發(fā)布時間：2017-10-23 09:19

  本文關(guān)鍵詞：PLGA-HA-PVA材料復(fù)合hBMSCs向軟骨分化的體外實驗研究

  更多相關(guān)文章： 軟骨損傷 組織工程 聚乳酸-羥基乙酸共聚物 聚乙烯醇 羥基磷灰石 成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

【摘要】：目的：探索hBMSCs接種于不同配比PLGA-HA-PVA復(fù)合三維支架材料上干細(xì)胞的分化情況。 方法：制備PVA質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為15wt%、10wt%、5wt%PLGA-HA-PVA復(fù)合三維支架材料,其中PLGA為30wt%, HA為5wt%。支架上接種密度為1x106/mlhBMSCs的第3代傳代細(xì)胞。將上述材料分為誘導(dǎo)組及非誘導(dǎo)組(n=5),根據(jù)分組分別加上hBMSCs軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液或普通hBMSCs培養(yǎng)液,并給每組設(shè)立空白對照組(含干細(xì)胞及培養(yǎng)液)。每3d換液一次,觀察支架周圍細(xì)胞生長情況,回收培養(yǎng)后7d、14d、21d時培養(yǎng)液行ELISA定量檢測II型膠原及糖胺聚糖,培養(yǎng)21d后取復(fù)合材料行HE染色、免疫組化定性檢測II型膠原。采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：hBMSCs生長狀況良好,細(xì)胞貼壁,紡錘形或多角。在培養(yǎng)后21天復(fù)合物HE染色示誘導(dǎo)組有細(xì)胞外基質(zhì)的分泌,II型膠原免疫組化結(jié)果顯示誘導(dǎo)組存在棕黃色顆粒；非誘導(dǎo)組HE染色未見明顯細(xì)胞外基質(zhì)分泌,免疫組化示無明顯棕黃色顆粒,表示誘導(dǎo)組有II型膠原表達(dá)。誘導(dǎo)組培養(yǎng)液中II型膠原及糖胺聚糖的含量在PVA濃度為15wt%最高,PVA濃度為10wt%次之,PVA濃度為5wt%及空白對照組最低,差異具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。非誘導(dǎo)組及非誘導(dǎo)空白對照組培養(yǎng)液中未測及II型膠原及糖胺聚糖成分。 結(jié)論：PVA濃度為15wt%或10wt%的PLGA-PVA-HA三維復(fù)合支架在軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)液的作用下能促進(jìn)]BMSCs分化為軟骨細(xì)胞。且以PVA濃度為15wt%促進(jìn)能力更強。
【關(guān)鍵詞】：軟骨損傷 組織工程 聚乳酸-羥基乙酸共聚物 聚乙烯醇 羥基磷灰石 成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R683;R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-10
• 符號說明10-11
• 1 前言11-13
• 2 資料與方法13-19
• 2.1 實驗材料與細(xì)胞13
• 2.2 主要儀器與設(shè)備13
• 2.3 主要試劑13-14
• 2.4 實驗方法14-18
• 2.4.1 實驗分組14
• 2.4.2 實驗流程14
• 2.4.3 PLGA-HA-PVA復(fù)合支架材料的制備14-15
• 2.4.4 hBMSCs的擴(kuò)增15
• 2.4.5 hBMSCs與支架材料的復(fù)合培養(yǎng)15-16
• 2.4.6 支架細(xì)胞復(fù)合體HE染色16
• 2.4.7 支架細(xì)胞復(fù)合體免疫組化染色16-17
• 2.4.8 細(xì)胞培養(yǎng)液ELISA檢測Ⅱ型膠原及糖胺聚糖17-18
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)方法18-19
• 3 結(jié)果19-21
• 3.1 支架周圍細(xì)胞生長情況19
• 3.2 支架細(xì)胞復(fù)合物HE染色及Ⅱ型膠原免疫組化結(jié)果19
• 3.3 支架細(xì)胞復(fù)合物培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液Ⅱ型膠原及糖胺聚糖的含量19-21
• 3.3.1 誘導(dǎo)組培養(yǎng)液Ⅱ型膠原及糖胺聚糖表達(dá)19-20
• 3.3.2 非誘導(dǎo)組培養(yǎng)液Ⅱ型膠原及糖胺聚糖表達(dá)20-21
• 4 附圖21-25
• 5 統(tǒng)計圖25-26
• 6 討論26-29
• 7 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 綜述33-51
• 1. 關(guān)節(jié)軟骨的結(jié)構(gòu)與功能33-34
• 2. 軟骨細(xì)胞微環(huán)境34
• 3. 關(guān)節(jié)軟骨損傷34-35
• 4. 關(guān)節(jié)軟骨損傷后的修復(fù)35-36
• 5. 關(guān)節(jié)軟骨損傷后的治療36-37
• 6. 軟骨組織工程37-45
• 6.1 細(xì)胞類型37-40
• 6.1.1 軟骨細(xì)胞37-38
• 6.1.2 多能干細(xì)胞38-40
• 6.2 支架類型40-42
• 6.2.1 蛋白質(zhì)類材料40-41
• 6.2.2 碳水化合物類材料41
• 6.2.3 人工合成類材料41-42
• 6.3 生長因子42-45
• 6.3.1 轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)超家族43
• 6.3.2 纖維母細(xì)胞生長因子(FGF)家族43
• 6.3.3 胰島素樣生長因子(IGF)43-44
• 6.3.4 血小板來源生長因子44-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果51-52
• 致謝52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 馬驍;楊學(xué)軍;;轉(zhuǎn)化生長因子在軟骨修復(fù)方面的應(yīng)用進(jìn)展[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2011年02期

2 李海東;肖靜;程鳳梅;陳湘雄;;PVA/HA復(fù)合水凝膠的制備及性能研究[J];長春工業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2007年03期

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本文編號：1082622