯示DPMT脫細(xì)胞、脫脂完全,主要成分為Ⅰ型膠原及Ⅳ型膠原;DPMT中DNA含量為(15.902±1.392)ng/mg干重,總蛋白質(zhì)含量占其干重的68.94%,顯著低于新鮮豬骨骼肌組織[分別為(140.724±10.422)ng/mg干重及93.14%](P0.05);DPMT內(nèi)部呈均質(zhì)疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。體外細(xì)胞相容性實(shí)驗(yàn)顯示DPMT細(xì)胞毒性評(píng)級(jí)均為0~1級(jí),HUVECs在DPMT表面能穩(wěn)定生長(zhǎng)。DPMT大鼠皮下植入后14 d內(nèi)可保持大體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,至28 d時(shí)完全降解;炎性反應(yīng)在3 d時(shí)最明顯,7 d時(shí)明顯減輕,兩時(shí)間點(diǎn)炎性細(xì)胞數(shù)量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);植入后7 d即可見DPMT內(nèi)部新生血管環(huán)結(jié)構(gòu)形成,14 d時(shí)新生血管環(huán)數(shù)量顯著增加,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論勻漿-球磨-去垢劑多步驟脫細(xì)胞方案省時(shí)高效、可重復(fù)性佳,所制備的DPMT脫細(xì)胞、脫脂完全,蛋白質(zhì)成分保存良好,具有良好的體內(nèi)外生物相容性,且可能具有一定誘導(dǎo)血管新生潛能。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院乳腺外科專病中心;四川大學(xué)華西醫(yī)院生物治療國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·干細(xì)胞與組織工程研究室;
【基金】：成都市科技局-華西醫(yī)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)創(chuàng)新基金項(xiàng)目(ZH13033)~~
【分類號(hào)】：R318.08;R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2538098