本文關鍵詞：羥基磷灰石納米粒子抗腫瘤活性研究

  更多相關文章： 羥基磷灰石納米粒子 腫瘤細胞 細胞凋亡 細胞攝取 納米二氧化硅

【摘要】：羥基磷灰石納米粒子(HAPNs)是一種具有較好生物相容性的納米材料,同時還能抑制多種腫瘤細胞的生長。但是目前關于不同特性HAPNs對不同種類腫瘤細胞的毒性作用尚缺乏系統(tǒng)的研究。 采用液相沉淀法制備了大小和表面電荷不同的兩種短棒狀羥基磷灰石納米粒子：HAPNs和HAPNs-1,并通過溶膠凝膠法合成了球形GS-HAPN。體外細胞實驗研究發(fā)現(xiàn)帶較少負電荷(-9.67mV)、較小(20×50nm)的棒狀HAPNs具有較強的抗腫瘤活性。HAPNs能在不影響人正常肝細胞L-02生長的條件下,顯著地抑制三種腫瘤細胞生長,但其細胞毒性隨細胞種類不同有所差異,表現(xiàn)為：人胃癌細胞MGC80-3人肝癌細胞HepG2人宮頸癌細胞HeLa。HAPNs使腫瘤細胞內胱冬酶-3(caspase-3)和caspase-9的活性上升,但對caspase-8活性無影響,在腫瘤細胞中引發(fā)了線粒體途徑介導的細胞凋亡。此外,HAPNs還引起了腫瘤細胞內不同程度的活性氧(ROS)水平上升和還原型谷胱甘肽(GSH)水平下降,但幅度不大,其中HeLa受到的氧化損傷較強。腫瘤細胞和正常細胞均能攝取HAPNs,但是HAPNs能夠進入腫瘤細胞的細胞核,且MGC80-3細胞核中出現(xiàn)的粒子較多,而正常細胞核內幾乎無納米粒子分布。 除HAPNs外,另一種無機納米粒子：20nm的二氧化硅顆粒(SNP20),也對MGC80-3和HeLa細胞產(chǎn)生顯著毒性。細胞核形態(tài)檢測和流式細胞檢測表明SNP20也能引發(fā)這兩種腫瘤細胞發(fā)生凋亡。SNP20對MGC80-3的細胞毒性比HeLa強。SNP20能夠使腫瘤細胞內活性氧(ROS)水平急劇升高,而且能進入腫瘤細胞胞質甚至細胞核內。與HAPNs不同,SNP20誘導腫瘤細胞凋亡的主要原因可能是引起細胞發(fā)生氧化應激反應。
【關鍵詞】：羥基磷灰石納米粒子 腫瘤細胞 細胞凋亡 細胞攝取 納米二氧化硅
【學位授予單位】：華東理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第1章 前言10-20
• 1.1 納米材料簡介10-11
• 1.1.1 納米材料及其分類10
• 1.1.2 納米材料的特性10
• 1.1.3 納米材料的功能和應用10-11
• 1.2 納米材料抗腫瘤及其生物毒性研究11-15
• 1.2.1 納米材料載藥體系用于腫瘤治療和診斷11-12
• 1.2.1.1 納米材料與腫瘤治療11-12
• 1.2.1.2 納米材料與腫瘤診斷12
• 1.2.2 納米材料毒性研究12-15
• 1.2.2.1 納米材料的生物毒性研究13-14
• 1.2.2.2 納米材料針對腫瘤細胞的選擇性毒性14-15
• 1.3 羥基磷灰石抗腫瘤活性研究15-18
• 1.3.1 納米羥基磷灰石15
• 1.3.2 納米羥基磷灰石在生物醫(yī)藥領域的應用15-17
• 1.3.3 納米羥基磷灰石的抗腫瘤活性研究17-18
• 1.4 論文研究的目的、意義及主要研究內容18-20
• 第2章 材料與方法20-35
• 2.1 實驗材料20-22
• 2.1.1 細胞株20
• 2.1.2 納米羥基磷灰石20
• 2.1.3 納米二氧化硅20
• 2.1.4 生化試劑20-22
• 2.2 儀器與設備22-23
• 2.3 常用試劑23-24
• 2.4 納米材料制備與表征24-26
• 2.4.1 納米羥基磷灰石的制備24
• 2.4.2 材料的FITC熒光標記24-25
• 2.4.3 透射電子顯微鏡觀察納米顆粒形貌25
• 2.4.4 X-射線衍射分析(XRD)25
• 2.4.5 Zata電位檢測25-26
• 2.5 細胞實驗26-35
• 2.5.1 實驗器材及材料滅菌26
• 2.5.2 細胞培養(yǎng)方法26-27
• 2.5.3 細胞計數(shù)27
• 2.5.4 細胞總蛋白提取27-28
