本文關(guān)鍵詞： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 人脫細(xì)胞羊膜 組織工程骨膜　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景 由創(chuàng)傷、骨病或腫瘤術(shù)后等引起的骨缺損是臨床常見的棘手問題。對骨缺損的傳統(tǒng)治療分為自體骨移植、異體骨移植和異種骨移植。但自體移植存在供區(qū)來源有限，且對供區(qū)造成損傷，給病人帶來一定的痛苦；異體和異種骨移植會引起免疫排斥反應(yīng)和傳播疾病等并發(fā)癥。根據(jù)膜內(nèi)化骨理論，骨膜成骨在骨折愈合、骨缺損修復(fù)有著重要作用。因此，應(yīng)用組織工程的原理和方法來構(gòu)建真正意義上的人工骨膜進行骨缺損修復(fù)和加快骨折愈合的治療可作為一種新的思路。然而，要構(gòu)建的組織工程骨膜必須具有生理骨膜的結(jié)構(gòu)和功能，既要具備成骨作用的種子細(xì)胞，又要具備使種子細(xì)胞良好附著、增殖、分化的可降解支架材料。因此，選擇何種種子細(xì)胞和支架材料就顯得優(yōu)為重要。 目前，組織工程骨膜取得了一定的進展，國內(nèi)外許多學(xué)者應(yīng)用成骨細(xì)胞及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外復(fù)合殼聚糖、小腸粘膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)，修復(fù)兔橈骨缺損取得良好效果。對于殼聚糖等可降解支架材料，仍無法與天然膜性材料相比擬，小腸粘膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)雖屬于天然結(jié)構(gòu)材料，但大多取材于豬小腸，應(yīng)用于人的骨缺損修復(fù)仍有免疫排斥的風(fēng)險�，F(xiàn)已證實骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠良好的與人羊膜復(fù)合。人羊膜取材來源豐富，具備組織相容性好、含多種膠原等特點，可作為理想的支架材料。另一方面，已經(jīng)應(yīng)用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合人羊膜脫細(xì)胞基質(zhì)成功修復(fù)大鼠全層皮膚損傷，但將二者復(fù)合構(gòu)建仿生骨膜可行性如何尚需進一步驗證。 目的 探討以人羊膜脫細(xì)胞基質(zhì)為支架材料復(fù)合成骨誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨膜，以及體外成骨的可行性。為今后構(gòu)建仿生骨膜動物或人體內(nèi)成骨提供理論依據(jù)。 方法 本實驗首先分離SD大鼠（5-7天乳鼠）雙脛骨，用注射器針筒沖洗骨髓，制成單細(xì)胞懸液，成功分離并培養(yǎng)出了SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，，并對其進行了組織學(xué)鑒定；其次，制備出了人脫細(xì)胞羊膜，將人脫細(xì)胞羊膜固定后行HE染色，證實細(xì)胞成分去除干凈；應(yīng)用掃描電鏡觀察人脫細(xì)胞羊膜的結(jié)構(gòu)特；并且以人脫細(xì)胞羊膜為支架，將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合該支架進行培養(yǎng)，體外構(gòu)建組織工程骨膜，對其進行HE染色和電鏡掃描顯，微鏡下觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在人脫細(xì)胞羊膜上復(fù)合、生長、擴增情況,并用MTT檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在人脫細(xì)胞羊膜（實驗組）和無人脫細(xì)胞羊膜（對照組）上增殖情況。實驗分為兩組即骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合人脫細(xì)胞羊膜無誘導(dǎo)劑組（對照組）、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合人脫細(xì)胞羊膜加誘導(dǎo)劑組（實驗組）。 結(jié)果 1.用物理和化學(xué)方法處理后的人脫細(xì)胞羊膜表面無細(xì)胞殘留，空隙多，膠原纖維未受損。2.體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下，BMSCs可呈多層生長，無接觸抑制現(xiàn)象，具有與成骨細(xì)胞相似的形態(tài)特征和生長特點，茜素紅染色鈣結(jié)節(jié)檢測陽性；成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下，BMSCs無接觸抑制現(xiàn)象，逐漸出現(xiàn)空泡，可見脂滴，具有與脂肪細(xì)胞相似的形態(tài)特征和生長特點，油紅染色檢測陽性；成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下，BMSCs無接觸抑制現(xiàn)象，逐漸出現(xiàn)空泡，具有與軟骨細(xì)胞相似的形態(tài)特征和生長特點，阿利新藍染色結(jié)果陽性。3.在相同條件培養(yǎng)下，實驗組（HAAM組）與對照組（無材料組）的兩組細(xì)胞在不同時間點通過分析兩組MTT檢測吸光度值，實驗結(jié)果表明，在各個不同的時間點檢測，前4天兩組細(xì)胞增殖速度無顯著性差異（p＞0.05）；第5d，6d兩組增殖細(xì)胞量，經(jīng)組間F檢驗具有顯著性差別（p0.05），實驗組增殖細(xì)胞量比對照組多；第7d，8d兩組增殖細(xì)胞量，經(jīng)組間F檢驗具有顯著性差別（p0.01），實驗組增殖細(xì)胞量比對照組多。4.實驗組可見體外細(xì)胞與材料復(fù)合培養(yǎng)附著佳，大量的細(xì)胞外基質(zhì)分泌，細(xì)胞分化良好、增殖活躍；大體觀察復(fù)合材料見顏色較白，組織變硬，組織學(xué)和電鏡觀察見有大量骨組織形成；對照組中體外復(fù)合培養(yǎng)見細(xì)胞與材料粘附良好，細(xì)胞生長良好，大體觀察復(fù)合材料見顏色和組織硬度不變。 結(jié)論 1.人脫細(xì)胞羊膜具有良好的細(xì)胞相容性，不影響B(tài)MSCs的形態(tài)，對細(xì)胞生長、增殖和功能表達沒有抑制作用。2.BMSCs在體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后可表達成骨細(xì)胞表型，是一種理想的骨組織工程種子細(xì)胞。3.人脫細(xì)胞羊膜有良好的生物相容性，可以用作骨組織工程的支架材料構(gòu)建組織工程骨膜。
[Abstract]:Background of the study The bone defect caused by trauma , bone disease or tumor is a common difficult problem . The traditional treatment of bone defects is divided into autogenous bone grafting , allograft bone grafting and xenogeneic bone grafting . At present , the tissue engineering bone membrane has made certain progress , and many scholars at home and abroad apply osteoblasts and bone marrow mesenchymal stem cells in vitro to synthesize chitosan , small intestinal submucosa acellular matrix and repair the rabbit radial defect . Purpose This paper discusses the feasibility of using human amniotic membrane acellular matrix as scaffold material to construct bone membrane of bone marrow mesenchymal stem cells induced by bone marrow mesenchymal stem cells . method The bone marrow mesenchymal stem cells of SD rats were isolated and cultured with syringe barrel , and the cells were successfully isolated and cultured . The cells were cultured in vitro by HE staining and electron microscope scanning . Results The results showed that there was no contact inhibition between the two groups at different time points ( p > 0.05 ) . The proliferation rate of the cells in the experimental group was higher than that in the control group . Conclusion 1 . The human acellular amniotic membrane has good cell compatibility , does not influence the morphology of bone marrow cells , has no inhibition effect on cell growth , proliferation and function expression .

