本文關(guān)鍵詞：新型pH敏感聚陽離子基因載體的設(shè)計(jì)、制備及性能研究　出處：《江南大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：本文制備并表征了一種含有三級胺和環(huán)狀原酸酯基團(tuán)的新型陽離子均聚物——聚（N-（（2-（2-（二甲基氨基）乙氧基）-1，3-二氧戊環(huán)-4-基）甲基）甲基丙烯酰胺（PMAOE）。采用傳統(tǒng)自由基聚合的方法合成了不同鏈長（19、64、82個重復(fù)單元）的PMAOE，通過核磁氫譜、凝膠色譜等技術(shù)對該均聚物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征；采用核磁氫譜追蹤特征峰的方法檢測PMAOE的pH敏感性，結(jié)果顯示，PMAOE具有pH敏感性，其原酸酯基團(tuán)在酸性條件下發(fā)生環(huán)外降解，且降解速率隨著pH的減小而增大。 本文通過靜電作用的原理，將編碼有表達(dá)綠色熒光蛋白的質(zhì)粒DNA（pEGFP-N1）與PMAOE相互作用形成復(fù)合物納米粒子。通過瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)、DNase I降解實(shí)驗(yàn)、肝素置換實(shí)驗(yàn)、EB排阻實(shí)驗(yàn)、粒徑和電位測定考察了PMAOE壓縮DNA的能力以及復(fù)合物的大小，，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PMAOE在中性pH條件下可有效壓縮質(zhì)粒DNA，形成窄分布的復(fù)合物納米粒子。DNA的壓縮強(qiáng)度與PMAOE的鏈長有直接關(guān)系，鏈段越長，PMAOE壓縮DNA的能力越強(qiáng)。通過瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測復(fù)合物的pH敏感性和DNA釋放的可調(diào)控性。結(jié)果顯示，PMAOE與DNA形成復(fù)合物后仍然具有pH敏感性，在酸性條件下，PMAOE的原酸酯基團(tuán)發(fā)生降解，電荷減少，殘留陽離子被中和，使PMAOE壓縮DNA的能力減小，復(fù)合物穩(wěn)定性減弱，進(jìn)而解離，釋放出質(zhì)粒DNA。 本文還采用MTT法進(jìn)行體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，評價(jià)PMAOE的生物相容性，結(jié)果表明，PMAOE與NIH3T3、HEK-293和COS-7細(xì)胞共培養(yǎng)均表現(xiàn)出較低的細(xì)胞毒性。通過熒光顯微鏡直接觀察法和流式細(xì)胞術(shù)定量測定法進(jìn)行體外細(xì)胞基因傳遞效果評價(jià)，初步研究結(jié)果說明，PMAOE介導(dǎo)pEGFP-N1在HEK-293和COS-7細(xì)胞中的基因傳遞效果在N/P為16時最佳。 本文揭示了一種pH可調(diào)控的DNA與陽離子聚合物結(jié)合及分離的獨(dú)特機(jī)制，且PMAOE具有良好的生物相容性，在基因傳遞的應(yīng)用中有望成為良好的生物材料。
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1324639