本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與脂肪干細(xì)胞構(gòu)建人工復(fù)合皮的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:利用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)及脂肪干細(xì)胞(Adipose-derived Stem Cells,ADSCs)分別及聯(lián)合在體外與小腸黏膜下層構(gòu)建人工復(fù)合皮,對比觀察其修復(fù)全層皮膚缺損創(chuàng)面的效果,以期尋找一種較好的人工復(fù)合皮。方法:1.取清潔健康日本大耳兔脛骨骨髓及頸部脂肪組織,分別于體外培養(yǎng)BMSCs及ADSCs,并擴(kuò)增至第三代。取第三代的ADSCs進(jìn)行成骨、成脂肪細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)。分別用綠色熒光蛋白及細(xì)胞示蹤劑CM-Di L標(biāo)記BMSCs及ADSCs。通過脫細(xì)胞法制備小腸黏膜下層(Small Intestinal Submucosa,SIS),并將標(biāo)記完成的BMSCs及ADSCs種植于SIS上制成人工復(fù)合皮。2.取18只健康日本大耳兔,每只大耳兔于背部脊柱兩側(cè)共設(shè)計(jì)5個(gè)全層皮膚缺損創(chuàng)面,隨機(jī)分為五組:A組(ADSCs+SIS)、B組(BMSCs+SIS)、C組(ADSCs+BMSCs+SIS)、D組(SIS)及E組(空白組),每組分別于術(shù)后14天、21天、28天對創(chuàng)面大小進(jìn)行測量,取材,進(jìn)行HE染色觀察其組織結(jié)構(gòu)。結(jié)果:1、培養(yǎng)至第三代的BMSCs呈梭形、多角形,成漩渦狀排列,增殖速度快;第三代ADSCs呈梭形、三角形,增殖能力旺盛。成脂及成骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)表明所分離細(xì)胞為ADSCs。BMSCs經(jīng)綠色熒光蛋白標(biāo)記發(fā)出綠色熒光,熒光強(qiáng);ADSCs經(jīng)CM-Di L標(biāo)記發(fā)出紅色熒光,熒光強(qiáng)。BMSCs及ADSCs均可生長于SIS上,增殖能力旺盛,二者共培養(yǎng)于SIS上,可制成人工復(fù)合皮。2、動物實(shí)驗(yàn):(1)大體觀察:術(shù)后14天A、B、C、D、E五組可見創(chuàng)面中央覆蓋較薄的痂皮,顏色較深;術(shù)后21天A、B、C三組創(chuàng)面基本愈合,上覆多量皮屑,創(chuàng)面縮小,創(chuàng)面顏色變淡,D、E兩組創(chuàng)面未完全愈合,上覆皮屑少,創(chuàng)面顏色仍較深;術(shù)后28天,A、B、C三組創(chuàng)面皮屑較多,創(chuàng)面明顯縮小,創(chuàng)面顏色與周圍正常組織相似,D、E兩組創(chuàng)面已愈合,創(chuàng)面明顯縮小,創(chuàng)面顏色變淡。術(shù)后實(shí)驗(yàn)組A、B、C三組移植皮片表面較光滑,愈合效果優(yōu)于D、E兩組。術(shù)后14、21、28天實(shí)驗(yàn)組A、B、C三組創(chuàng)面收縮率低于D、E兩組(P0.05),但A、B、C三組組內(nèi)未見明顯差異;術(shù)后A、B、C三組創(chuàng)面完全愈合時(shí)間較D、E兩組低(P0.05),但A、B、C三組組內(nèi)未見明顯差異。(2)HE染色:術(shù)后14天A、B、C三組可見部分成纖維細(xì)胞及少量炎性細(xì)胞,可見新生毛細(xì)血管長入,D、E兩組成纖維細(xì)胞及炎性細(xì)胞少,未見明顯新生毛細(xì)血管;術(shù)后21、28天,A、B、C三組真皮內(nèi)膠原纖維致密,排列整齊,新生毛細(xì)血管分布較均勻,D、E兩組真皮膠原纖維排列稍紊亂,可見少量毛細(xì)血管分布。結(jié)論:利用BMSCs及ADSCs構(gòu)建人工復(fù)合皮修復(fù)兔全層皮膚缺損創(chuàng)面時(shí),能促進(jìn)新生血管形成及創(chuàng)面上皮化,加速創(chuàng)面愈合,二者聯(lián)合培養(yǎng)創(chuàng)面與單獨(dú)培養(yǎng)構(gòu)建人工復(fù)合皮組在創(chuàng)面愈合質(zhì)量及減輕創(chuàng)面收縮率方面未見明顯差異。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R318.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1199648