本文選題：聚氨酯 + HSNGLPL多肽��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：第一章分析HSNGLPL多肽修飾聚氨酯(HSNGLPL-PUs)的體外細(xì)胞相容性[目的]通過(guò)分析材料浸提液對(duì)C2C12細(xì)胞增殖及毒性的影響,探討HSNGLPL-PUs的細(xì)胞相容性。[方法]將合成的 L-P-PU(50mg HSNGLPL 修飾)、M-P-PU(100mg HSNGLPL 修飾)及H-P-PU(150mg HSNGLPL修飾)按試樣表面積/浸泡液體積=6cm2/mL比率提取浸提液(DMEM,48h),并與C2C12細(xì)胞共培養(yǎng)48h,CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖活性。[結(jié)果]RGR細(xì)胞毒性評(píng)定表明,聚氨酯浸提液具有一定的細(xì)胞毒性(1級(jí)),但50-100mg濃度范圍內(nèi)HSNGLPL多肽修飾并未改變聚氨酯的細(xì)胞活性。[結(jié)論]HSNGLPL多肽成分的添加及處理過(guò)程不影響聚氨酯材料的細(xì)胞相容性。第二章HSNGLPL-PUs材料的體內(nèi)炎癥和免疫反應(yīng)性研究[目的]分析植入肌內(nèi)材料誘導(dǎo)的肌內(nèi)炎性滲出及肌纖維的壞死和再生,明確HSNGLPL-PUs的體內(nèi)反應(yīng)性。[方法]將 HSNGLPL 多肽液、BDO-PU(無(wú) HSNGLPL 修飾)、L-P-PU、M-P-PU和H-P-PU材料(0.2×0.4cm2)植入腓腸肌內(nèi),在14d、28d、42d和56d,摘取小鼠腓腸肌,冰凍切片、HE染色或免疫熒光染色并觀察:i)單核/巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)的滲出;ii)巨噬細(xì)胞凋亡;iii)植入物周邊肌纖維的壞死和再生、再生肌纖維MHC-I表達(dá);[結(jié)果]14d,BDO-PU炎性滲出最顯著,隨后逐漸消退,56d時(shí)炎癥基本消失;L-P-PU、M-P-PU和H-P-PU誘發(fā)的炎性滲出在移植初期(7-14d)時(shí)低于BDO-PU,但炎癥持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),56d仍可見(jiàn)滲出的淋巴細(xì)胞;在14d、28d和42d,BDO-PU肌內(nèi)巨噬細(xì)胞凋亡數(shù)顯著高于L-P-PU、M-P-PU和H-P-PU組,但56d時(shí)L-P-PU、M-P-PU和H-P-PU組仍可見(jiàn)較多的凋亡細(xì)胞;BDO-PU組肌內(nèi)罕見(jiàn)DCs細(xì)胞(CD11c+),但L-P-PU、M-P-PU和H-P-PU材料誘發(fā)更顯著的DCs滲出,滲出細(xì)胞的數(shù)量與PU材料內(nèi)的HSNGLPL多肽濃度呈正相關(guān);28d和42d時(shí),各組材料周圍肌組織內(nèi)都可見(jiàn)CD3+/CD4+T細(xì)胞,56d時(shí),BDO-PU材料周圍CD4+T細(xì)胞基本消失,L-P-PU、M-P-PU和H-P-PU組仍觀察到CD4+T細(xì)胞;各組植入材料周圍均可見(jiàn)肌纖維潰變,BDO-PU組于28d后可見(jiàn)新生肌纖維(Dystrophy+),L-P-PU、M-P-PU 和 H-P-PU 組則于植入早期(14d)出現(xiàn)肌纖維再生,HSNGLPL多肽濃度較高的H-P-PU組肌纖維的再生更為顯著,42d時(shí)該組材料周圍的損傷肌纖維基本完成修復(fù),BDO-PU材料于56d時(shí)仍可見(jiàn)中央核肌纖維;各組PU材料均不能誘發(fā)再生肌纖維表達(dá)MHC-I分子。[結(jié)論]HSNGLPL-PUs肌內(nèi)植入后,將迅速誘發(fā)肌內(nèi)炎癥反應(yīng)及肌細(xì)胞壞死,滲出,以單核-巨噬細(xì)胞為主。PU材料內(nèi)HSNGLPL肽成分可能抑制炎癥細(xì)胞凋亡,從而導(dǎo)致炎癥的持續(xù)。此外,體內(nèi)的植入材料逐漸降解并釋放HSNGLPL肽成分,可能有助于局部肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活、增殖與分化,于移植后期促進(jìn)肌纖維再生。第三章分析體內(nèi)、外條件下HSNGLPL-PUs對(duì)TGF-β的富集及釋放[目的]明確合成的HSNGLPL-PUs對(duì)TGF-β的富集及體內(nèi)釋放。[方法]將各組HSNGLPL-PUs浸泡于含有500pg/mL的重組人TGF-β緩沖液中4℃C 1h,Elisa檢測(cè)緩沖液中殘余的TGF-β濃度;肌內(nèi)植入各組HSNGLPL-PUs材料,分別于14d和28d摘取肌組織,勻漿,Elisa檢測(cè)勻漿上清中TGF-β濃度。將預(yù)富集TGF-β的PU材料(HSNGLPL-PU-TGF-β)植入小鼠肌肉,分別于植入術(shù)后7,14,21,28d摘取肌肉,冰凍切片,HE及免疫熒光觀察炎癥滲出,masson染色觀察局部纖維化程度,或提取肌組織RNA,qRT-PCR觀察肌組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)分子水平改變。[結(jié)果]體外條件下,HSNGLPL-PUs浸泡緩沖液中TGF-β水平顯著低于BDO-PU浸泡液,其降低程度與PU包含的HSNGLPL肽濃度呈正相關(guān)。14d時(shí),包含H-P-PU材料的肌組織TGF-β濃度顯著高于HSNGLPL多肽注射組及BDO-PU組;28d時(shí)各組肌組織TGF-β濃度無(wú)顯著差異。較之BDO-PU和HSNGLPL-PU組,于移植7d和14d時(shí),HSNGLPL-PU-TGF-β材料誘導(dǎo)更為劇烈的炎性滲出,但滲出范圍相對(duì)局限,持續(xù)時(shí)間較短,28d時(shí)炎癥基本消退。Masson染色可見(jiàn),HSNGLPL-PU-TGF-β材料誘發(fā)的臨近肌組織纖維化(藍(lán)色)較其他材料組更加顯著。ER Stress標(biāo)志分子(ATF6、Bip、Calnexin、Spliced XBP1、CHOP 和 Cathepsin D)mRNA 表達(dá)水平可見(jiàn),材料各組顯著高于正常肌組織,隨種植時(shí)間延長(zhǎng),上述分子水平逐漸下調(diào)。移植早期(7d),HSNGLPL-PU-TGF-β組的ER Stress分子mRNA水平顯著高于BDO-PU和HSNGLPL-PU組。[結(jié)論]體內(nèi)、外條件下,HSNGLPL多肽修飾的聚氨酯均可富集TGF-β分子。肌內(nèi)植入后,預(yù)富集的TGF-β自HSNGLPL多肽-聚氨酯材料快速釋放并可能干預(yù)肌內(nèi)炎性反應(yīng)和肌組織纖維化,并影響肌組織的ER Stress反應(yīng)。
