本文關(guān)鍵詞：再生絲素蛋白材料血管細胞共培養(yǎng)的研究

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【摘要】：多數(shù)心腦血管疾病例如血栓、動脈硬化、血管老化等需要進行血管替換,臨床上已有人體血管替代品,但是主要是大口徑血管替代。小口徑血管(內(nèi)徑6mm)還沒有理想的替代品應(yīng)用于臨床。前期我們已經(jīng)利用具有良好生物相容性的絲素蛋白和具有良好力學性能的絲素纖維為原料,制備具有內(nèi)、中、外膜三層結(jié)構(gòu)的小口徑仿生管狀支架,同時通過改變制備條件(冷凍溫度、絲素溶液濃度、交聯(lián)比例)對管狀支架結(jié)構(gòu)和力學性能進行了優(yōu)化。為了深入解析絲素蛋白管狀支架在替代缺損血管后組織重建及其機制,我們進行了再生絲素蛋白材料上血管細胞體外共培養(yǎng)的研究。本文中我們采用兩種再生絲素蛋白材料,即再生絲素蛋白膜和再生絲素蛋白管狀支架作為研究對象,研究其作為血管細胞(人臍靜脈內(nèi)皮細胞,ECs；人主動脈平滑肌細胞,SMCs;人主動脈成纖維細胞,HAFs)共培養(yǎng)載體時,材料以及細胞間作用對細胞形態(tài)、細胞增殖以及細胞功能因子表達的影響。首先進行了再生絲素蛋白膜上血管細胞共培養(yǎng)的研究,采用倒置熒光顯微鏡觀察和DNA含量分析法分別研究了細胞形態(tài)和細胞增殖,結(jié)果表明：絲素蛋白膜上血管細胞保持正常的形態(tài),培養(yǎng)期間單獨培養(yǎng)的血管細胞數(shù)量持續(xù)增加,同時共培養(yǎng)的血管細胞總數(shù)量也持續(xù)增加,且組間無顯著性差異。免疫熒光分析表明：共培養(yǎng)條件下,EC和SMC可以共同生長,EC在細胞數(shù)量上占優(yōu)勢；同樣的,共培養(yǎng)條件下,HAF和SMC可以共同生長,HAF在細胞數(shù)量上占優(yōu)勢；絲素蛋白膜對SMC表達α-SMA的表達有一定的抑制作用；與EC共培養(yǎng)可以促進SMC表達α-SMA:絲素蛋白膜對EC表達CD31的表達有一定的抑制作用。實時熒光定量PCR研究對絲素材料以及細胞間作用對細胞功能因子表達的影響,結(jié)果表明：絲素蛋白膜對血管平滑肌細胞功能因子α-SMA和SM-MHC的表達有一定的抑制作用,但與血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)能時卻能促進血管平滑肌細胞α-SMA和SM-MHC的表達；絲素蛋白膜及與血管平滑肌細胞共培養(yǎng)對血管內(nèi)皮細胞功能因子VEGF和CD31的表達均有促進作用；與血管成纖維細胞共培養(yǎng)時也能促進血管平滑肌細胞α-SMA和SM-MHC的表達。作為血管缺損血管替代的絲素蛋白管狀支架與絲素蛋白膜具有不同的組織結(jié)構(gòu),本文進一步開展了絲素蛋白管狀支架上血管細胞共培養(yǎng)的研究。研究結(jié)果表明：絲素蛋白管狀支架可以很好的支持血管內(nèi)皮細胞和血管平滑肌細胞的粘附、鋪展以及增殖；支架上共培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞和血管平滑肌細胞時,對血管平滑肌細胞的功能因子SM-MHC的表達有顯著促進作用,隨著培養(yǎng)時間的增加,α-SMA的表達也顯著高于單獨培養(yǎng)組；血管平滑肌細胞對血管內(nèi)皮細胞的功能因子VEGF和CD31的表達有促進作用。支架上共培養(yǎng)血管成纖維細胞和血管平滑肌細胞時,對血管平滑肌細胞的功能因子α-SMA和SM-MHC的表達也有促進作用。
【關(guān)鍵詞】：絲素蛋白 管狀支架 血管細胞 細胞因子
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R318.11
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-23
• 1.1 人工血管的研究背景10
• 1.2 人工血管的研究進展10-14
• 1.2.1 合成高分子材料人工血管11-12
• 1.2.2 天然材料人工血管12-13
• 1.2.3 復(fù)合材料人工血管13-14
• 1.3 絲素蛋白的應(yīng)用14-17
• 1.4 血管細胞17-20
• 1.4.1 血管結(jié)構(gòu)17
• 1.4.2 血管細胞及其相互作用17-18
• 1.4.3 血管細胞因子18-20
• 1.5 細胞共培養(yǎng)20-21
• 1.6 本文研究目的及研究內(nèi)容21-23
• 第二章 再生絲素蛋白膜血管細胞共培養(yǎng)研究23-51
• 2.1 實驗材料與方法23-31
• 2.1.1 實驗材料與試劑23-24
• 2.1.2 實驗儀器24
• 2.1.3 實驗方法24-31
• 2.2 結(jié)果與討論31-49
• 2.2.1 血管平滑肌細胞與血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)細胞形態(tài)與增殖31-33
• 2.2.2 血管平滑肌細胞與血管成纖維細胞共培養(yǎng)細胞形態(tài)及增殖33-36
• 2.2.3 細胞共培養(yǎng)免疫熒光分析36-40
• 2.2.4 細胞共培養(yǎng)實時熒光定量PCR分析40-49
• 2.3 本章小結(jié)49-51
• 第三章 絲素蛋白管狀支架血管細胞共培養(yǎng)研究51-60
• 3.1 實驗材料與方法51-54
• 3.1.1 實驗材料51
• 3.1.2 實驗儀器51-52
• 3.1.3 實驗方法52-54
• 3.2 結(jié)果與討論54-59
• 3.2.1 絲素蛋白支架上共培養(yǎng)細胞形態(tài)54
• 3.2.2 細胞共培養(yǎng)實時熒光定量PCR分析54-59
• 3.3 本章小結(jié)59-60
• 第四章 結(jié)語60-62
• 4.1 全文結(jié)論60-61
• 4.1.1 再生絲素蛋白膜上血管細胞共培養(yǎng)研究60-61
• 4.1.2 再生絲素蛋白管狀支架上血管細胞共培養(yǎng)研究61
• 4.2 本文的不足之處61
• 4.3 今后的工作61-62
• 參考文獻62-69
• 攻讀學位期間本人公開發(fā)表的論文69-70
• 致謝70

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