發(fā)布時間：2017-11-24 10:17

  本文關(guān)鍵詞：組織工程化人工食管的體外研究

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【摘要】：目的： 以天然管狀ECM為支架，BMSCs為種子細胞，將BMSCs接種于ECM上進行復(fù)合培養(yǎng)，探討組織工程化人工食管體外培養(yǎng)的可行性，進而為組織工程化人工食管體內(nèi)植入研究提供實驗依據(jù)。 方法： 使用特制的刮除器，通過物理刮除及化學(xué)方法一系列處理后，制取管狀的ECM，將多層管狀ECM使用球囊及模具套疊后塑型，制備出天然管狀的ECM支架，運用掃描電鏡及光學(xué)顯微鏡進行超微結(jié)構(gòu)觀察和組織學(xué)觀察。以粒子加速器對ECM支架進行輻照滅菌；分離提取犬BMSCs，體外培養(yǎng)、擴增、誘導(dǎo)，并進行流式細胞學(xué)鑒定，繪制BMSCs的生長曲線；將BMSCs接種于ECM進行復(fù)合培養(yǎng)，并與人工材料ePTFE做對比研究，行HE染色觀察比較。 結(jié)果： 1、經(jīng)處理過后所得ECM為白色菲薄、質(zhì)地柔軟、彈性良好的半透明膜狀物，采用球囊、支架塑形所制得的天然管狀ECM成形良好，經(jīng)掃描電鏡及HE染色觀察可見ECM具有三維網(wǎng)狀的立體空間結(jié)構(gòu)，表面無細胞成分殘留；采用粒子加速器以25KGy輻照對ECM滅菌后進行細菌培養(yǎng)，結(jié)果顯示滅菌效果良好。 2、犬骨髓血經(jīng)過一系列處理、離心、體外培養(yǎng)后鏡下可見大量漩渦狀貼壁生長的細胞集落，擴增培養(yǎng)后取第三代細胞經(jīng)流式細胞儀檢測，CD29、CD44、CD90、CD105表達率分別為95.7%、98.4%、99.0%和100%，幾乎不表達CD34、CD45，符合BMSCs的抗原表達。 3、BMSCs與ECM接種復(fù)合培養(yǎng)的實驗組經(jīng)HE染色后可見大量藍染的細胞核結(jié)構(gòu)，呈鋪路石樣，連接緊密，，孔隙內(nèi)亦可見細胞生長；在與BMSCs的接種復(fù)合率方面，ECM優(yōu)于人工材料ePTFE。 結(jié)論： ECM具有良好的三維空間結(jié)構(gòu)，孔隙均勻、相互貫通，經(jīng)塑形、滅菌后的ECM是組織工程支架材料的良好選擇，BMSCs體外分離、存化、擴增及鑒定等易于操作，而且BMSCs具有多分化潛能，是組織工程中種子細胞的最佳選擇，將BMSCs接種于ECM進行體外復(fù)合培養(yǎng)，構(gòu)建組織工程化人工食管具有可行性。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.14

【參考文獻】

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本文編號：1221923