[Abstract]:In the first chapter, the cytocompatibility of HSNGLPL polypeptide modified polyurethane (HSNGLPL-PUs) in vitro was analyzed. [Objective] by analyzing the effect of material extract on the proliferation and toxicity of C2C12 cells, the cytocompatibility of HSNGLPL-PUs was discussed. [method] the synthesis of L-P-PU (50mg HSNGLPL modification), M-P-PU (100mg HSNGLPL modification) and H-P-PU (150mg modification) The extraction solution (DMEM, 48h) was extracted by the =6cm2/mL ratio of the sample surface area / soaking liquid volume, and 48h was co cultured with C2C12 cells and CCK-8 was used to detect the cell proliferation activity. [results the toxicity assessment of]RGR cells showed that the polyurethane extract had a certain cytotoxicity (1), but the HSNGLPL polypeptide modification in 50-100mg concentration did not change the cells of the polyurethane. [conclusion the addition and treatment of]HSNGLPL polypeptide components do not affect the cellular compatibility of polyurethane materials. Second chapter HSNGLPL-PUs in vivo inflammation and immunoreactivity study [Objective] to analyze the intramuscular inflammatory exudation induced by intramuscular materials and the necrosis and regeneration of muscle fibers, and to clarify the internal reactivity of HSNGLPL-PUs. ] HSNGLPL polypeptide liquid, BDO-PU (without HSNGLPL modification), L-P-PU, M-P-PU and H-P-PU materials (0.2 x 0.4cm2) were implanted into the gastrocnemius muscle. In 14d, 28d, 42d and 56d, the gastrocnemius, frozen section, HE staining or immunofluorescence staining and the infiltration of dendritic cells, dendritic cells and macrophages were implanted. The necrosis and regeneration of the muscle fibers around the peripheral muscle and regenerated muscle fiber MHC-I expression, [results]14d, BDO-PU inflammatory exudation is the most significant, then gradually subsided, and the inflammation basically disappeared at 56d; L-P-PU, M-P-PU and H-P-PU induced inflammatory exudation was lower than BDO-PU at the early stage of transplantation (7-14d), but the inflammation continued to be long, 56d still showed exudative lymphocytes; 14d, 28d. The number of apoptosis in 42d, BDO-PU intramuscular macrophages was significantly higher than that in L-P-PU, M-P-PU and H-P-PU groups, but there were still more apoptotic cells in the L-P-PU, M-P-PU and H-P-PU groups at 56d, and in BDO-PU group, the DCs cells (CD11c+) were rare in the BDO-PU muscle, but the number of exuded cells and the concentration of polypeptide in the material were more significant. At 28d and 42d, CD3+/CD4+T cells were found in all the muscles around each group. When 56d, the CD4+T cells around BDO-PU material disappeared basically. CD4+T cells were still observed in the L-P-PU, M-P-PU and H-P-PU groups. In group H-P-PU, muscle fiber regeneration was found at early stage of implantation (14d), and the regeneration of muscle fibers in group H-P-PU with high HSNGLPL polypeptide concentration was more significant. At 42d, the injured muscle fibers around the group basically completed the repair, and the BDO-PU material still showed the central nuclear muscle fiber in 56d. All PU materials could not induce the regenerated muscle fibers to express the MHC-I molecules. After]HSNGLPL-PUs intramuscular implantation, the intramuscular inflammation and myocyte necrosis and exudation will be quickly induced, and the HSNGLPL peptide in the mononuclear macrophage.PU