本文選題：5-FU + 膽管瘢痕成纖維細(xì)胞��； 參考：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的： 研究5-FU對(duì)體外培養(yǎng)的人良性膽管瘢痕成纖維細(xì)胞的作用。 方法： 1、人良性膽管瘢痕成纖維細(xì)胞的復(fù)蘇及傳代培養(yǎng)。 2、分別用濃度為0.78125g/1、1.5625g/1、3.125g/1、6.25g/1、12.5g/1的5-FU加入培養(yǎng)的人良性膽管瘢痕成纖維細(xì)胞,在光鏡下分組觀察5-FU干預(yù)人良性膽管瘢痕成纖維細(xì)胞24h、48h、72h成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)變化,并通過(guò)MTT比色法檢測(cè)以上各組成纖維細(xì)胞增殖活性并計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。選擇半數(shù)抑制濃度(50%Inhibitiory concentration, IC50)值作為干預(yù)濃度(6.25g/L)。 3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)在最適干預(yù)濃度下5-FU干預(yù)人良性膽管瘢痕成纖維細(xì)胞的凋亡情況。 4、免疫熒光化學(xué)法測(cè)定人良性膽管瘢痕成纖維細(xì)胞在5-FU最適干預(yù)濃度作用后TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)的強(qiáng)度。 5、Western Blot方法檢測(cè)TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)量。 結(jié)果： 1、5-FU干預(yù)人良性膽管瘢痕成纖維細(xì)胞72小時(shí)后,其抑制率為50%的濃度為6.25g/L。 2、5-FU干預(yù)膽管瘢痕成纖維細(xì)胞后,其生長(zhǎng)曲線隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的增大而受到明顯的抑制。 3、5-FU干預(yù)人良性膽管瘢痕成纖維細(xì)胞后凋亡明顯增加。 4、干預(yù)濃度(6.25g/L)5-FU作用于體外培養(yǎng)的人良性膽管瘢痕成纖維細(xì)胞,通過(guò)免疫熒光化學(xué)法和Western Blot方法測(cè)定成纖維細(xì)胞TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)均低于對(duì)照組。 結(jié)論： 1.5-FU可抑制人體膽管瘢痕成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。 2.5-FU通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡的方式,抑制了人體膽管瘢痕成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)； 3.5-FU干預(yù)人體膽管瘢痕成纖維細(xì)胞后,TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)明顯降低。 4.本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步揭示了5-FU治療人良性膽管瘢痕狹窄的作用機(jī)制,為今后開(kāi)展5-FU局部用藥防治人良性膽管瘢痕狹窄提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Objective: To study the effect of 5-FU on human benign bile duct scar fibroblasts in vitro. Methods: 1. Resuscitation and subculture of human benign bile duct scar fibroblasts. 2. The cultured human benign bile duct scar fibroblasts were added with 0.78125g / 1 / 1.5625g / 1 5-FU 3.125g / 1 5-FU 6.25g / 1 / 1 and 12.5g / 1 respectively. The growth and morphological changes of human benign bile duct scar fibroblasts treated with 5-FU for 24 hours and 48 hours were observed under light microscope. MTT colorimetric assay was used to detect the proliferative activity of the fibroblasts and to calculate the cell growth inhibition rate. The inhibition concentration (IC50) of 50% inhibition concentration (IC50) was chosen as the intervention concentration of 6.25 g / L. 3. Flow cytometry was used to detect the apoptosis of human benign bile duct scar fibroblasts treated with 5-FU at the optimal concentration. 4. The expression of TGF- 尾 _ 1a -SMA, type 鈪，

本文編號(hào)：1800167