本文關(guān)鍵詞：富血小板纖維蛋白構(gòu)建組織工程骨的研究

  更多相關(guān)文章： 組織工程 富血小板纖維蛋白 比格犬 乳牙牙髓細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 牙槽骨缺失

【摘要】：目的: （1）探究從比格犬獲得的富血小板纖維蛋白（Platelet-rich fibrin,PRF）的結(jié)構(gòu)特征； （2）驗(yàn)證富血小板纖維蛋白作為組織工程支架材料的可能性； （3）評(píng)價(jià)富血小板纖維蛋白復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨修復(fù)牙槽骨缺損的效果； （4）篩選經(jīng)富血小板纖維蛋白體外作用后更適合早期成骨的組織工程骨種子細(xì)胞。 方法： （1）從比格犬頸外靜脈快速抽取20ml血液，3000rpm離心后獲得富血小板纖維蛋白并采用掃描電鏡和HE染色觀察其結(jié)構(gòu)。 （2）從比格犬髂前上棘處抽取5ml骨髓進(jìn)行培養(yǎng)獲的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合，將其與富血小板纖維蛋白復(fù)合后測(cè)定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖能力以及早期成骨能力。 （3）9只比格犬的雙側(cè)側(cè)切牙拔除后構(gòu)建頰側(cè)骨壁缺損的拔牙位點(diǎn)模型并隨機(jī)分組：實(shí)驗(yàn)組A：血凝塊組（n=6）；實(shí)驗(yàn)組B：?jiǎn)为?dú)的PRF組（n=6）；實(shí)驗(yàn)組C：組織工程骨組（PRF復(fù)合骨髓間充質(zhì)細(xì)胞）（n=6）。所有比格犬手術(shù)后均無(wú)異常。術(shù)后即刻、六周以及十二周通過(guò)錐形束CT觀察成骨的高度和骨密度。 （4）采用改良組織塊法體外培養(yǎng)比格犬乳牙牙髓細(xì)胞和恒牙牙髓細(xì)胞，并進(jìn)行多向分化的鑒定。將富血小板纖維蛋白（PRF）作用于乳牙牙髓細(xì)胞、恒牙牙髓細(xì)胞，1、4、7、11天時(shí)測(cè)定細(xì)胞的增殖能力、堿性磷酸酶半定量、實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)相關(guān)成骨基因，21天評(píng)價(jià)鈣結(jié)節(jié)數(shù)量。 結(jié)果： （1）從比格犬獲取富血小板纖維蛋白較容易，其在鏡下表現(xiàn)為多孔的網(wǎng)狀支架結(jié)構(gòu)并包含大量的白細(xì)胞。 （2）富血小板纖維蛋白體外作用于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以促進(jìn)其增殖和早期成骨。 （3）比格犬頰側(cè)牙槽骨壁缺損的骨修復(fù)實(shí)驗(yàn)中，在術(shù)后即刻、六周和十二周進(jìn)行錐形術(shù)CT觀察評(píng)價(jià)骨高度和骨密度，PRF和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建的組織工程骨組成骨最為顯著，六周時(shí)就有顯著差異，缺損的頰側(cè)牙槽骨壁幾乎完全修復(fù)。骨高度（2.63±0.57）和骨密度（765.19±59.70）相較血凝塊組（5.65±2.91、599.08±53.88）和PRF組（4.14±1.16、644.76±65.39）具有顯著增高（p0.05）。 （4）乳牙牙髓細(xì)胞和恒牙牙髓細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，多向分化鑒定驗(yàn)證了兩種細(xì)胞具有成骨、成脂以及成軟骨的能力。PRF體外作用于乳牙牙髓細(xì)胞、恒牙牙髓細(xì)胞都可以促進(jìn)它們的增殖、鈣化和成骨分化，較不加入PRF的組都有顯著差異（P0.05）。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)相關(guān)成骨基因在PRF的作用下較早期就有表達(dá)，且差異顯著（P0.05）。