本文關鍵詞：脂肪乳對中心靜脈導管表面混合生物膜形成的影響

  更多相關文章： 中心靜脈導管相關性感染 脂肪乳注射液 混合生物膜 熒光原位雜交技術 生物膜形成相關基因

【摘要】：[目的]：探索脂肪乳對中心靜脈導管表面大腸桿菌-白色念珠菌混合生物膜(Mixed-Species Biofilm,MSB F)形成的影響。[方法]：1.構建中心靜脈導管表面白色念珠菌-大腸桿菌混合生物膜體外膜型：通過XTT、結晶紫、激光共聚焦顯微鏡、掃描電鏡技術動態(tài)監(jiān)測生物膜的形成過程；2.在1%、5%、10%、15%、20%脂肪乳濃度下對白色念珠菌-大腸桿菌混合生物膜進行培養(yǎng),使用XTT測定病原菌生長動力；結晶紫半定量測定生物膜形成厚度；活死菌染色后采用CLSM觀察生物膜內活、死菌分布情況；熒光原位雜交技術觀察生物膜內部兩種病原菌的分布、結構；掃描電鏡觀察生物膜表面病原菌的分布、結構。3.采用qRT-PCR方法檢測10%脂肪乳濃度對混合生物膜中大腸桿菌基因(flhDC、iha)白色念珠菌基因(HTA1、hwp1)的表達情況的影響。[結果]：1、XTT、結晶紫檢測發(fā)現陽性混合組生物膜生長動力及形成能力高于陰性混合組,均高于單菌種組。2、掃描電鏡結果顯示,隨著培養(yǎng)時間增加,PVC材料表面生物結構越加復雜,混合培養(yǎng)組表面形成團塊狀、層疊狀混合生物膜,可見大腸桿菌和白色念珠菌的孢子、菌絲呈重疊、混雜生長,白色念珠菌周圍(孢子、假菌絲、菌絲)粘附大量大腸桿菌,形成復雜網狀結構。與陰性混合組相比,陽性混合組生物膜結構更為復雜,病原菌相互關系更加密切。3、脂肪乳組混合生物膜生長動力及生物膜形成能力均高于對照組,10%脂肪乳濃度下混合生物膜形成情況最佳。脂肪乳濃度在5%及以上組掃描電鏡檢查發(fā)現,PVC材料表面,Ca孢子、假菌絲、菌絲、E.coil及脂肪乳成分相互重疊形成結構致密的生物膜。熒光原位雜交后行CLSM觀察發(fā)現,生物膜內部兩種病原菌也是相互重疊,混雜生長。4、培養(yǎng)24h生物膜熒光定量PCR結果：與對照組相比,脂肪乳組flhDC、iha、HTA1、hwp1基因明顯上調,分別為6.0567倍、22.1474倍、2.3914倍、1.7218倍。培養(yǎng)72h生物膜熒光定量PCR結果：與對照組相比,脂肪乳組flhDC、 iha、HTA1、hwp1基因均下調,分別為0.0633倍、0.0813倍、0.7911倍、0.0706倍。[結論]：1、大腸桿菌MC1000和白色念珠菌ATCC10231在菌液濃度為1×106CFU/mL共培養(yǎng)24h能在PVC材料表面形成E.Coil-Ca復雜混合生物膜。2、大腸桿菌粘附于白色念珠菌假菌絲、菌絲孢子表面,相互交叉、重疊形成結構復雜的E.Coil-Ca混合生物膜,其生物膜較單菌株生物膜結構復雜,厚度增加。3、脂肪乳可以促進E.coil-Ca混合生物膜形成,10%脂肪乳濃度效果最佳。脂肪乳成分同時也參與細菌生物膜的組成,使E.coil-Ca混合生物膜結構更加復雜,生物膜內部大腸桿菌粘附于白色念珠菌假菌絲、菌絲孢子表面,相互交叉、重疊混合生長。4、脂肪乳早期可能通過上調大腸桿菌flhDC、iha,白色念珠菌HTA1、hwp1表達而促進E.coil-Ca混合生物膜的形成。
【關鍵詞】：中心靜脈導管相關性感染 脂肪乳注射液 混合生物膜 熒光原位雜交技術 生物膜形成相關基因
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.5;R318.08
【目錄】：

• 主要中英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 引言12-14
• 第一部分：構建大腸桿菌-白色念珠苗體外生物膜模型14-35
• 材料與方法14-32
• 一、實驗材料14-16
• 二、實驗方法16-19
• 三、實驗結果19-32
• 討論32-34
• 結論34-35
• 第二部分：不同濃度脂肪乳對E. coi l-Ca生物膜形成的影響35-67
• —、實驗材料35-37
• 二、實驗方法37-44
• 三、統(tǒng)計學處理44-45
• 四、實驗結果45-64
• 討論64-67
• 結論67
• 本課題研究的創(chuàng)新性67
• 本課題進一步的研究問題67-68
• 參考文獻68-72
• 文獻綜述72-82
• 參考文獻77-82
• 在讀期間參與科研項目情況82
• 在讀期間發(fā)表文章情況82-83
• 致謝83

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