【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 吳巧鳳;唐艷娟;陳槐卿;尹光福;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與β-磷酸三鈣／聚L-乳酸支架材料的復(fù)合[J];材料研究學(xué)報;2006年05期

2 施越冬;郭銀玲;徐劍煒;;可注射性軟骨細(xì)胞支架材料的研究進展[J];中國臨床醫(yī)學(xué);2009年06期

3 吳巧鳳,唐艷娟,陳槐卿,吳江,尹光福;成骨誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與不同比例的β-TCP/PLLA支架材料復(fù)合的研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2005年02期

4 李明;黎剛;徐美玲;于明安;;聚乙烯醇/蒙脫石支架用作生物催化劑的研究[J];應(yīng)用化工;2012年01期

5 劉耀升;劉蜀彬;李鼎鋒;;組織工程化軟骨材料的特征[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年41期

6 祁潔;凌鳴;劉宗智;弓立群;;不同來源成骨細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨膜的特異性基因表達[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年20期

7 盛士虎;何倩婷;劉中華;王安訓(xùn);;大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)成骨的體內(nèi)外研究[J];中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版);2011年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 唐艷娟;成骨誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與AW生物活性玻璃陶瓷多孔支架材料復(fù)合的體內(nèi)外研究[D];四川大學(xué);2006年

2 王海燕;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的基因修飾與體外三維培養(yǎng)的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

3 馬東洋;基于骨髓基質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建無外支架組織工程骨的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 黎剛;構(gòu)建組織工程細(xì)胞凝膠包衣片用于合成手性醇[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

2 李娟;柞蠶絲素蛋白的自組裝及其在藥物緩釋上的應(yīng)用[D];東華大學(xué);2012年

3 吳巧鳳;成骨誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與β-磷酸三鈣/聚L-乳酸支架材料復(fù)合的體內(nèi)體外研究[D];四川大學(xué);2005年

4 沈洪園;生物型異種骨軟骨移植修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨損傷的實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

5 曾鎖林;用計算機輔助組織工程精確修復(fù)骨軟骨病變的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

6 郭銀鈴;采用經(jīng)EDC交聯(lián)的纖維蛋白凝膠作為可注射性軟骨細(xì)胞支架材料的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

7 張超穎;優(yōu)化制備重組蛛絲蛋白復(fù)合材料小直徑血管支架及應(yīng)用于動物體內(nèi)修復(fù)實驗[D];福建師范大學(xué);2013年

本文編號：1506104