本文關(guān)鍵詞：兩種樹脂基質(zhì)復(fù)合材料對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：目的：研究ENAMIC彈性瓷、Ceramage聚合瓷兩種修復(fù)材料對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞黏附、增殖、蛋白合成以及基因表達(dá)等生物學(xué)行為的影響,了解它們的生物相容性,為種植冠修復(fù)材料選擇提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：1、實(shí)驗(yàn)分組將ENAMIC、Ceramage、純鈦片三種材料分為EN、Ce、Ti三組；將含10% FBS的DMEM培養(yǎng)液作為陰性對(duì)照組(Nc組)；將含0.64%苯酚、10% FBS的DMEM培養(yǎng)液作為陽性對(duì)照組(Pc組)。Ceramage經(jīng)堆朔光照固化制作成12x10x1.5mm大小試件30枚。將ENAMIC和純鈦片切割、打磨為12x10x1.5mm大小試件各30枚。90枚試件依次用不同粒度耐水砂紙打磨,使試件最終大小為10x8xlmm。將EN、Ce、Ti三組試件超聲清洗、干燥、滅菌,各組取3枚試件用于觀察人牙齦成纖維細(xì)胞黏附,剩余27枚試件用于制備浸提液,按照表面積/浸提液體積為3cm2/mL的標(biāo)準(zhǔn),將試件置于含有10% FBS的DMEM培養(yǎng)基中,(37士1)℃浸提(72士2)h,并用0.22μM的過濾器將浸提液過濾備用。2、人牙齦成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定通過牙齦組織塊培養(yǎng)的方法獲取并純化人牙齦成纖維細(xì)胞(human gingival fabroblasts, HGFs);通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色(波形絲蛋白、角蛋白染色)的方法鑒別HGFs的來源,結(jié)合取材部位及細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察確定細(xì)胞是否為HGFs;通過原代細(xì)胞傳代培養(yǎng)獲取實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞；通過細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法,繪制HGFs生長曲線,了解HGFs的增殖規(guī)律。3、EN、Ce、Ti三組試件周圍HGFs黏附情況觀察EN、Ce、Ti組分別取3枚試件與第4代HGFs共培養(yǎng)3天,顯微鏡下觀察三組試件周圍細(xì)胞黏附情況,以Nc組培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞為對(duì)照,比較細(xì)胞黏附情況。4、EN、 Ce、Ti三組材料浸提液對(duì)HGFs增殖的影響將HGFs接種在EN、Ti、Ce三組材料浸提液、Pc組及Nc組培養(yǎng)液中,培養(yǎng)1、3、5、7天,通過噻唑藍(lán)(MTT)法測定各組細(xì)胞增殖情況。5、EN、Ce、Ti三組材料細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)通過計(jì)算各組細(xì)胞相對(duì)增殖率(RGR),將RGR轉(zhuǎn)換為0-4級(jí)毒性級(jí)別,評(píng)價(jià)三組材料的細(xì)胞毒性。6、EN、Ce、Ti三組材料浸提液對(duì)HGFs表達(dá)工型膠原蛋白、纖維粘連蛋白基因mRAN的影響HGFs在EN、Ce、Ti三組材料浸提液、Nc組培養(yǎng)液中培養(yǎng)3天,通過RT-qPCR檢測HGFs I型膠原蛋白(COL-I)、纖維粘連蛋白(Fn)基因mRAN表達(dá)的情況。7、EN、Ce、Ti三組材料浸提液對(duì)HGFs合成和分泌I型膠原蛋白的影響HGFs在EN、Ti、Ce三組材料浸提液、Nc組培養(yǎng)液中培養(yǎng)1、3天,收集培養(yǎng)液,提取上清液,ELISA法檢測上清液中I型膠原蛋白的含量。結(jié)果：1、HGFs的培養(yǎng)及鑒定結(jié)果組織塊培養(yǎng)第5天時(shí)有原代細(xì)胞從組織塊周圍爬出,第15天時(shí)細(xì)胞爬滿瓶底的2/3。HGFs呈長梭形或星形,可有數(shù)目不等、長短不一的胞質(zhì)突,呈典型的成纖維細(xì)胞樣形態(tài)。細(xì)胞呈排列條索狀、放射狀或漩渦狀。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示HGFs抗波形絲蛋白染色陽性,細(xì)胞質(zhì)中陽性染色顆粒呈棕黃色,分布均勻,細(xì)胞核清晰、無染色；抗角蛋白染色陰性,說明細(xì)胞為中胚層來源。結(jié)合取材部位,可以證明培養(yǎng)獲得的細(xì)胞為HGFs。HGFs生長曲線呈“S”形,即經(jīng)歷緩慢生長期、對(duì)數(shù)生長期、平臺(tái)期。2、HGFs在EN、 Ce、Ti三組材料試件周圍黏附情況HGFs在EN、 Ce、Ti組材料試件周圍生長與在Nc組中生長狀況相似,HGFs生長良好,細(xì)胞形態(tài)呈長梭形、星形,細(xì)胞排列呈條索狀、旋渦狀。3、HGFs的增殖情況EN、 Ce、 Ti三組吸光度值從第1天到第7天逐漸升高,與Nc組吸光度變化規(guī)律一致。各時(shí)段HGFs增殖情況：EN、 Ce、Ti組均低于Nc組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；EN、Ce、Ti組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；EN、Ce、Ti、Nc四組均顯大于Pc組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、三組材料細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)情況HGFs相對(duì)增殖率(RGR)：在各時(shí)段,EN、 Ce、Ti組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；在各時(shí)段,EN、 Ce、Ti三組均顯著大于Pc組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。毒性級(jí)別評(píng)估顯示：在各時(shí)段,EN、 Ce、Ti三組毒性級(jí)別均為1級(jí),1級(jí)為無毒性；Pc組毒性級(jí)別均為4級(jí),4級(jí)為重度毒性。5、HGFs COL-I、Fn基因mRNA表達(dá)的情況與Nc組比較,EN、Ce和Ti組COL-I、Fn基因相對(duì)表達(dá)量均下調(diào),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；EN、Ce、Ti組間COL-I、Fn基因mRNA相對(duì)表達(dá)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6、HGFs COL-I合成和分泌的情況COL-I含量：各時(shí)段,EN、Ce、Ti、Nc四組之間比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：ENAMIC、Ceramage的毒性評(píng)價(jià)與純鈦一致,均為1級(jí),即無細(xì)胞毒性,符合國家對(duì)生物材料臨床應(yīng)用的要求。ENAMIC、Ceramage、純鈦對(duì)HGFs增殖有一定的抑制,對(duì)HGFs表達(dá)COL-I和Fn基因mRNA有一定的下調(diào),但影響微弱；對(duì)HGFs合成分泌COL-I無明顯影響。
【關(guān)鍵詞】：HGFs ENAMIC Ceramage 鈦 生物相容性
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R783.1
【目錄】：

• 簡歷3-5
• 主要英文縮寫詞索引5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-27
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-36
• 討論36-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 綜述54-67
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 致謝67-68
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文68

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2 徐燕,袁萍,李頌,胡勇,王明麗;尼古丁和煙草浸提液對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞生長和貼附能力的影響[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2004年01期

3 趙永康,武志強(qiáng),艾紅軍,李述軍,鄭彩云;鈦合金對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

4 唐昊U，

本文編號(hào)：1061818