本文選題：脂肪干細(xì)胞 + 細(xì)胞源性細(xì)胞外基質(zhì)��； 參考：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：對(duì)于臨床中大段神經(jīng)缺損,目前商用的神經(jīng)移植物難以獲得滿(mǎn)意的修復(fù)效果。大量的研究證實(shí)細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)調(diào)控細(xì)胞行為具有重要意義,無(wú)論是對(duì)干細(xì)胞還是神經(jīng)再生相關(guān)細(xì)胞,均可以促進(jìn)其遷移、增殖和分化。所以,對(duì)于周?chē)窠?jīng)而言,細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境可能對(duì)周?chē)窠?jīng)的再生具有良好的促進(jìn)作用。脂肪干細(xì)胞可通過(guò)臨床抽脂等獲取,其來(lái)源相對(duì)廣泛,被廣泛用于組織工程與神經(jīng)再生研究,但研究的關(guān)注點(diǎn)多放在它的分化能力、旁分泌作用上,而對(duì)其分泌的細(xì)胞源性細(xì)胞外基質(zhì)研究不多。目的：本課題通過(guò)研究脂肪干細(xì)胞促進(jìn)神經(jīng)再生的作用,進(jìn)一步探討脂肪干細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞外基質(zhì)微環(huán)境對(duì)神經(jīng)再生的影響,并利用脂肪干細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞外基質(zhì)修飾生物材料支架并復(fù)合脂肪干細(xì)胞構(gòu)建一種新型組織工程神經(jīng)并評(píng)價(jià)其修復(fù)周?chē)窠?jīng)缺損的效果。方法：1.通過(guò)酶消化的方法培養(yǎng)原代脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells, ADSCs),然后進(jìn)行流式表面抗原的鑒定、三系誘導(dǎo)分化、CCK8法測(cè)定不同代ADSCs的增殖及向類(lèi)雪旺細(xì)胞分化能力;2.ELISA法測(cè)定ADSCs條件培養(yǎng)基中神經(jīng)再生相關(guān)因子的含量。EdU法測(cè)定雪旺細(xì)胞在加入條件培養(yǎng)基和與ADSCs間接共培養(yǎng)后的增殖情況。免疫熒光測(cè)定背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元在加入條件培養(yǎng)基、與ADSCs間接共培養(yǎng)和直接共培養(yǎng)的軸突生長(zhǎng)長(zhǎng)度；3.制備ADSCs源性細(xì)胞外基質(zhì),用光鏡和電鏡鑒定其表面特征,免疫熒光鑒定其成分,體外評(píng)價(jià)其對(duì)雪旺細(xì)胞和背根神經(jīng)節(jié)的作用；4.利用ADSCs源性細(xì)胞外基質(zhì)修飾殼聚糖空管內(nèi)表面并復(fù)合ADSCs構(gòu)建組織工程神經(jīng),并將之植入到大鼠坐骨神經(jīng)缺損模型中,并從步態(tài)分析、電生理評(píng)價(jià)、組織學(xué)評(píng)價(jià)和靶器官評(píng)價(jià)等方面評(píng)價(jià)其促進(jìn)周?chē)窠?jīng)修復(fù)的作用。5.對(duì)比血管基質(zhì)細(xì)胞混合物(stromal vascular fraction. SVF)與ADSCs在大鼠坐骨神經(jīng)缺損修復(fù)中的作用。結(jié)果：1.脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)的類(lèi)雪旺細(xì)胞,S100、GFAP和p75免疫熒光染色陽(yáng)性；2.在與ADSCs間接共培養(yǎng)環(huán)境下,間接共培養(yǎng)組的EdU陽(yáng)性細(xì)胞與條件培養(yǎng)基一致,高于普通培養(yǎng)基,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；在與ADSCs間接共培養(yǎng)和直接共培養(yǎng)的環(huán)境下,直接共培養(yǎng)組的背根神經(jīng)元軸突長(zhǎng)度常于其它組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；3.制備了ADSCs源性的細(xì)胞外基質(zhì),其表面的基質(zhì)成分交織成網(wǎng),高倍電鏡下可見(jiàn)大量微孔樣結(jié)構(gòu)。其成分含有大量的層粘連蛋白、纖連蛋白、Ⅰ和Ⅳ型膠原。體外驗(yàn)證了ADSCs源性細(xì)胞外基質(zhì)同樣具有促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖和背根神經(jīng)節(jié)軸突生長(zhǎng)的作用；4.構(gòu)建的ADSCs源性細(xì)胞外基質(zhì)修飾并復(fù)合ADSCs勺組織工程神經(jīng)在體內(nèi)促進(jìn)了模型大鼠步態(tài)、復(fù)合肌肉動(dòng)作電位、有髓神經(jīng)纖維直徑和髓鞘厚度及靶肌肉橫截面肌纖維面積等指標(biāo)的恢復(fù),結(jié)果優(yōu)于ECM和ADSCs組,并接近自體神經(jīng)的治療效果；5.一與ADSCs相比,SVF也可使神經(jīng)纖維直徑和髓鞘厚度增加,并提高腓腸肌濕重恢復(fù)率,兩者之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但是高于空管組而低于自體神經(jīng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1. ADSCs可以向類(lèi)雪旺細(xì)胞分化;2.ADSCs的旁分泌作用可促進(jìn)雪旺細(xì)胞的增殖和背根神經(jīng)元軸突的生長(zhǎng),在神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的過(guò)程中,細(xì)胞與神經(jīng)元軸突的接觸也發(fā)揮了重要的作用；3.ADSCs源性ECM在體外可促進(jìn)雪旺細(xì)胞的增殖和背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元軸突的生長(zhǎng),并可以引導(dǎo)雪旺細(xì)胞和軸突順ECM的方向生長(zhǎng)；4.構(gòu)建的ADSCs源性細(xì)胞外基質(zhì)并復(fù)合ADSCs的組織工程神經(jīng)促進(jìn)了SD大鼠坐骨神經(jīng)功能和形態(tài)的恢復(fù),其結(jié)果接近自體神經(jīng)；5.SVF具有與ADSCs相似的促進(jìn)SD大鼠坐骨神經(jīng)再生的作用,可以作為替代ADSCs的種子細(xì)胞使用。
[Abstract]:Objective : To study the effects of extracellular matrix on the regeneration of peripheral nerve .
