本文關鍵詞：用組織工程學方法探討兔佐劑性關節(jié)炎關節(jié)軟骨修復的實驗病理學研究

  更多相關文章： 組織工程 佐劑性關節(jié)炎 軟骨修復 軟骨細胞 海藻酸鈣支架

【摘要】：目的 通過研究利用組織工程學方法分離骨髓間充質(zhì)干細胞并將其在體外純化培養(yǎng)、誘導成軟骨細胞，將軟骨細胞與海藻酸鈣支架混合后，注入關節(jié)腔治療兔佐劑性關節(jié)炎造成的關節(jié)軟骨缺損，觀察治療后的效果，進而探討體外培養(yǎng)的自體軟骨細胞在注入關節(jié)腔后對軟骨修復的作用，為臨床上利用組織工程學方法治療類風濕性關節(jié)炎提供相應的理論基礎和實驗依據(jù)。 方法 ⑴取實驗用新西蘭長耳白兔隨機分為3組：假手術對照組8只，關節(jié)炎模型組8只，軟骨細胞-海藻酸鈣支架復合物治療組8只。 ⑵對關節(jié)炎模型組和軟骨細胞-海藻酸鈣支架復合物治療組兔雙膝關節(jié)處注射佐劑誘導關節(jié)炎，對假手術對照組兔膝關節(jié)注射生理鹽水。 ⑶抽取治療組動物骨髓，將所抽骨髓利用分離液離心法分離出骨髓間充質(zhì)干細胞，體外培養(yǎng)純化，并使其向軟骨方向誘導。 ⑷將所得軟骨細胞與海藻酸鈣支架混合，電鏡觀察軟骨細胞在支架內(nèi)的生長情況，并將支架復合物注回治療組關節(jié)腔內(nèi)，治療時間為一個月。假手術組及模型組兔膝關節(jié)則注入生理鹽水用于對照。 ⑸取三組兔子的膝關節(jié)，，進行大體觀察，檢測軟骨細胞-海藻酸鈣支架復合物治療組的療效，進行組織學評分，并通過HE染色和免疫組織化學檢驗軟骨細胞在體內(nèi)的修復作用。 結(jié)果 ⑴注射佐劑的實驗用兔均出現(xiàn)關節(jié)紅腫變形，顯示造模成功。 ⑵體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞在加入誘導劑后出現(xiàn)了細胞形態(tài)的改變，阿利新藍染色及II型膠原免疫組化結(jié)果顯示誘導后形成的細胞為軟骨細胞。 ⑶病理學分析顯示治療組的軟骨缺損比未治療組的有明顯修復性改善。 結(jié)論 本實驗通過對軟骨細胞-海藻酸鈣支架復合物治療后關節(jié)軟骨缺損處的病理學分析，證實在對兔佐劑性關節(jié)炎的軟骨缺損治療中，利用組織工程學方法治療是一種有效的治療方法。
【關鍵詞】：組織工程 佐劑性關節(jié)炎 軟骨修復 軟骨細胞 海藻酸鈣支架
【學位授予單位】：寧波大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-10
• 引言10-14
• 1 材料與試劑配制14-19
• 1.1 實驗材料14-16
• 1.1.1 實驗動物14
• 1.1.2 實驗試劑14-15
• 1.1.3 常用耗材及器具15
• 1.1.4 實驗儀器15-16
• 1.2 試劑配制方法16-19
• 1.2.1 磷酸鹽緩沖液（PBS）的配制16
• 1.2.2 NaCl 溶液的配制16
• 1.2.3 CaCl2溶液的配制16
• 1.2.4 D-Hanks 溶液的配制16
• 1.2.5 0.25%胰酶溶液的配制16-17
• 1.2.6 Percoll（1.073 g/ml）細胞分離液的配制17
• 1.2.7 麻醉劑的配制17
• 1.2.8 固定液的配制17
• 1.2.9 脫鈣液的配制17
• 1.2.10 海藻酸鹽懸液的配制17-18
• 1.2.11 細胞培養(yǎng)基的配制18
• 1.2.12 75%乙醇18-19
• 2 實驗方法19-26
• 2.1 實驗技術路線圖19
• 2.2 制備動物模型及提取種子細胞19-20
• 2.3 種子細胞的分離純化20
• 2.4 種子細胞的體外培養(yǎng)20-21
• 2.5 種子細胞的誘導分化21
• 2.6 細胞誘導后的鑒定21-22
• 2.7 軟骨細胞與海藻酸鈣支架的復合22
• 2.8 軟骨細胞-海藻酸鈣支架掃描電鏡觀察22-23
• 2.9 軟骨細胞-海藻酸鈣支架混合物回注23
• 2.10 獲取實驗動物膝關節(jié)23
• 2.11 實驗動物膝關節(jié)的觀察及關節(jié)軟骨組織學評分23-24
• 2.12 制作膝關節(jié)石蠟切片24-25
• 2.13 膝關節(jié)石蠟切片的 HE 染色25
• 2.14 膝關節(jié)切片的 II 型膠原免疫組化檢驗25
• 2.15 統(tǒng)計分析25-26
• 3 實驗結(jié)果26-35
• 3.1 動物模型制備結(jié)果26
• 3.2 膝關節(jié)大體觀察結(jié)果26-28
• 3.3 骨髓間充質(zhì)干細胞誘導分化成軟骨種子細胞28-29
• 3.4 兔膝關節(jié)處 HE 染色結(jié)果29-30
• 3.5 兔膝關節(jié)處免疫組化染色結(jié)果30-32
• 3.6 藻酸鈣支架制備及觀察32-33
• 3.7 膝關節(jié)軟骨組織學評分33-35
• 4 討論35-38
• 5 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-44
• 附錄A 常用縮略詞44-45
• 附錄B 綜述45-55
• 參考文獻53-55
• 在校研究成果55-56
• 致謝56

【參考文獻】

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本文編號：1109063