本文關(guān)鍵詞：用組織工程學(xué)方法探討兔佐劑性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)的實(shí)驗(yàn)病理學(xué)研究

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【摘要】：目的 通過(guò)研究利用組織工程學(xué)方法分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并將其在體外純化培養(yǎng)、誘導(dǎo)成軟骨細(xì)胞，將軟骨細(xì)胞與海藻酸鈣支架混合后，注入關(guān)節(jié)腔治療兔佐劑性關(guān)節(jié)炎造成的關(guān)節(jié)軟骨缺損，觀察治療后的效果，進(jìn)而探討體外培養(yǎng)的自體軟骨細(xì)胞在注入關(guān)節(jié)腔后對(duì)軟骨修復(fù)的作用，為臨床上利用組織工程學(xué)方法治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎提供相應(yīng)的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 ⑴取實(shí)驗(yàn)用新西蘭長(zhǎng)耳白兔隨機(jī)分為3組：假手術(shù)對(duì)照組8只，關(guān)節(jié)炎模型組8只，軟骨細(xì)胞-海藻酸鈣支架復(fù)合物治療組8只。 ⑵對(duì)關(guān)節(jié)炎模型組和軟骨細(xì)胞-海藻酸鈣支架復(fù)合物治療組兔雙膝關(guān)節(jié)處注射佐劑誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎，對(duì)假手術(shù)對(duì)照組兔膝關(guān)節(jié)注射生理鹽水。 ⑶抽取治療組動(dòng)物骨髓，將所抽骨髓利用分離液離心法分離出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)純化，并使其向軟骨方向誘導(dǎo)。 ⑷將所得軟骨細(xì)胞與海藻酸鈣支架混合，電鏡觀察軟骨細(xì)胞在支架內(nèi)的生長(zhǎng)情況，并將支架復(fù)合物注回治療組關(guān)節(jié)腔內(nèi)，治療時(shí)間為一個(gè)月。假手術(shù)組及模型組兔膝關(guān)節(jié)則注入生理鹽水用于對(duì)照。 ⑸取三組兔子的膝關(guān)節(jié)，，進(jìn)行大體觀察，檢測(cè)軟骨細(xì)胞-海藻酸鈣支架復(fù)合物治療組的療效，進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分，并通過(guò)HE染色和免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)軟骨細(xì)胞在體內(nèi)的修復(fù)作用。 結(jié)果 ⑴注射佐劑的實(shí)驗(yàn)用兔均出現(xiàn)關(guān)節(jié)紅腫變形，顯示造模成功。 ⑵體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞在加入誘導(dǎo)劑后出現(xiàn)了細(xì)胞形態(tài)的改變，阿利新藍(lán)染色及II型膠原免疫組化結(jié)果顯示誘導(dǎo)后形成的細(xì)胞為軟骨細(xì)胞。 ⑶病理學(xué)分析顯示治療組的軟骨缺損比未治療組的有明顯修復(fù)性改善。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)軟骨細(xì)胞-海藻酸鈣支架復(fù)合物治療后關(guān)節(jié)軟骨缺損處的病理學(xué)分析，證實(shí)在對(duì)兔佐劑性關(guān)節(jié)炎的軟骨缺損治療中，利用組織工程學(xué)方法治療是一種有效的治療方法。
【關(guān)鍵詞】：組織工程 佐劑性關(guān)節(jié)炎 軟骨修復(fù) 軟骨細(xì)胞 海藻酸鈣支架
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-10
• 引言10-14
• 1 材料與試劑配制14-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-16
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑14-15
• 1.1.3 常用耗材及器具15
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 1.2 試劑配制方法16-19
• 1.2.1 磷酸鹽緩沖液（PBS）的配制16
• 1.2.2 NaCl 溶液的配制16
• 1.2.3 CaCl2溶液的配制16
• 1.2.4 D-Hanks 溶液的配制16
• 1.2.5 0.25%胰酶溶液的配制16-17
• 1.2.6 Percoll（1.073 g/ml）細(xì)胞分離液的配制17
• 1.2.7 麻醉劑的配制17
• 1.2.8 固定液的配制17
• 1.2.9 脫鈣液的配制17
• 1.2.10 海藻酸鹽懸液的配制17-18
• 1.2.11 細(xì)胞培養(yǎng)基的配制18
• 1.2.12 75%乙醇18-19
• 2 實(shí)驗(yàn)方法19-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖19
• 2.2 制備動(dòng)物模型及提取種子細(xì)胞19-20
• 2.3 種子細(xì)胞的分離純化20
• 2.4 種子細(xì)胞的體外培養(yǎng)20-21
• 2.5 種子細(xì)胞的誘導(dǎo)分化21
• 2.6 細(xì)胞誘導(dǎo)后的鑒定21-22
• 2.7 軟骨細(xì)胞與海藻酸鈣支架的復(fù)合22
• 2.8 軟骨細(xì)胞-海藻酸鈣支架掃描電鏡觀察22-23
• 2.9 軟骨細(xì)胞-海藻酸鈣支架混合物回注23
• 2.10 獲取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膝關(guān)節(jié)23
• 2.11 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膝關(guān)節(jié)的觀察及關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)評(píng)分23-24
• 2.12 制作膝關(guān)節(jié)石蠟切片24-25
• 2.13 膝關(guān)節(jié)石蠟切片的 HE 染色25
• 2.14 膝關(guān)節(jié)切片的 II 型膠原免疫組化檢驗(yàn)25
• 2.15 統(tǒng)計(jì)分析25-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-35
• 3.1 動(dòng)物模型制備結(jié)果26
• 3.2 膝關(guān)節(jié)大體觀察結(jié)果26-28
• 3.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成軟骨種子細(xì)胞28-29
• 3.4 兔膝關(guān)節(jié)處 HE 染色結(jié)果29-30
• 3.5 兔膝關(guān)節(jié)處免疫組化染色結(jié)果30-32
• 3.6 藻酸鈣支架制備及觀察32-33
• 3.7 膝關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)評(píng)分33-35
• 4 討論35-38
• 5 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 附錄A 常用縮略詞44-45
• 附錄B 綜述45-55
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 在校研究成果55-56
• 致謝56

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1109063