本文關(guān)鍵詞：殼聚糖—阿侖膦酸鈉復(fù)合材料對大鼠成骨細(xì)胞增殖和分化影響的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： SD大鼠 成骨細(xì)胞 殼聚糖 阿侖膦酸鈉 復(fù)合材料 骨組織工程

【摘要】：【目的】體外分離培養(yǎng)新生SD大鼠顱蓋骨的成骨細(xì)胞，并對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生物學(xué)鑒定。構(gòu)建阿侖膦酸鈉(ALN)與殼聚糖(Cs)物質(zhì)的量之比分別為1:5、1:10、1:20的三種殼聚糖-阿侖膦酸鈉(Cs/ALN)復(fù)合材料，觀察其生物相容性，并初步研究三種Cs/ALN復(fù)合材料對成骨細(xì)胞增殖與分化的影響。 【方法】用酶消化法分離培養(yǎng)新生SD大鼠顱蓋骨的成骨細(xì)胞，并進(jìn)行體外傳代培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡及HE染色法觀察成骨細(xì)胞的形態(tài)；利用MTT比色試驗(yàn)繪制P3、P4代成骨細(xì)胞的增殖曲線；堿性磷酸酶(ALP)染色法檢測成骨細(xì)胞內(nèi)ALP的含量；茜素紅染色法及Von kossa染色法觀察成骨細(xì)胞于體外培養(yǎng)時(shí)形成的礦化結(jié)節(jié)。制備ALN與Cs物質(zhì)的量之比分別為1:5、1:10、1:20的三種Cs/ALN復(fù)合材料，，同時(shí)制備不含ALN的Cs支架材料。將P3代SD大鼠成骨細(xì)胞與上述4種材料復(fù)合培養(yǎng)一段時(shí)間后，掃描電鏡觀察細(xì)胞在材料表面的黏附及生長情況；MTT比色試驗(yàn)評(píng)價(jià)材料對成骨細(xì)胞增殖的影響；Transwell法觀察材料對細(xì)胞的趨化作用；流式細(xì)胞術(shù)檢測材料對細(xì)胞生長周期的影響；酶標(biāo)儀法、ELISA法分別檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中ALP及骨鈣素(BGP)的含量，以初步了解材料對細(xì)胞分化的影響。 【結(jié)果】本實(shí)驗(yàn)采用酶消化法成功分離并培養(yǎng)出純度較高的SD大鼠成骨細(xì)胞；MTT比色試驗(yàn)顯示細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，擴(kuò)增迅速；ALP染色可觀察到成骨細(xì)胞內(nèi)含有大量的ALP顆粒，說明細(xì)胞的分泌功能強(qiáng)；培養(yǎng)2周后，茜素紅染色法及Von kossa染色法可觀察到大量鈣化結(jié)節(jié)的形成。將細(xì)胞與四種支架材料復(fù)合培養(yǎng)一段時(shí)間后，掃描電鏡觀察及MTT比色試驗(yàn)均證實(shí)四種材料都具有良好的生物相容性；MTT比色試驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示物質(zhì)的量之比ALN: Cs=1:10的Cs/ALN復(fù)合材料對成骨細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用最強(qiáng)；細(xì)胞培養(yǎng)上清液ALP及BGP含的測定顯示物質(zhì)的量之比ALN: Cs=1:10的Cs/ALN復(fù)合材料對成骨細(xì)胞分化的促進(jìn)作用亦最強(qiáng)；ALN: Cs為1:5和1:20的兩種Cs/ALN復(fù)合材料對成骨細(xì)胞的增殖和分化也有一定的促進(jìn)作用；而Cs支架材料則對成骨細(xì)胞的增殖和分化無明顯的促進(jìn)作用；Transwell試驗(yàn)結(jié)果顯示，ALN: Cs=1:5的Cs/ALN復(fù)合材料對成骨細(xì)胞的趨化作用最強(qiáng)。 【結(jié)論】本實(shí)驗(yàn)成功從新出生的SD大鼠顱蓋骨中分離出成骨細(xì)胞，經(jīng)反復(fù)貼壁法純化后細(xì)胞純度較高，且體外培養(yǎng)時(shí)擴(kuò)增迅速，形態(tài)學(xué)及生物學(xué)特性穩(wěn)定。Cs/ALN復(fù)合材料是一種具有良好生物相容性的新型復(fù)合生物支架材料，除了具備傳統(tǒng)的骨組織工程支架材料的特性外，物質(zhì)的量之比ALN: Cs=1:10的Cs/ALN復(fù)合材料具有明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖、分化及一定的趨化的作用，為將藥物負(fù)載在組織工程生物支架材料中，以達(dá)到大幅度提高體內(nèi)成骨效率、修復(fù)骨缺損的目的提供了初步的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：SD大鼠 成骨細(xì)胞 殼聚糖 阿侖膦酸鈉 復(fù)合材料 骨組織工程
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 1 引言8-24
• 1.1 種子細(xì)胞9-15
• 1.2 骨組織工程生物活性支架材料的研究進(jìn)展15-22
• 1.3 阿侖膦酸鈉(Alendronate, ALN)的研究進(jìn)展22-24
• 2 實(shí)驗(yàn)一 SD 大鼠成骨細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定24-43
• 2.1 前言24
• 2.2 材料與方法24-31
• 2.3 結(jié)果31-32
• 2.4 討論32-35
• 2.5 結(jié)論35-36
• 2.6 附圖36-43
• 3 實(shí)驗(yàn)二 殼聚糖-阿侖膦酸鈉復(fù)合材料對大鼠成骨細(xì)胞增殖與分化的影響43-68
• 3.1 前言43
• 3.2 材料與方法43-52
• 3.3 結(jié)果52-56
• 3.4 討論56-59
• 3.5 結(jié)論59-61
• 3.6 附圖61-68
• 4 全文結(jié)論68-69
• 5 不足與展望69-70
• 6 參考文獻(xiàn)70-77
• 7 英文縮略詞表77-79
• 8 在學(xué)期間發(fā)表論文及科研成果79-80
• 9 致謝80

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 屠美,崔瑩,周長忍,鄒翰;肝素化殼聚糖季銨鹽/殼聚糖復(fù)合膜抗凝血性能的研究[J];功能高分子學(xué)報(bào);1997年03期

2 王劍寧,曾融生,楊小平,楊國平;胰島素樣生長因子Ⅱ?qū)w外培養(yǎng)成骨細(xì)胞輻射效應(yīng)的影響[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2003年05期

3 王艷,周培根,俞劍

本文編號(hào)：1071848