本文關鍵詞： 內(nèi)皮細胞 回饋調(diào)節(jié) 機械力（血流剪切力） microRNA PI3Kinase/MAP Kinase　出處：《吉林大學》2012年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：心血管疾病發(fā)生發(fā)展的研究和microRNA的研究同屬于21世紀生命科學的熱點領域。要對心血管疾病，尤其是動脈粥狀硬化的形成有全面和深入的認識，必須在整體、動態(tài)和網(wǎng)絡的水平上對其進行研究。本實驗以人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）為研究對象，應用體外血流剪切力刺激，對其信號通路、基因調(diào)控、生物學特性的改變，尤其是microRNA表達量的變化進行研究。對血流剪切力下HUVEC中的microRNA和信號通路之間回饋調(diào)節(jié)進行探索。 采用灌注酶消化法分離所得的臍靜脈內(nèi)皮細胞不僅純度高而且數(shù)量充足，細胞活力高、增殖能力強，通過鑒定符合血管內(nèi)皮細胞的特性并且能夠穩(wěn)定的進行傳代培養(yǎng)以及凍存復蘇，所以能夠很好的滿足接下來的實驗需要，對進一步研究血管內(nèi)皮細胞的生物學特性有重要意義。 應用體外血流動力學系統(tǒng)研究在剪切力下HUVECs的生物學特性的改變，首次發(fā)現(xiàn)了miR-19a和miR-23b/27b分別受PI3K和MAPK的調(diào)控，PI3K和MAPK可能分別為miR-19a和miR-23b/27b的上游調(diào)控因子。在用Antagomir-19a（AM19a）抑制miR-19a后，，PI3K通路被阻斷；用AM23b、27b分別抑制miR-23b、27b后，MAPK通路中的三個成員ERK，P38，JNK的磷酸化全部下降，以上可以作為microRNA回饋調(diào)節(jié)信號通路的一個指示。而且過表達miR-19a可以逆轉PI3K抑制劑造成的抑制效果；過表達miR-23b、27b對MAPK的活性有著類似的效果。因此，以上發(fā)現(xiàn)可證明PI3K和MAPK介導的剪切力調(diào)控的miR表達量轉而又調(diào)控剪切力相關信號通路，在miR和信號通路之間存在著一個回饋調(diào)節(jié)的作用。 綜上所述，本研究以體外分離培養(yǎng)的HUVECs為研究對象明確了在血流剪切力下HUVECs的生物學特性變化；首次發(fā)現(xiàn)miR-19a與PI3K信號通路；miR-23b、27b與MAPK信號通路之間的回饋調(diào)節(jié)作用，為探索血流剪切力作用下HUVECs內(nèi)信號通路和microRNA作用途徑提供了理論基礎，為更好地研究心血管病發(fā)生發(fā)展機理提供了充分的實驗依據(jù)。
[Abstract]:In 21th century, the research on the occurrence and development of cardiovascular disease and the study of microRNA belong to the hot field of life science. In order to have a comprehensive and in-depth understanding of cardiovascular disease, especially the formation of atherosclerosis, it is necessary to have an overall understanding. In this study, human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were used to stimulate human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) by external blood flow shear stress (ECF), and to change the signal pathway, gene regulation and biological characteristics of HUVECs. In particular, the change of microRNA expression was studied, and the feedback regulation between microRNA and signal pathway in HUVEC under shear stress was explored. The umbilical vein endothelial cells isolated by perfusion enzyme digestion not only have high purity and sufficient quantity, but also have high cell viability and strong proliferative ability. Through the identification of the characteristics of vascular endothelial cells and stable passage culture and cryopreservation and resuscitation, it can meet the needs of the following experiments, which is of great significance to further study the biological characteristics of vascular endothelial cells. The effects of shear stress on the biological characteristics of HUVECs were studied by using the extracorporeal hemodynamic system. It was found for the first time that miR-19a and miR-23b/27b were regulated by PI3K and MAPK respectively. PI3K and MAPK may be upstream regulatory factors of miR-19a and miR-23b/27b, respectively. The PI3K pathway was blocked after miR-19a was inhibited by Antagomir-19aA1a, and the phosphorylation of P38 JNK of three members of ERK P38JNK was inhibited by AM23bm27b, respectively. These can be used as an indication of the signal pathway of microRNA feedback regulation. Furthermore, overexpression of miR-19a can reverse the inhibitory effect of PI3K inhibitor, and overexpression of miR-23bf27b has a similar effect on the activity of MAPK. These findings suggest that the shear-stress regulated miR expression mediated by PI3K and MAPK in turn regulates the shear-stress-related signaling pathway, and there is a feedback regulation between miR and the signaling pathway. In conclusion, the biological characteristics of HUVECs under shear stress were determined by using isolated and cultured HUVECs in vitro, and the feedback regulation between miR-19a and PI3K signaling pathway miR-23bf27b and MAPK signaling pathway was first found. It provides a theoretical basis for exploring the signal pathway and microRNA action pathway in HUVECs under the action of blood flow shear stress, and provides a sufficient experimental basis for better studying the mechanism of occurrence and development of cardiovascular disease.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R318.01

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本文編號：1505202