本文關(guān)鍵詞：再生絲素蛋白材料血管細(xì)胞共培養(yǎng)的研究

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【摘要】：多數(shù)心腦血管疾病例如血栓、動脈硬化、血管老化等需要進(jìn)行血管替換,臨床上已有人體血管替代品,但是主要是大口徑血管替代。小口徑血管(內(nèi)徑6mm)還沒有理想的替代品應(yīng)用于臨床。前期我們已經(jīng)利用具有良好生物相容性的絲素蛋白和具有良好力學(xué)性能的絲素纖維為原料,制備具有內(nèi)、中、外膜三層結(jié)構(gòu)的小口徑仿生管狀支架,同時通過改變制備條件(冷凍溫度、絲素溶液濃度、交聯(lián)比例)對管狀支架結(jié)構(gòu)和力學(xué)性能進(jìn)行了優(yōu)化。為了深入解析絲素蛋白管狀支架在替代缺損血管后組織重建及其機(jī)制,我們進(jìn)行了再生絲素蛋白材料上血管細(xì)胞體外共培養(yǎng)的研究。本文中我們采用兩種再生絲素蛋白材料,即再生絲素蛋白膜和再生絲素蛋白管狀支架作為研究對象,研究其作為血管細(xì)胞(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,ECs；人主動脈平滑肌細(xì)胞,SMCs;人主動脈成纖維細(xì)胞,HAFs)共培養(yǎng)載體時,材料以及細(xì)胞間作用對細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞增殖以及細(xì)胞功能因子表達(dá)的影響。首先進(jìn)行了再生絲素蛋白膜上血管細(xì)胞共培養(yǎng)的研究,采用倒置熒光顯微鏡觀察和DNA含量分析法分別研究了細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞增殖,結(jié)果表明：絲素蛋白膜上血管細(xì)胞保持正常的形態(tài),培養(yǎng)期間單獨(dú)培養(yǎng)的血管細(xì)胞數(shù)量持續(xù)增加,同時共培養(yǎng)的血管細(xì)胞總數(shù)量也持續(xù)增加,且組間無顯著性差異。免疫熒光分析表明：共培養(yǎng)條件下,EC和SMC可以共同生長,EC在細(xì)胞數(shù)量上占優(yōu)勢；同樣的,共培養(yǎng)條件下,HAF和SMC可以共同生長,HAF在細(xì)胞數(shù)量上占優(yōu)勢；絲素蛋白膜對SMC表達(dá)α-SMA的表達(dá)有一定的抑制作用；與EC共培養(yǎng)可以促進(jìn)SMC表達(dá)α-SMA:絲素蛋白膜對EC表達(dá)CD31的表達(dá)有一定的抑制作用。實(shí)時熒光定量PCR研究對絲素材料以及細(xì)胞間作用對細(xì)胞功能因子表達(dá)的影響,結(jié)果表明：絲素蛋白膜對血管平滑肌細(xì)胞功能因子α-SMA和SM-MHC的表達(dá)有一定的抑制作用,但與血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)能時卻能促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞α-SMA和SM-MHC的表達(dá)；絲素蛋白膜及與血管平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能因子VEGF和CD31的表達(dá)均有促進(jìn)作用；與血管成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時也能促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞α-SMA和SM-MHC的表達(dá)。作為血管缺損血管替代的絲素蛋白管狀支架與絲素蛋白膜具有不同的組織結(jié)構(gòu),本文進(jìn)一步開展了絲素蛋白管狀支架上血管細(xì)胞共培養(yǎng)的研究。研究結(jié)果表明：絲素蛋白管狀支架可以很好的支持血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的粘附、鋪展以及增殖；支架上共培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞時,對血管平滑肌細(xì)胞的功能因子SM-MHC的表達(dá)有顯著促進(jìn)作用,隨著培養(yǎng)時間的增加,α-SMA的表達(dá)也顯著高于單獨(dú)培養(yǎng)組；血管平滑肌細(xì)胞對血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能因子VEGF和CD31的表達(dá)有促進(jìn)作用。支架上共培養(yǎng)血管成纖維細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞時,對血管平滑肌細(xì)胞的功能因子α-SMA和SM-MHC的表達(dá)也有促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：絲素蛋白 管狀支架 血管細(xì)胞 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R318.11
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-23
• 1.1 人工血管的研究背景10
• 1.2 人工血管的研究進(jìn)展10-14
• 1.2.1 合成高分子材料人工血管11-12
• 1.2.2 天然材料人工血管12-13
• 1.2.3 復(fù)合材料人工血管13-14
• 1.3 絲素蛋白的應(yīng)用14-17
• 1.4 血管細(xì)胞17-20
• 1.4.1 血管結(jié)構(gòu)17
• 1.4.2 血管細(xì)胞及其相互作用17-18
• 1.4.3 血管細(xì)胞因子18-20
• 1.5 細(xì)胞共培養(yǎng)20-21
• 1.6 本文研究目的及研究內(nèi)容21-23
• 第二章 再生絲素蛋白膜血管細(xì)胞共培養(yǎng)研究23-51
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法23-31
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑23-24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器24
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法24-31
• 2.2 結(jié)果與討論31-49
• 2.2.1 血管平滑肌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)與增殖31-33
• 2.2.2 血管平滑肌細(xì)胞與血管成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)及增殖33-36
• 2.2.3 細(xì)胞共培養(yǎng)免疫熒光分析36-40
• 2.2.4 細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)時熒光定量PCR分析40-49
• 2.3 本章小結(jié)49-51
• 第三章 絲素蛋白管狀支架血管細(xì)胞共培養(yǎng)研究51-60
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法51-54
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料51
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器51-52
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法52-54
• 3.2 結(jié)果與討論54-59
• 3.2.1 絲素蛋白支架上共培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)54
• 3.2.2 細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)時熒光定量PCR分析54-59
• 3.3 本章小結(jié)59-60
• 第四章 結(jié)語60-62
• 4.1 全文結(jié)論60-61
• 4.1.1 再生絲素蛋白膜上血管細(xì)胞共培養(yǎng)研究60-61
• 4.1.2 再生絲素蛋白管狀支架上血管細(xì)胞共培養(yǎng)研究61
• 4.2 本文的不足之處61
• 4.3 今后的工作61-62
• 參考文獻(xiàn)62-69
• 攻讀學(xué)位期間本人公開發(fā)表的論文69-70
• 致謝70

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