material may inhibit the apoptosis of inflammatory cells and lead to the persistence of inflammation. In addition, the implanted materials in the body gradually degrade and release the HSNGLPL peptide components, which may contribute to the local muscle defense. The activation, proliferation and differentiation of the astrocytes and the regeneration of muscle fibers in the late stage of transplantation. The third chapter analyzes the enrichment and release of TGF- beta by HSNGLPL-PUs in the body and external conditions. [Objective] the concentration and release of TGF- beta by HSNGLPL-PUs is clearly synthesized. [method] HSNGLPL-PUs was soaked in each group of 500pg/mL in the recombinant TGF- beta buffer solution of C. 1H, Elisa detected the residual TGF- beta concentration in the buffer solution; intramuscular implantation of HSNGLPL-PUs materials in each group, 14d and 28d were taken to extract muscle tissue, homogenate, and Elisa to detect the concentration of TGF- beta in the homogenate supernatant. The PU materials preconcentration TGF- beta (HSNGLPL-PU-TGF- beta) were implanted in the muscle of mice. The inflammatory exudation was observed by the immunofluorescence, the degree of local fibrosis was observed by Masson staining, or the RNA of the muscle tissue was extracted, and the level of the endoplasmic reticulum stress related molecules in the muscle tissue was observed by qRT-PCR. [results] the level of TGF- beta in the soaked buffer of HSNGLPL-PUs was significantly lower than that of the BDO-PU soaking solution in vitro, and the degree of decrease was compared with the concentration of HSNGLPL peptide contained in PU, Cheng Zhengxiang. At.14d, the TGF- beta concentration of the muscle tissue containing H-P-PU was significantly higher than that of the HSNGLPL polypeptide injection group and the BDO-PU group, and there was no significant difference in the concentration of TGF- beta in the muscle tissues at 28d. The HSNGLPL-PU-TGF- beta material induced more acute inflammatory exudation than the BDO-PU and HSNGLPL-PU groups in the transplantation of 7D and 14d, but the scope of the exudation was relatively limited and the duration was relatively longer. Short, 28d inflammation basically subsided.Masson staining visible, HSNGLPL-PU-TGF- beta induced adjacent muscle tissue fibrosis (blue) more significant than the other materials group.ER Stress markers (ATF6, Bip, Calnexin, Spliced XBP1, CHOP and Cathepsin) expression level can be seen, the material is significantly higher than the normal muscle tissue, with the planting time extended. The level of these molecules is down gradually. Early transplantation (7D), the mRNA level of ER Stress molecules in HSNGLPL-PU-TGF- beta group is significantly higher than that in BDO-PU and HSNGLPL-PU groups. [Conclusion] in the body, the polyurethane modified by HSNGLPL polypeptide can enrich TGF- beta molecules. After intramuscular implantation, the TGF- beta self HSNGLPL polypeptide polyurethane material is released quickly. It may interfere in intramuscular inflammatory reaction and muscle tissue fibrosis, and affect the ER Stress reaction of muscle tissue.
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R318.08

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本文編號(hào)：1919945