發(fā)布時(shí)間：2019-09-15 22:45

【摘要】：研究背景目前在燒傷創(chuàng)面的治療中,越來(lái)越多的皮膚組織工程材料獲得了應(yīng)用,其中真皮替代物的開(kāi)發(fā)亦成為皮膚組織工程的研究熱點(diǎn)。但是現(xiàn)行推廣的人工真皮應(yīng)用受限往往是因?yàn)槠渲Ъ懿牧涎芑^慢、生物相容性不佳、抗感染能力差、價(jià)格昂貴,同時(shí)對(duì)于如何模擬天然體細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)依然是皮膚組織工程結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)中的難點(diǎn)。因此更好的支架結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)方案和選用適合的生物材料是開(kāi)發(fā)新型人工真皮替代物、模擬細(xì)胞外基質(zhì)的兩個(gè)關(guān)鍵。目前靜電紡絲技術(shù)制備的納米纖維支架具有高比表面積、高孔隙率和相互連通的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),相對(duì)于傳統(tǒng)技術(shù)制備的材料能更好地模擬天然細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)。膠原作為真皮替代物的主要材料已被廣泛應(yīng)用,而本研究采用的重組人膠原是通過(guò)基因工程設(shè)計(jì)膠原蛋白基因序列而后進(jìn)行翻譯所生產(chǎn)的,相比于從動(dòng)物提取的膠原,具有親水性、無(wú)疾病隱患等優(yōu)點(diǎn),且易于產(chǎn)業(yè)化。本課題從支架結(jié)構(gòu)入手選用靜電紡絲技術(shù)設(shè)計(jì)納米纖維支架配合重組人膠原蛋白這一新型仿生材料,以求制備出生物相容性更好的表征屬性更滿(mǎn)意的皮膚組織工程支架,為今后指導(dǎo)開(kāi)發(fā)新一代人工真皮替代物的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。第一部分重組人膠原納米纖維支架的制備及表征屬性檢測(cè)目的:采用靜電紡絲技術(shù)制備出重組人膠原蛋白的納米纖維支架,并通過(guò)表征屬性的檢測(cè)評(píng)價(jià)其結(jié)構(gòu)功能,為下步研究打下基礎(chǔ)。方法:采用靜電紡絲技術(shù)制備出重組人膠原納米纖維,與動(dòng)物膠原納米纖維、重組人膠原凍干海綿作對(duì)照,分別進(jìn)行SEM觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)與纖維直徑、孔隙率測(cè)量、力學(xué)性能檢測(cè)、接觸角測(cè)量、體外降解實(shí)驗(yàn)等來(lái)評(píng)價(jià)重組人膠原納米纖維的表征屬性。結(jié)果:重組人膠原納米纖維直徑適宜,交聯(lián)前纖維直徑為(1295±382)nm,交聯(lián)后纖維直徑為(1225±0365)nm�？紫堵矢�,交聯(lián)前孔隙率(93.32±1.13)%,交聯(lián)后孔隙率(92.56±1.67)。親水性好,接觸角為13.85±3.03°。力學(xué)性能滿(mǎn)意,交聯(lián)前平均斷裂伸長(zhǎng)(5.19±3.45)%,平均斷裂強(qiáng)度(8.02±1.98)MPa,平均楊氏模量(187±2.33)MPa。降解率可。結(jié)論:我們對(duì)重組人膠原納米纖維在直徑、孔隙率、親疏水性、力學(xué)性能等方面的表征屬性進(jìn)行檢測(cè),所獲得結(jié)果滿(mǎn)意,可為進(jìn)一步改良改進(jìn)重組人膠原組織工程支架作指導(dǎo)。第二部分重組人膠原納米纖維支架的生物相容性檢測(cè)目的:通過(guò)體內(nèi)體外生物相容性試驗(yàn)評(píng)價(jià)重組人膠原納米纖維的生物相容性,明確其作為組織工程支架的潛能方法:根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16886對(duì)重組人膠原納米纖維進(jìn)行溶血試驗(yàn)和細(xì)胞毒性試驗(yàn)。提取原代人成纖維細(xì)胞并與納米纖維支架共培養(yǎng),分別通過(guò)SEM觀察與MTT法檢測(cè)細(xì)胞于重組人膠原納米纖維的黏附與增殖。大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)與市售可降解縫線(xiàn)羊腸線(xiàn)對(duì)照評(píng)價(jià)重組人膠原蛋白納米纖維在體內(nèi)引起的炎癥反應(yīng)。創(chuàng)面植入實(shí)驗(yàn)與空白組對(duì)照,通過(guò)組織學(xué)檢測(cè)評(píng)價(jià)其對(duì)創(chuàng)面的愈合作用。結(jié)果:用細(xì)胞毒性試驗(yàn)和溶血試驗(yàn)結(jié)果顯示材料的細(xì)胞毒性檢測(cè)和溶血測(cè)試均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16886。材料種植成纖維細(xì)胞后SEM觀察和MTT檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞在支架材料上增殖狀況明顯。大鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示重組人膠原蛋白納米纖維在體內(nèi)引起的炎癥反應(yīng)低于市售可降解縫線(xiàn)羊腸線(xiàn),創(chuàng)面植入實(shí)驗(yàn)表明重組人膠原蛋白納米纖維對(duì)促進(jìn)創(chuàng)面愈合,促進(jìn)血管化作用良好。結(jié)論:重組人膠原納米纖維具備良好的生物相容性,在組織工程中具備很好的應(yīng)用潛能。
【圖文】：

圖 1:(A)為 RHC 納米纖維交聯(lián)前(B)為動(dòng)物膠原納米纖維交聯(lián)前(C)為 RHC 凍干海綿交聯(lián)前(E)為RHC納米纖維交聯(lián)后(F)為動(dòng)物膠原納米纖維交聯(lián)后(G)為RHC凍干海綿交聯(lián)后

圖 2：四組材料的纖維直徑. RHSC 為重組人膠原納米纖維，，RHSC-link 為重組原納米纖維交聯(lián)后，COL 為動(dòng)物膠原納米纖維，COL-link 為動(dòng)物膠原納米纖維后。*p<0.01二、孔隙率
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2535967