【摘要】：研究背景及目的 糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）作為糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，造成嚴(yán)重的視力損害已引起廣泛關(guān)注。本研究通過(guò)體外選擇性培養(yǎng)牛視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(BREC)，探討高糖環(huán)境對(duì)其的影響，并觀察3-氨基苯甲酰胺（3-AB）對(duì)體外培養(yǎng)的高糖條件下的BREC生長(zhǎng)及細(xì)胞增殖的影響，為糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療提供理論依據(jù)及治療線索。 方法 ①體外分離牛視網(wǎng)膜組織，結(jié)合選擇性培養(yǎng)基的使用等方法選擇性培養(yǎng)牛視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞，，Von Willebrand因子免疫組化鑒定，觀察其形態(tài)學(xué)特點(diǎn)并制作生長(zhǎng)曲線。②將傳代后的細(xì)胞設(shè)為不同濃度梯度的葡萄糖和甘露醇對(duì)照組，以及空白對(duì)照組。四唑鹽比色法描繪各干預(yù)組及對(duì)照組BREC的生長(zhǎng)情況，流式細(xì)胞儀觀察各種不同葡萄糖濃度對(duì)BREC影響。③分為低糖對(duì)照組、高糖對(duì)照組（30mmol/L）、高糖（30mmol/L）+不同濃度3-AB組（0.05mmol/L，0.1mmol/L，0.25mmol/L，0.5mmol/L，0.75mmol/L，1mmol/L），用四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法檢測(cè)BREC的增殖。采用流式細(xì)胞分析技術(shù)觀察不同濃度3-AB對(duì)高糖環(huán)境中培養(yǎng)的BREC的凋亡的影響。 結(jié)果 ①選擇性培養(yǎng)的BREC能夠連續(xù)傳代，且純度達(dá)到98%以上，對(duì)VonWillebrand因子抗體染色陽(yáng)性，BREC融合后呈鋪路石樣單層生長(zhǎng)，有接觸抑制。其生長(zhǎng)曲線顯示該細(xì)胞在傳代后的第3～4d進(jìn)入對(duì)數(shù)期增殖，到第10～12d進(jìn)入平臺(tái)期。②葡萄糖濃度在10mmol/L到25mmol/L之間時(shí)，四唑鹽比色實(shí)驗(yàn)顯示對(duì)細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用；葡萄糖濃度30mmol/L時(shí)，四唑鹽比色實(shí)驗(yàn)顯示抑制細(xì)胞增殖，同時(shí)，流式細(xì)胞分析在細(xì)胞周期的凋亡峰增加。③MTT比色法顯示，一定濃度的3-AB可以降低高糖對(duì)BREC生長(zhǎng)的抑制作用。在濃度為0.25mmol/L時(shí)OD值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。流式細(xì)胞分析技術(shù)顯示，0.25mmol/L的3-AB可明顯減少BREC的凋亡。 結(jié)論 ①選擇性培養(yǎng)方法的應(yīng)用可獲得較高純度的BREC，簡(jiǎn)單且重復(fù)性好，無(wú)需額外除雜步驟。②葡萄糖在一定濃度時(shí)促進(jìn)牛視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，在一定的高濃度時(shí)抑制其增殖。③一定濃度的3-AB對(duì)體外高糖環(huán)境中培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能在于3-AB可以減少細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

貼壁生長(zhǎng)（見(jiàn)圖1）。早期細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，約 8~12 d 細(xì)胞生長(zhǎng)至融合狀態(tài)呈鋪路石樣（見(jiàn)圖 2）。融合的細(xì)胞呈單層生長(zhǎng)，存在接觸抑制。BREC 的 Von Willebrand 因子多克隆抗體染色顯示陽(yáng)性（見(jiàn)圖 3）。通過(guò)每高倍鏡視野下目鏡網(wǎng)格計(jì)數(shù)，得陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于98 %。一抗對(duì)照呈陰性（見(jiàn)圖 4）。

圖 1 原代培養(yǎng) 48 h 的 BREC 形態(tài) SP×2001 Photograph of BREC 48 hours after primary eulture S1
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R318.18

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2529390