• 2.5.5 BCA比色法測定蛋白濃度28
• 2.5.6 考馬斯亮藍(Bradford)比色法測定蛋白含量28-29
• 2.5.7 細胞活性測定29
• 2.5.8 細胞核染色29-30
• 2.5.9 Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術檢測細胞凋亡30-31
• 2.5.10 細胞內胱冬酶活性檢測31-32
• 2.5.10.1 Caspase-3檢測31
• 2.5.10.2 Caspase-8,9檢測31-32
• 2.5.11 細胞內ROS含量測定32-33
• 2.5.12 細胞內GSH含量測定33-34
• 2.5.13 細胞的粒子攝取及粒子的胞內分布34
• 2.5.14 統(tǒng)計學方法34-35
• 第3章 不同特性羥基磷灰石納米粒子的抗腫瘤活性研究35-43
• 3.1 概述35
• 3.2 結果35-41
• 3.2.1 材料表征35-36
• 3.2.2 抗腫瘤活性36-37
• 3.2.3 羥基磷灰石納米粒子引發(fā)腫瘤細胞凋亡37-41
• 3.2.3.1 細胞核形態(tài)變化37-38
• 3.2.3.2 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡38-41
• 3.3 討論41-43
• 第4章 羥基磷灰石納米粒子對不同類型腫瘤細胞的抑制作用43-55
• 4.1 概述43
• 4.2 結果43-52
• 4.2.1 羥基磷灰石納米粒子的表征43-44
• 4.2.2 羥基磷灰石納米粒子在三種腫瘤細胞中引發(fā)不同程度的細胞毒性44-46
• 4.2.3 羥基磷灰石納米粒子誘導腫瘤細胞凋亡46-48
• 4.2.3.1 細胞核形態(tài)變化46
• 4.2.3.2 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡46-48
• 4.2.4 羥基磷灰石納米粒子對腫瘤細胞內胱冬酶Caspase-3,8,9活性的影響48-49
• 4.2.5 羥基磷灰石納米粒子對細胞內ROS和GSH水平的影響49-50
• 4.2.6 細胞對羥基磷灰石納米粒子的攝取和胞內分布50-52
• 4.3 討論52-55
• 第5章 納米二氧化硅的抗腫瘤細胞活性研究55-64
• 5.1 概述55-57
• 5.1.1 納米二氧化硅55-56
• 5.1.2 納米二氧化硅的細胞毒性和抗腫瘤活性研究56-57
• 5.2 結果57-62
• 5.2.1 納米二氧化硅的表征57
• 5.2.2 納米二氧化硅對腫瘤細胞的毒性57-58
• 5.2.3 納米二氧化硅誘導腫瘤細胞凋亡58-60
• 5.2.3.1 細胞核形態(tài)變化58-59
• 5.2.3.2 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡59-60
• 5.2.4 納米二氧化硅對細胞內ROS含量的影響60-61
• 5.2.5 納米二氧化硅的胞內分布61-62
• 5.3 討論62-64
• 第6章 結論與展望64-66
• 參考文獻66-74
• 致謝74-75
• 附錄：碩士研究生期間發(fā)表或投寄的論文75

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 夏和生,王琪;納米技術進展[J];高分子材料科學與工程;2001年04期

2 姚暉,杜昶,楊韶華,崔福齋,雷濤;納米羥晶/膠原仿生骨修復家兔顱頜骨缺損的實驗研究[J];透析與人工器官;2000年02期

3 盧世璧;納米技術在生命科學發(fā)展中的地位和作用[J];中國醫(yī)學科學院學報;2002年02期

4 張士成,李世普,陳芳;磷灰石超微粉對癌細胞作用的初步研究[J];武漢理工大學學報;1996年01期

5 夏清華,陳道達,林華,閆玉華,馮凌云,李世普;HASM對W-256細胞系DNA含量及細胞周期的影響[J];武漢工業(yè)大學學報;1999年02期

，

本文編號：1078286