3 . preparing ADSCs source extracellular matrix , using light microscope and electron microscope to identify its surface features , and immunofluorescence to identify its components , and evaluate its effect on Schwann cells and dorsal root ganglia in vitro ;
4 . Using ADSCs to modify the inner surface of chitosan hollow tube and compound ADSCs to construct the tissue engineering nerve , and implant it into the rat sciatic nerve defect model , and evaluate its role in promoting peripheral nerve repair from gait analysis , electrophysiological evaluation , histological evaluation and target organ evaluation . 5 . Contrast the vascular matrix cell mixture ( stromal vascular fraction ) . SVF and ADSCs play a role in the repair of sciatic nerve defects in rats . Results : 1 . Fat stem cell - induced Schwann cells , S100 , GFAP and p75 immunofluorescence staining were positive ;
2 . In the indirect co - culture environment with ADSCs , the EdU positive cells of the indirect co - culture group were consistent with the conditioned medium , which was higher than that of common medium ( P0.01 ) .
In the environment of indirect co - culture and direct co - culture with ADSCs , the axon length of dorsal root neurons of the direct co - culture group was higher than that in other groups ( P0.01 ) .
3 . The extracellular matrix of ADSCs derived from ADSCs was prepared . The matrix composition on the surface of ADSCs was made into a net , and a large number of micro - pore - like structures were observed under electron microscope . The components contained a large amount of laminin , fibronectin , I and IV collagen .
4 . The reconstructed ADSCs derived extracellular matrix modified and compound ADSCs spoon tissue engineering nerves promoted the restoration of gait , compound muscle action potential , myelinated nerve fiber diameter , myelinated nerve fiber diameter , myelinated nerve fiber diameter and muscle fiber area of target muscle in vivo . The results were superior to that of ECM and ADSCs and close to the treatment effect of autologous nerve ;
5 . Compared with ADSCs , SVF could increase the diameter of nerve fibers and the thickness of myelin sheath , and increase the recovery rate of wet - weight and wet weight , but there was no significant difference between them . However , the difference was statistically significant ( P0.05 ) . Conclusion : 1 . ADSCs can differentiate into Schwann cells ; 2 . The side - secretion of ADSCs can promote the proliferation of Schwann cells and the growth of dorsal root neurons . During the axon growth of neurons , the contact between cells and axons also plays an important role .
3 . The proliferation of Schwann cells and axonal growth of dorsal root ganglion neurons can be promoted in vitro by ADSCs .
4 . The tissue engineering nerve of ADSCs derived from ADSCs promotes the recovery of sciatic nerve function and morphology in SD rats .
5.SVF has the function of promoting the regeneration of sciatic nerve of SD rats similar to that of ADSCs , and can be used as seed cells for the replacement of ADSCs .
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08;R651.3

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本文編號(hào)：1926774