【摘要】：目的研究植物雌激素葛根素復(fù)合多孔鉭支架材料對MG-63成骨細胞增殖及成骨細胞因子COL-I、OC和OPN表達的影響,試圖探討植物類雌激素葛根素復(fù)合多孔鉭材料對成骨細胞增殖和分化的作用機制,為臨床應(yīng)用葛根素和多孔鉭支架材料治療骨愈合和再生提供可行性的理論和實驗依據(jù)。方法1大體觀察和掃描電鏡觀察國產(chǎn)多孔鉭支架的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征;2 MG-63成骨細胞培養(yǎng),并采用COL-I免疫細胞化學(xué)染色及ALP染色進行MG-63成骨細胞鑒定;3倒置相差顯微鏡觀察成骨細胞的生長狀態(tài);4實驗分組,葛根素組:不同終濃度葛根素(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L)分別與MG-63細胞復(fù)合培養(yǎng),并篩選出葛根素作用最佳劑量濃度組;多孔鉭組:多孔鉭支架與MG-63細胞復(fù)合培養(yǎng);葛根素多孔鉭組:多孔鉭支架材料與葛根素藥物干預(yù)MG-63成骨細胞復(fù)合培養(yǎng);空白組:單純MG-63成骨細胞培養(yǎng);5 CCK-8法檢測各組成骨細胞的生長增殖狀態(tài);6掃描電鏡觀察葛根素復(fù)合成骨細胞在多孔鉭上黏附、增殖的形態(tài)變化;7免疫細胞化學(xué)染色法檢測各組成骨細胞COL-I、OC、OPN的表達;8實時熒光定量PCR法檢測各組成骨細胞COL-I、OC、OPN mRNA相對表達量。結(jié)果1大體觀察多孔鉭支架為表面粗糙不平,質(zhì)硬,表面分布均勻、密集的微孔,呈蜂窩狀;掃描電鏡觀察多孔鉭支架表面及斷面分布大量均勻的微孔結(jié)構(gòu),內(nèi)部孔隙之間相互連通,呈三維的多孔結(jié)構(gòu)。2 COL-I免疫細胞化學(xué)染色顯示成骨細胞胞漿內(nèi)可見棕黃色顆粒狀,ALP染色顯示成骨細胞胞漿內(nèi)可見藍紫色顆粒,細胞有較強的ALP活性及鈣化能力,具有成骨細胞特性。3倒置相差顯微鏡觀察,隨著培養(yǎng)時間的延長,細胞體積逐漸增大,數(shù)量逐漸增加,細胞形態(tài)多以長三角形、長梭形為主,胞漿突起增多,細胞間逐漸聚集融合形成細胞集落。4隨著培養(yǎng)時間的延長,成骨細胞不斷生長增殖,成骨細胞的OD值不斷升高。在各時間點,葛根素多孔鉭組成骨細胞的生長增殖狀況與其它3組相比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),葛根素多孔鉭組細胞增殖活性顯著高于其它3組;葛根素組和多孔鉭組分別與空白組之間相比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),葛根素組和多孔鉭組細胞增殖活性均高于空白組,但葛根素不同濃度組,以葛根素1μmol/L組細胞增殖最快;葛根素組和多孔鉭組之間細胞增殖活性相比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5掃描電鏡觀察,隨著復(fù)合培養(yǎng)時間的延長,成骨細胞在多孔鉭支架表面及微孔內(nèi)疊層黏附生長,逐漸伸展并伸出偽足,細胞偽足逐漸融合形成片狀,細胞分泌的基質(zhì)、膠原完全覆蓋材料表面。6 COL-I、OC和OPN表達定位于成骨細胞胞漿,陽性反應(yīng)呈棕黃色,分別在第3d和第6d復(fù)合培養(yǎng)時,對于COL-I和OC的表達,葛根素多孔鉭組與其它3組相比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),葛根素多孔鉭組COL-I和OC的表達均顯著高于其它3組;葛根素組和多孔鉭組分別與空白組相比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),葛根素組和多孔鉭組COL-I和OC的表達均高于空白組;葛根素組和多孔鉭組之間相比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。對于OPN的表達,各組之間相比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。比較第3d和第6d葛根素多孔鉭組COL-I、OC和OPN表達量,兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),第6d葛根素多孔鉭組COL-I、OC和OPN的表達量明顯高于第3d葛根素多孔鉭組的三者表達。7對于COL-I和OC的mRNA相對表達量,葛根素多孔鉭組和其它3組之間相比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),葛根素多孔鉭組COL-I和OC的mRNA相對表達量均顯著高于其它3組;葛根素組和多孔鉭組分別與空白組之間相比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),葛根素組和多孔鉭組COL-I和OC的mRNA相對表達量均高于空白組;葛根素組和多孔鉭組之間相比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),葛根素組和多孔鉭組之間COL-I和OC的mRNA相對表達量無差別。對于OPN mRNA相對表達量,各組之間相比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1葛根素與國產(chǎn)多孔鉭/成骨細胞復(fù)合培養(yǎng),可促進成骨細胞的增殖、黏附生長并及細胞外基質(zhì)的分泌。2葛根素能促進多孔鉭/成骨細胞復(fù)合物中成骨細胞成骨因子COL-I、OC、OPN基因及蛋白的表達,從而促進成骨。3不同濃度葛根素均可促進成骨細胞的增殖,其中以葛根素1μmol/L為最適宜濃度。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R318.08;R68

【參考文獻】

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本文編號：2309890