本文關(guān)鍵詞：鎂黃長(zhǎng)石生物活性陶瓷對(duì)人誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞行為影響研究

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【摘要】：目的：誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞(Induced pluripotent stem cells (iPSCs))作為種子細(xì)胞在組織工程應(yīng)用中具有非常大的潛能。先前的研究結(jié)果已經(jīng)證實(shí)iPSCs可以誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞。在組織工程應(yīng)用過(guò)程中,種子細(xì)胞是重要因素,而在新生組織生長(zhǎng)過(guò)程中支架材料微環(huán)境對(duì)種子細(xì)胞的增殖、分化的影響同樣重要。因此在此實(shí)驗(yàn)中,我們利用鎂黃長(zhǎng)石,一種硅酸鹽生物活性陶瓷材料,研究其體外誘導(dǎo)刺激iPSCs分化的擬胚體細(xì)胞成骨分化,為動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。方法： (1)人iPSCs多能性鑒定,包括堿性磷酸酶染色、細(xì)胞核型檢測(cè)、多能性基因(Oct3/4, Sox2, Nanog, SSEA-4, TRA-1-60, and RA-1-81)免疫熒光染色、畸胎瘤實(shí)驗(yàn)、三胚層組織細(xì)胞蘇木精曙紅染色。 (2)體外生長(zhǎng)培養(yǎng)基對(duì)比不同濃度鎂黃長(zhǎng)石浸提液(1/32、1/64、1/128、1/256)作用于人iPSCs細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)細(xì)胞多能性基因,另外生長(zhǎng)培養(yǎng)基組、成骨誘導(dǎo)因子組、鎂黃長(zhǎng)石浸提液各濃度組作用于人iPSCs細(xì)胞分化來(lái)源擬胚體細(xì)胞,在第7天細(xì)胞堿性磷酸酶染色及堿性磷酸酶活性檢測(cè),第14、21天檢測(cè)成骨相關(guān)基因,第21天同時(shí)進(jìn)行茜素紅染色。結(jié)果： (1)我們看到人iPSCs有ALP表達(dá),核型正常,同時(shí)多能性基因的表達(dá)陽(yáng)性,最后畸胎瘤形成以及三個(gè)胚層組織細(xì)胞蘇木精曙紅染色,鑒定結(jié)果符合誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞要求。 (2)在有成骨誘導(dǎo)因子(維生素C、地塞米松、b-甘油磷酸鈉)的條件下,鎂黃長(zhǎng)石浸提液的成骨誘導(dǎo)作用優(yōu)于單純成骨誘導(dǎo)液作用。在一定濃度范圍的鎂黃長(zhǎng)石浸提液刺激下,細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性及成骨相關(guān)基因檢測(cè)結(jié)果顯示骨鈣(OCN)、Ⅰ型膠原蛋白(COL1)、RUNT相關(guān)因子2 (RUNX2)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP2)的表達(dá)明顯高于對(duì)照組。而當(dāng)鎂黃長(zhǎng)石浸提液中不含成骨誘導(dǎo)因子時(shí),相比于生長(zhǎng)培養(yǎng)基組成骨分化在早期沒(méi)有變化,在分化后期第21天成骨分化增強(qiáng)。結(jié)論：在不含成骨誘導(dǎo)因子的條件下鎂黃長(zhǎng)石生物活性陶瓷對(duì)人iPSCs分化來(lái)源擬胚體細(xì)胞成骨分化有促進(jìn)作用,其作為支架材料聯(lián)合人iPSCs在骨組織工程中具有廣闊的應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R783.1
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本文編號(hào)：1171123