發(fā)布時(shí)間：2019-09-11 13:57

【摘要】：影響類彈性蛋白多肽(ELPs)自組裝成微球的因素較多,目前尚缺乏系統(tǒng)研究。以類彈性蛋白多肽[KV8F]n為對(duì)象,利用動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定了不同條件下其自組裝成微球的粒徑。結(jié)果表明:隨著分子量的增加ELPs形成的微球粒徑也隨之增大,粒徑的均一度減小;當(dāng)鹽濃度低于0.4 mol/L時(shí),鹽濃度的增加,微球粒徑相應(yīng)增加,而鹽濃度高于0.4 mol/L則呈減少的趨勢(shì),但粒徑均大于1.1μm;而當(dāng)ELPs末端融合木聚糖酶和1,3-丙二醇氧化還原酶后,其自組裝形成的微球粒徑急劇減小,約為游離ELPs的1/10,分別為151.0 nm和174.2 nm。導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因可能是酶分子和ELPs通過靜電引力相互作用后,酶分子的空間位阻妨礙了ELPs分子的聚集。
【圖文】：

則是大小分布的標(biāo)準(zhǔn)偏差。而Zeta電位則是從上述樣品中取0.5mL緩緩注入倒立的彎曲式毛細(xì)管樣品池中，當(dāng)樣品到達(dá)樣品池U形管低端時(shí)(防止沖入氣泡)，將樣品池正立，注滿樣品，平衡2min后，測(cè)量Zeta電位。所使用的儀器為英國馬爾文公司的NanoZSZeta電位儀，樣品粒徑在中科院城市環(huán)境研究所測(cè)定。2結(jié)果與分析2.1不同長(zhǎng)度ELPs的制備及粒徑掃描溫度的選擇表達(dá)宿主菌E.coliBL21(DE3)經(jīng)培養(yǎng)，加入IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，經(jīng)細(xì)胞破碎及ITC(Inversetransitioncycling，可逆相變循環(huán))分離純化ELPs后，所得ELPs經(jīng)電泳后所得圖譜如圖1所示。由圖可知，不同長(zhǎng)度ELPs電泳條帶清晰可見，條帶較窄，易辨認(rèn)，由其電泳條帶在SDS-PAGE中位置可推測(cè)其分子量與預(yù)期一致。電泳圖經(jīng)BandScan軟件分析ELPs純度，結(jié)果顯示所有ELPs條帶純度均達(dá)98%以上，符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。圖1不同長(zhǎng)度ELPs電泳圖Fig.1SDS-PAGEanalysisofdifferentELPs.M:marker;1:ELPs140;2:ELPs120;3:ELPs80;4:ELPs60;5:ELPs40.

葛慧華等/影響類彈性蛋白多肽自組裝成微球的因素及其作用機(jī)制cjb@im.ac.cn1277在氯化鈉終濃度為0.5mol/L的PBS緩沖液中測(cè)定不同長(zhǎng)度ELPs在升溫過程中，其在350nm處吸光值的變化如圖2所示。由圖可知，在很窄的溫度范圍內(nèi)(2 3℃)，溶液吸光值急劇上升，這表明ELPs在該溫度范圍內(nèi)發(fā)生了相變，其溶解度顯著降低，且溫度下降時(shí)，ELPs又重新溶解在溶液中，即該過程是一個(gè)可逆的過程。而隨著ELPs分子量增大其發(fā)生相變的溫度也逐漸下降，這與之前報(bào)道吻合[10]。從圖中還可以看出，當(dāng)溫度為40℃時(shí)，幾乎所有的ELPs分子均完全發(fā)生相變，其吸光值達(dá)到最大，鑒于此，為了保證后續(xù)粒徑測(cè)定時(shí)溫度的統(tǒng)一性，故在后續(xù)試驗(yàn)過程中選取樣品池的溫度均為40℃。2.2不同長(zhǎng)度ELPs對(duì)所形成微球粒徑的影響在相同條件下測(cè)定了不同長(zhǎng)度ELPs自組裝成微球的粒徑大小，結(jié)果如表1所示。從表中可以看出，隨著ELPs分子量的增加，其自組裝所形成的微球粒徑逐漸增大，其粒徑范圍在1.1μm至3.6μm之間，其中ELPs60與ELPs80圖2不同長(zhǎng)度ELPs相變圖Fig.2ThephrasetransitionofdifferentELPs.表1ELPs長(zhǎng)度對(duì)粒徑大小及均一度的影響Table1InfluenceofELPsonthesizeanduniformoftheparticleELPlengthParticlediameter(nm)Peakwidth(nm)ELP401109185.8ELP602029204.2ELP802252467.1ELP1202547457.5ELP1403636888.3粒徑相差較小，而ELPs120和ELPs140粒徑則相差較大。而從其粒徑分布峰寬則反應(yīng)了粒徑的均一度，隨著ELPs分子量的增加，其峰寬隨之增大，，意味著粒徑分布范圍更廣，粒徑的均一度下降。通過測(cè)定相變前后溶液的Zeta電位，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在ELPs發(fā)生相變前溶液的Zeta電位一般都在 11.7mV左右，而發(fā)生相變后其Zeta電位一般都在 0.1mV，此時(shí)，相
【作者單位】： 華僑大學(xué)生物工程與技術(shù)系;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(Nos.21376103,31170939) 福建省自然科學(xué)基金(No.2013J01048)資助~~
【分類號(hào)】：R318.08

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本文編號(hào)：2534456