本文選題：多孔鉭 + BMP-7��； 參考：《河北聯(lián)合大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的通過(guò)比較不同濃度的BMP-7對(duì)多孔鉭-軟骨細(xì)胞復(fù)合物分泌功能及相關(guān)基因的表達(dá)作用，探討B(tài)MP-7與多孔鉭-軟骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)構(gòu)建組織工程軟骨的可行性，為組織工程軟骨修復(fù)軟骨缺損提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法1軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)及分組：3周齡幼兔，，取膝關(guān)節(jié)軟骨行原代培養(yǎng)，將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3代細(xì)胞以1×106/ml細(xì)胞濃度接種于多孔鉭金屬，分為4組:①對(duì)照組（軟骨細(xì)胞與多孔金屬鉭共培養(yǎng)）；②50ng/ml組（軟骨細(xì)胞與多孔金屬鉭共培養(yǎng)，加入rhBMP-7使其在培養(yǎng)基濃度達(dá)到50ng/ml）；③100ng/ml組（軟骨細(xì)胞與多孔金屬鉭共培養(yǎng)，加入rhBMP-7使其在培養(yǎng)基濃度達(dá)到100ng/ml）；④200ng/ml組（軟骨細(xì)胞與多孔金屬鉭共培養(yǎng)，加入rhBMP-7使其在培養(yǎng)基濃度達(dá)到200ng/ml）。2軟骨細(xì)胞鑒定：行II型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色、阿利新藍(lán)染色（Alcian Blue），番紅-O（Safranin-O）染色。3CCK-8法檢測(cè)不同濃度的BMP-7對(duì)多孔鉭-軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖情況。4掃描電鏡觀(guān)察各組軟骨細(xì)胞在多孔鉭生長(zhǎng)情況。5二甲基亞甲藍(lán)（DMMB）比色定量法對(duì)多孔鉭-軟骨細(xì)胞的糖胺多糖（GAG）進(jìn)行定量分析。6II型膠原、Sox9轉(zhuǎn)錄因子免疫細(xì)胞化學(xué)染色并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。7Real Time-PCR檢測(cè)COL-II、AGG和Sox9mRNA的表達(dá)。 結(jié)果1軟骨細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)及鑒定：第3代軟骨細(xì)胞接種后6~8h完成貼壁，24h后細(xì)胞呈短梭形、三角形生長(zhǎng)；3d時(shí)，細(xì)胞數(shù)量顯著增加。Alcian Blue染色、Safranin-O染色、II型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色均呈陽(yáng)性反應(yīng)。2CCK-8法檢測(cè)不同濃度BMP-7對(duì)多孔鉭-軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖影響，BMP-7對(duì)多孔鉭-軟骨細(xì)胞有促進(jìn)增殖的效果，其中100ng/ml的BMP-7促增殖效果最好，但當(dāng)BMP-7濃度達(dá)到200ng/ml時(shí)，細(xì)胞增殖受到輕度抑制。3掃描電鏡觀(guān)察各組軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)情況，軟骨細(xì)胞在多孔鉭表面上伸展良好，偽足伸展充分，疊層生長(zhǎng)，覆蓋于多孔鉭表面。4二甲基亞甲藍(lán)（DMMB）比色定量法糖胺多糖（GAG）定量檢測(cè)：各組細(xì)胞在培養(yǎng)5d和14d后，50ng/ml組和100ng/ml組均比對(duì)照組分泌GAG多，其中以100ng/ml組分泌量最多，并且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)各組分泌GAG的量均顯著增加。5Col-II和Sox9因子免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果：100ng/ml組Col-II和Sox9因子的IOD值均最大，表明100ng/ml組分泌Col-II的量最多。6Real Time-PCR檢測(cè)軟骨細(xì)胞COL-II、AGG和Sox9的mRNA表達(dá)：50ng/ml組、100ng/ml組和200ng/ml組之間COL-II、AGG和Sox9mRNA表達(dá)量，兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）且隨著B(niǎo)MP-7濃度的提高功能基因的表達(dá)量也相應(yīng)提高，第14d與第5d相比較，各基因的表達(dá)增幅程度均有所下降。 結(jié)論1BMP-7對(duì)多孔鉭-軟骨細(xì)胞有促進(jìn)增殖的效果，其中100ng/ml的BMP-7促增殖效果最好，當(dāng)BMP-7濃度達(dá)到200ng/ml時(shí)，細(xì)胞增殖受到輕度抑制。2BMP-7對(duì)多孔鉭-軟骨細(xì)胞分泌COL-II、AGG起到了促進(jìn)作用，其中濃度為100ng/ml的BMP-7促進(jìn)軟骨細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)的作用最強(qiáng)。3BMP-7對(duì)多孔鉭-軟骨細(xì)胞COL-II、AGG及Sox9因子mRNA表達(dá)上調(diào)，并且隨著濃度的提高各因子的mRNA相對(duì)表達(dá)量也相應(yīng)升高。
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【學(xué)位授予單位】：河北聯(lián)合大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R687.3;R318.08

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 于曉明;譚麗麗;楊柯;;鉭金屬的醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究進(jìn)展[J];材料導(dǎo)報(bào);2012年01期

2 何春艷,周琳婷,陳延,趙春女,徐帆洪;采用可溶性噻唑鹽WST-8檢測(cè)細(xì)胞病變[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2004年06期

本文編號(hào)：1735231