本文選題：穩(wěn)定同位素代謝標(biāo)記 + CBL/J小鼠　； 參考：《生物工程學(xué)報(bào)》2014年10期

【摘要】：文中探討了穩(wěn)定同位素代謝標(biāo)記(SILAC)定量技術(shù)在哺乳動(dòng)物模型上的應(yīng)用,建立了可用于疾病模型比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究的定量?jī)?nèi)標(biāo)。用含1%13C6-Lysine的SILAC鼠糧飼養(yǎng)C57BL/6J雌性小鼠,記為F0代,通過(guò)與雄性小鼠交配繁殖出F1代,相同方法繁殖出F2代標(biāo)記小鼠。分離F2代小鼠的大腦、肺臟、心臟、胃、小腸、肝臟、脾臟、腎臟和肌肉組織,提取各組織的全蛋白,進(jìn)行蛋白酶Lys-C酶切,利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS/MS)進(jìn)行鑒定和定量分析。對(duì)蛋白質(zhì)定量結(jié)果進(jìn)行高斯擬合確定均值及標(biāo)準(zhǔn)差,得出不同臟器和小鼠整體的標(biāo)記效率,肝臟的標(biāo)記效率最高,為96.34%±0.90%;大腦標(biāo)記效率最低,為92.62%±1.98%,小鼠整體標(biāo)記效率為95.80%±0.64%,符合SILAC標(biāo)記效率不低于95%的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。成功地將SILAC方法從微生物和細(xì)胞系水平拓展到哺乳動(dòng)物模型,這為基于動(dòng)物模型研究疾病發(fā)生、發(fā)展機(jī)制提供了有力工具。
[Abstract]:In this paper, the application of stable isotope metabolic marker silac in mammalian models was discussed. A quantitative internal standard for comparative proteomics of disease models was established. Female C57BL / 6J mice were fed with SILAC mouse grain containing 1 carton of C6-Lysine for F 0 generation. F1 generation was bred by mating with male mice and F2 generation labeled mice were bred by the same method. The brain, lung, heart, stomach, small intestine, liver, spleen, kidney and muscle tissues of F2 generation mice were isolated, and the whole protein of each tissue was extracted and digested with protease Lys-C enzyme. High performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (HPLC / MS / MS) was used to identify and quantify. The mean value and standard deviation of protein quantitative results were determined by Gao Si fitting. The results showed that the labeling efficiency of different organs and mice was the highest, the labeling efficiency of liver was 96.34% 鹵0.90, and the labeling efficiency of brain was the lowest. The overall labeling efficiency of mice was 95.80% 鹵0.64%, which was in accordance with the international standard of SILAC labeling efficiency of 95%. The SILAC method has been successfully extended from microorganism and cell line to mammalian model, which provides a powerful tool for the study of disease occurrence and development mechanism based on animal model.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué);軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所;北京蛋白質(zhì)組研究中心;
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(No.2011CB910600) 國(guó)家自然科學(xué)基金(Nos.31070673,31170780)資助~~
【分類(lèi)號(hào)】：R817.1

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本文編號(hào)：2015922