在牙髓細(xì)胞中，乳牙牙髓細(xì)胞較恒牙牙髓細(xì)胞對(duì)PRF的作用更敏感，自我礦化的能力更強(qiáng)。 結(jié)論: （1）富血小板纖維蛋白是對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性的天然纖維網(wǎng)狀支架材料，內(nèi)含大量的白細(xì)胞。 （2）富血小板纖維蛋白可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖以及成骨分化，十分有益于作為組織工程骨支架材料。 （3）PRF作為支架材料復(fù)合BMSCs可以早期修復(fù)頰側(cè)牙槽骨壁缺損。 （4）乳牙牙髓細(xì)胞可以作為與富血小板纖維蛋白復(fù)合的性能較佳的種子細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：組織工程 富血小板纖維蛋白 比格犬 乳牙牙髓細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 牙槽骨缺失
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R318
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 縮略語(yǔ)說(shuō)明11-15
• 緒論15-17
• 第一部分 富血小板纖維蛋白（PRF）的獲取和結(jié)構(gòu)特征17-22
• 1 序言17
• 2 材料與方法17-19
• 2.1 主要試劑與儀器17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-19
• 3 結(jié)果19-21
• 3.1 富血小板纖維蛋白的制備和獲取19-20
• 3.2 富血小板纖維蛋白的鏡下結(jié)構(gòu)20-21
• 4 討論21-22
• 第二部分 富血小板纖維蛋白對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外成骨作用22-32
• 1 序言22
• 2 材料與方法22-27
• 2.1 主要試劑與儀器22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-27
• 3 結(jié)果27-30
• 3.1 比格犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的獲得及培養(yǎng)27
• 3.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞多向分化鑒定27-28
• 3.3 PRF 對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外作用28-30
• 4 討論30-32
• 第三部分 富血小板纖維蛋白構(gòu)建組織工程骨的研究32-39
• 1 序言32
• 2 材料與方法32-35
• 2.1 主要試劑與儀器32-33
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法33-35
• 3 結(jié)果35-37
• 3.1 CBCT 評(píng)價(jià)35-37
• 4 討論37-39
• 第四部分 富血小板纖維蛋白（PRF）對(duì)比格犬牙髓細(xì)胞的體外作用39-53
• 1 序言39
• 2 材料與方法39-45
• 2.1 主要試劑與儀器39-40
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法40-45
• 3 結(jié)果45-51
• 3.1 比格犬乳牙牙髓細(xì)胞、恒牙牙髓細(xì)胞的獲得及培養(yǎng)45-46
• 3.2 兩種細(xì)胞多向分化鑒定46
• 3.3 MTT 實(shí)驗(yàn)46-47
• 3.4 堿性磷酸酶半定量和鈣結(jié)節(jié)半定量結(jié)果47-49
• 3.5 RT-PCR 檢測(cè)相關(guān)成骨基因49-51
• 4 討論51-53
• 全文結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 致謝56-57
• 在校期間撰寫的文章57

