發(fā)布時間：2017-12-19 22:21

  本文關(guān)鍵詞：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的水凝膠封裝玻璃化保存　出處：《中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：低溫保存對細(xì)胞、組織、器官的長期保存是一種有效的方法,因此被廣泛應(yīng)用于組織工程、再生醫(yī)學(xué)、輔助生殖醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。低溫保存主要通過兩種方法來實(shí)現(xiàn)：慢速降溫法和玻璃化保存法。到目前為止,慢速降溫法已經(jīng)相當(dāng)成熟,并實(shí)現(xiàn)了多種生物材料的保存,但是慢速降溫法存在一些缺點(diǎn),比如在降溫過程中細(xì)胞會遭受溶液損傷、包內(nèi)冰損傷；在復(fù)溫過程中,細(xì)胞內(nèi)會出現(xiàn)再結(jié)晶現(xiàn)象等。玻璃化保存通過使用較高濃度的低溫保護(hù)劑和快速降溫讓溶液形成玻璃態(tài),從而避免細(xì)胞內(nèi)外冰晶的形成。玻璃化保存方法簡單、方便、省時,但是高濃度的低溫保護(hù)劑會對細(xì)胞造成滲透損傷和毒性損傷。盡管許多學(xué)者采用分步添加和去除保護(hù)劑的方法,但是過高濃度的保護(hù)劑仍然會對細(xì)胞造成損傷。有時低溫保護(hù)劑在降溫的過程中實(shí)現(xiàn)了玻璃化,但是如果保護(hù)劑濃度不是足夠的高,在復(fù)溫的過程中就會出現(xiàn)反玻璃化現(xiàn)象,這對細(xì)胞是致命的損傷,會大大降低細(xì)胞的存活率。本文以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為研究對象,首先測定細(xì)胞的滲透忍受極限和細(xì)胞膜的滲透系數(shù)。本文利用自行設(shè)計的微灌流裝置測定了細(xì)胞在25、14、5和-20C四個溫度下在高滲鹽溶液和低溫保護(hù)劑中細(xì)胞的滲透響應(yīng),然后利用兩參數(shù)模型擬合得到細(xì)胞膜的滲透系數(shù),再運(yùn)用Arrhenius關(guān)系求出細(xì)胞在參考溫度下(273.15 K)的滲透系數(shù)和活化能。最終結(jié)果表明當(dāng)溶液的滲透壓值是155-921 mOsm/kg或歸一化細(xì)胞體積是0.53-1.39時,細(xì)胞體積變化是在安全范圍內(nèi)的。在參考溫度下,水的滲透系數(shù)和二甲基亞砜的滲透系數(shù)分別是0.32×10-14m/Pa/s和0.30 x 10-8 m/s,對應(yīng)的活化能分別是40.15 kJ/mol和82.47 kJ/mol。最終細(xì)胞的滲透忍受極限和細(xì)胞膜的滲透系數(shù)被用于優(yōu)化低溫保護(hù)劑的添加和去除過程。為了解決慢速降溫和傳統(tǒng)玻璃化保存中的問題,本文使用水凝膠封裝玻璃化保存方法,與傳統(tǒng)的玻璃化保存方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比,這種方法大大降低了低溫保護(hù)劑的濃度,盡管在復(fù)溫的過程中出現(xiàn)了反玻璃化現(xiàn)象,但是它并沒有影響細(xì)胞的活性,因此水凝膠封裝玻璃化保存方法是可行的。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R318.52

【參考文獻(xiàn)】

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1 呂曉慶;李雷;陳紅梅;陳鵬;劉靜;;微流控芯片技術(shù)在循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離中的研究進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2015年04期

2 陳曉東;胡國慶;;微流控器件中的多相流動[J];力學(xué)進(jìn)展;2015年00期

3 霍丹群;劉振;侯長軍;楊軍;羅小剛;法煥寶;董家樂;張玉嬋;張國平;李俊杰;;微流控芯片光學(xué)檢測技術(shù)在細(xì)胞研究中的應(yīng)用與進(jìn)展[J];分析化學(xué);2010年09期

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本文編號：1309656