本文選題：上皮構(gòu)建 + 支架�。� 參考：《寧波大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：食道癌已經(jīng)躍升為癌癥殺手第五位，其好發(fā)部位為粘膜上皮層，構(gòu)建食道上皮組織工程支架是未來(lái)治療食道癌的重要方法之一。如何構(gòu)建具有仿生細(xì)胞外基質(zhì)的組織工程支架，這是組織工程領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。要構(gòu)建功能和結(jié)構(gòu)與正常組織相似的支架，必須要注意構(gòu)建支架的結(jié)構(gòu)及材料的選擇。本課題分別以聚己內(nèi)酯（PCL）和自制的具有較好彈性的無(wú)規(guī)聚合物聚(L-乳酸-co-己內(nèi)酯，PLLC)為基材，利用靜電紡和熱致相分離兩種方法構(gòu)建了食道上皮組織工程支架： 第一部分，利用靜電紡絲技術(shù)，，以PCL為基材構(gòu)建三維多孔纖維膜支架，通過(guò)絲素蛋白（SF）的加入共紡，制備了PCL、PCL/SF、SF三組支架，并對(duì)支架進(jìn)行了表征，通過(guò)掃描電鏡（SEM）觀察支架表面的微結(jié)構(gòu)，利用力學(xué)分析系統(tǒng)對(duì)纖維支架進(jìn)行了力學(xué)性能測(cè)試。首先描述纖維結(jié)構(gòu)并與基膜數(shù)據(jù)作對(duì)比，然后進(jìn)一步對(duì)支架的力學(xué)性能進(jìn)行比對(duì)分析。發(fā)現(xiàn)SF的加入提高了支架的力學(xué)性能，其最大應(yīng)力達(dá)到了1.9MPa，最大應(yīng)變?yōu)?6.2%，兩項(xiàng)機(jī)械性能指標(biāo)均比PCL支架的好，并且也使得纖維直徑有了大大的減小，從平均214.1nm降低至140.8nm，纖維的均勻度也有了很大的提升，構(gòu)建的支架纖維結(jié)構(gòu)更趨近于食管上皮基膜的纖維結(jié)構(gòu)，正常食道基膜的纖維是66±24nm。支架材料必須可以隨著細(xì)胞的生長(zhǎng)而順勢(shì)降解，所以對(duì)支架進(jìn)行了體外降解實(shí)驗(yàn)，在15d-30d的時(shí)間段里，支架有一個(gè)降解加速的趨勢(shì)，但在15d之前，支架的質(zhì)量損失不大。隨后對(duì)支架進(jìn)行了細(xì)胞相容性的測(cè)試，把自行提取的豬食道原代上皮細(xì)胞種植于支架上，通過(guò)SEM觀察細(xì)胞的形態(tài)，MTT法檢測(cè)細(xì)胞的粘附及增殖，CK14角蛋白的免疫熒光鑒定，western-blotting法測(cè)試了CK14角蛋白的相對(duì)含量，均說(shuō)明了SF的加入對(duì)其細(xì)胞相容性也有一定的改善。另一方面，根據(jù)上皮層與基膜相互作用、相互依存的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，也為了給上皮細(xì)胞以體內(nèi)的生長(zhǎng)微環(huán)境，我們用化學(xué)方法從豬食道中提取了基膜蛋白混合液，并將支架浸泡于其中，使其表面吸附食道特有的基膜蛋白，促進(jìn)細(xì)胞的粘附及增殖，細(xì)胞接種實(shí)驗(yàn)證明，我們的蛋白包被方法是有效的，吸附了蛋白的支架細(xì)胞相容性大大提升。 第二部分，利用熱致相分離法，以PLLC為基材構(gòu)建不對(duì)稱(chēng)多孔管狀支架，通過(guò)SEM的觀察，支架的內(nèi)壁孔隙率及孔徑接近食道基膜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，對(duì)以相同方法構(gòu)建的纖維膜進(jìn)行力學(xué)性能測(cè)試，結(jié)果表明其機(jī)械性能達(dá)到仿生要求。組織工程支架的重中之重是細(xì)胞相容性，為了提高PLLC的細(xì)胞相容性，我們?cè)谥Ъ軆?nèi)壁涂敷上一層纖維粘連蛋白（Fn），隨后在細(xì)胞接種14d后，通過(guò)SEM、H＆E染色、免疫熒光方法，證實(shí)了涂敷上蛋白的支架的細(xì)胞相容性遠(yuǎn)遠(yuǎn)比未處理的支架更好，細(xì)胞在上邊能匯合成片并且還出現(xiàn)多層結(jié)構(gòu)。 研究表明，利用靜電紡絲及熱致相分離法構(gòu)建的支架能很好地模擬食道基膜結(jié)構(gòu)，經(jīng)過(guò)蛋白的吸附及涂敷能有效的改進(jìn)支架的細(xì)胞相容性。
[Abstract]:In order to construct a scaffold with bionic extracellular matrix , it is a hot topic in the field of tissue engineering . It is important to construct scaffolds with bionic extracellular matrix .

In the first part , the three - dimensional porous fiber membrane scaffold was constructed by using PCL as the base material , and the scaffold was characterized by the addition of silk fibroin ( SF ) .

In order to improve the cell compatibility of PLLC , a layer of fibronectin ( Fn ) was coated on the inner wall of the scaffold .

The research shows that the scaffold constructed by electrostatic spinning and thermal - induced phase separation can simulate the structure of the basement membrane well , and the cell compatibility of the scaffold can be improved effectively through the adsorption and application of the protein .

【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1871393