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 宋會(huì)平;梁春雨;楊瑞濤;;自體富血小板-白細(xì)胞凝膠復(fù)合同種異體骨移植對(duì)大段骨缺損的干預(yù)效應(yīng)[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年17期

2 屈瑞博;;組織工程學(xué)及細(xì)胞歸巢理論在頜面部骨組織缺損修復(fù)中的應(yīng)用[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年17期

3 楊盼盼;戰(zhàn)園;李盛林;劉鶴;;富血小板纖維蛋白對(duì)犬牙髓細(xì)胞的體外作用[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年05期

4 王芳;孫樂(lè)剛;張惠芹;;PRF植入兔拔牙創(chuàng)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)研究[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年01期

5 蔣燁;李響;孫淑芬;;富血小板血漿對(duì)牙髓損傷修復(fù)作用的研究進(jìn)展[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

6 宋亞平;徐世同;劉虎;黃承蔚;張彩美;;4種骨移植材料修復(fù)骨缺損動(dòng)物模型的建立[J];廣東牙病防治;2014年05期

7 賴文婷;李平;唐尤超;;骨生長(zhǎng)因子在種植義齒骨增量中的應(yīng)用進(jìn)展[J];廣東牙病防治;2014年06期

8 羅雯靜;趙靜輝;馬珊珊;孫千月;郭天奇;周延民;;富血小板血纖蛋白的生物組成和功能[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2014年04期

9 岳勇;帕爾哈提·熱西提;王強(qiáng);伊力夏提·阿力甫;魯杰;韓雪瑩;李明珍;徐曉雄;李波;居來(lái)提·吉力力;李景挺;潘杰;趙麗英;孫改生;;自體富血小板血漿結(jié)合自體骨移植治療四肢骨干粉碎性骨折[J];中國(guó)骨與關(guān)節(jié)損傷雜志;2014年06期

10 Rifat Rasier;Murat Gulsoy;;Amniotic membrane welded to contact lens by 1470-nm diode laser:a novel method for sutureless amniotic membrane transplantation[J];International Journal of Ophthalmology;2014年06期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 何福坡;具有定向孔結(jié)構(gòu)的磷酸鈣骨水泥復(fù)合支架的構(gòu)建和性能[D];華南理工大學(xué);2013年

2 靳小雷;電脈沖介導(dǎo)的基因治療影響兔髂骨貼附移植成骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

3 趙寅華;富血小板衍生物及與牙周膜干細(xì)胞復(fù)合促脫位再植牙牙周膜愈合的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

4 曹鈺琨;漸進(jìn)性力學(xué)適應(yīng)增強(qiáng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞活性功能及其機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 魏利成;PRP促進(jìn)半月板白—白區(qū)損傷愈合及對(duì)股骨髁軟骨退變影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2013年

6 楊運(yùn)發(fā);富血小板血漿（PRP）對(duì)肌腱干細(xì)胞生物學(xué)影響的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

7 薛茹月;基底硬度及細(xì)胞密度對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞骨分化的影響及機(jī)理研究[D];重慶大學(xué);2013年

8 熊煒;PI3K/Akt信號(hào)通路參與血小板源性生長(zhǎng)因子促進(jìn)人晶狀體上皮細(xì)胞移行[D];中南大學(xué);2012年

9 康健;TGF-β3和BMP-7基因共轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程髓核的相關(guān)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

10 賀龍龍;可注射式自體脂肪組織復(fù)合PRF和SVF在小型豬模型中的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 熊小龍;富血小板血漿對(duì)大鼠跟腱斷裂早期愈合的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

2 孫旭;拔牙創(chuàng)不同處理方式對(duì)牙槽窩愈合的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

3 謝蔓菁;犬自體富血小板血漿凝膠析出液對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移作用體外研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

4 徐秋;富血小板血漿對(duì)牙周膜干細(xì)胞膜片生物活性影響的研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

5 王海;來(lái)源于人退變椎間盤的三種干細(xì)胞與BM-MSCs生物學(xué)特性及組織工程應(yīng)用的比較研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 李龍和;富血小板纖維蛋白/異種骨復(fù)合支架材料構(gòu)建組織工程骨的初步研究[D];延邊大學(xué);2013年

7 呂洪磊;羥基磷灰石/殼聚糖/聚乳酸骨組織工程支架材料制備及相關(guān)性能研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

8 楊勇;ADSCs復(fù)合PRF修復(fù)家兔耳軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 邢紅艷;ADSCs復(fù)合PRF和EPCs治療小鼠放射性涎腺損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

10 杜靜;BMPs信號(hào)通路在壓力調(diào)控BMSCs/PRF雙膜復(fù)合體成軟骨響應(yīng)中作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1122331