本文關(guān)鍵詞：甲基丙烯酸海藻酸鹽微球的構(gòu)建及其作為支架材料培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：本研究旨在制備既有一定機(jī)械強(qiáng)度又能保持良好滲透性的海藻酸鹽凝膠小球,從而更好地應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域。方法：1)海藻酸鹽水凝膠的改性研究：通過(guò)海藻酸鹽中的羧基和甲基丙烯酸中的氨基作用生成酰胺鍵的反應(yīng),將甲基丙烯酸引入藻酸鹽長(zhǎng)鏈,然后利用熱反應(yīng)的原理,通過(guò)甲基丙烯酸中的雙鍵聚合,藻酸鹽長(zhǎng)鏈的強(qiáng)度得以增強(qiáng),最后將氯化鈣和氯化鋇分別以7：3；5：5；3：7比例混和作為陽(yáng)離子交聯(lián)劑,形成海藻酸鹽凝膠小球,并進(jìn)一步研究其壓縮模量和滲透性。2)正常兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的提取及培養(yǎng)：無(wú)菌條件下取1月齡日本大耳白兔的膝關(guān)節(jié)軟骨組織,剪碎至1mm3的組織塊后,每只兔子按照雙側(cè)膝關(guān)節(jié)取出的軟骨量的多少,加入10-15ml質(zhì)量體積比為1g/L的Ⅱ型膠原酶,37℃、86r/min的恒溫?fù)u床中消化6小時(shí)。在37℃、5%CO2的孵育箱用50ml一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)并用胰酶消化傳至P2代。3)對(duì)P1代軟骨細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)以及Ⅱ型膠原免疫組化染色的表型鑒定。4)海藻酸鹽凝膠小球的構(gòu)建以及細(xì)胞在海藻酸鹽凝膠小球中的體外3D培養(yǎng)。結(jié)果：1)海藻酸鹽水凝膠的改性研究結(jié)果：以[Ba2+：Ca2+=5：5]作為混合陽(yáng)離子交聯(lián)劑制作的凝膠小球,壓縮模量為189.7Kpa,對(duì)分子量為24KDa的胰蛋白酶分子的滲透性最好,對(duì)分子量為67KDa的牛血清白蛋白分子具有截留作用。以[Ba2+：Ca2+=5：5]作為混合陽(yáng)離子交聯(lián)劑與甲基丙烯酸改性的海藻酸鹽形成的凝膠小球,與其他比例相比,強(qiáng)度和滲透性均為最佳。2)細(xì)胞培養(yǎng)以及鑒定的結(jié)果：從兔子膝關(guān)節(jié)成功分離并培養(yǎng)出了軟骨細(xì)胞,經(jīng)過(guò)甲苯胺藍(lán)和Ⅱ型膠原免疫組化染色鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞具備軟骨細(xì)胞的基本特征。3)包含軟骨細(xì)胞的凝膠小球的構(gòu)建：成功構(gòu)建出了直徑約為2mm大小的包含軟骨細(xì)胞的凝膠小球,并嘗試構(gòu)建了直徑約為400um的包含軟骨細(xì)胞的凝膠小球,結(jié)論：1)通過(guò)甲基丙烯酸對(duì)海藻酸鹽進(jìn)行化學(xué)改性,并且把傳統(tǒng)的形成藻酸鹽凝膠小球方法中的單一陽(yáng)離子Ca2+換成混合陽(yáng)離子Ca2+和Ba2+,用混合陽(yáng)離子制作出的甲基丙烯酸海藻酸鹽凝膠小球,與傳統(tǒng)的海藻酸鹽凝膠小球相比,在材料的強(qiáng)度上得到了明顯的提高,并且略微提高了滲透性,可以更好地應(yīng)用于組織工程支架材料領(lǐng)域以及作為細(xì)胞培養(yǎng)的包埋材料。2)通過(guò)兔子膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的原代分離,以及體外的2D、3D培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)軟骨細(xì)胞在體外單層培養(yǎng)容易實(shí)現(xiàn),但是三維培養(yǎng)模型的建立和完善還需要努力。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08

【共引文獻(xiàn)】

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