發(fā)布時間：2017-10-15 05:19

  本文關(guān)鍵詞：可注射性葡聚糖—明膠支架與生物因子復(fù)合的研究

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【摘要】：第一部分：可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架的實(shí)驗(yàn)研究 目的:檢測可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架與傳代分離獲取的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞的相容性。 方法：消化滑膜組織,傳代分離以獲取滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞,通過氧化葡聚糖,氨基化明膠,配制不同比例的葡聚糖-明膠復(fù)合支架,并檢測支架的相關(guān)參數(shù)：凝膠時間、流變性能、溶脹性能及降解性能；接種滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞于葡聚糖-明膠復(fù)合支架上,于第3d和7d進(jìn)行WST-1分析。 結(jié)果：傳代分離獲取的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞呈梭型；葡聚糖-明膠復(fù)合支架孔壁薄,孔徑范圍為50-200u m,且相鄰孔隙間貫通率高；當(dāng)葡聚糖與明膠比為5：5時,水凝膠成膠最快；流變儀檢測在95s時葡聚糖-明膠體系儲能模量和損耗模量相等,體系出現(xiàn)凝膠點(diǎn),發(fā)生從液態(tài)向固態(tài)的轉(zhuǎn)變,表明可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架可通過注射快速成膠；SMSCs在普通細(xì)胞培養(yǎng)組(對照組)、7：3、6：4、5：5、4：6和3：7配比的可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架組均可良好生長,WST-1檢測發(fā)現(xiàn)SMSCs在可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架上隨明膠含量及培養(yǎng)時間的增加增殖更好,差異有顯著性,P0.05。 結(jié)論：可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架生物相容性良好,是軟骨組織工程中一種良好的材料支架。 第二部分：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞在五種不同趨化因素作用下遷移的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察血清、TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic對兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞遷移能力的影響。 方法：選取含濃度分別是0.1%,0.5%,1.0%,2.00%,5.0%,10.0%,20.0%的血清以及含濃度是50ng/ml的TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic的低糖DMEM作用于兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞,通過Transwell小室檢測其遷移能力。 結(jié)果：血清、TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic均可趨化兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞遷移,血清濃度為5.0%時趨化遷移作用較其他濃度組明顯,四種生物因子中PDGF-AB的趨化遷移作用較TGF-β3、BMP-2、FGF-basic明顯。 結(jié)論：兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞可在TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic作用下趨化遷移,其中PDGF-AB的趨化作用最明顯,可用于促進(jìn)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞遷移歸巢,進(jìn)行軟骨原位再生的修復(fù)研究。 第三部分葡聚糖-明膠支架復(fù)合生物因子成軟骨的實(shí)驗(yàn)研究 目的：研究和比較SMSCs與復(fù)合TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic的葡聚糖-明膠支架在裸鼠體內(nèi)的成軟骨能力。 方法：采用3只裸鼠6周齡,每只裸鼠皮下注射分五組：TGF-β3組：TGF-β3復(fù)合SMSCs/葡聚糖-明膠支架；PDGF-AB組：PDGF-AB復(fù)合SMSCs/葡聚糖-明膠支架：BMP-2組：BMP-2復(fù)合SMSCs/葡聚糖-明膠支架：FGF-basic組：FGF-basic復(fù)合SMSCs/葡聚糖-明膠支架；對照組：SMSCs/葡聚糖-明膠支架。術(shù)后8周處死裸鼠,取出皮下支架組織標(biāo)本,分別作HE染色、甲苯胺藍(lán)染色,組織學(xué)觀察成軟骨的情況。 結(jié)果：新生軟骨大體標(biāo)本呈乳白色類似天然軟骨,無紅色浸潤,質(zhì)地較強(qiáng)有彈性；HE染色和甲苯胺藍(lán)染色顯示TGF-β3組、BMP-2組、FGF-basic組細(xì)胞分布均勻,大量軟骨樣細(xì)胞外基質(zhì)形成,對照組和PDGF-AB組則均呈陰性。 結(jié)論：葡聚糖-明膠支架注射入裸鼠體內(nèi)后呈現(xiàn)了良好的生物相容性；生物因子TGF-β3、BMP-2、FGF-basic比PDGF-AB更能促進(jìn)體內(nèi)軟骨再生；PDGF-AB和無生物因子在體內(nèi)成軟骨能力上無明顯差異。
【關(guān)鍵詞】：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 葡聚糖-明膠復(fù)合支架 細(xì)胞/支架相容性 組織工程 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 生物因子 趨化 遷移 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 生物因子 成軟骨
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08;R687
【目錄】：

• 目錄3-5
• 英文縮略語5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 第一部分：可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架的實(shí)驗(yàn)研究15-33
• 第一篇：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取和培養(yǎng)15-20
• 摘要15
• 1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器15-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-18
• 3 結(jié)果18-19
• 4 討論19-20
• 5 小結(jié)20
• 第二篇：可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架的構(gòu)建及其理化特性的實(shí)驗(yàn)研究20-27
• 摘要20-21
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-26
• 4 討論26-27
• 5 小結(jié)27
• 第三篇：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞在可注射性新型葡聚糖.明膠復(fù)合支架上體外共培養(yǎng)及其生物學(xué)活性的研究27-33
• 摘要28
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑28-29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29-30
• 3 結(jié)果30-32
• 4 討論32
• 5 小結(jié)32-33
• 第二部分：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞在五種不同趨化因素作用下遷移的實(shí)驗(yàn)研究33-42
• 第四篇：血清對滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究33-37
• 摘要33
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑33-34
• 2 實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 3 結(jié)果35-36
• 4 討論36-37
• 5 小結(jié)37
• 第五篇：不同生物因子對滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究37-42
• 摘要37
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑37-38
• 2 實(shí)驗(yàn)方法38-39
• 3 結(jié)果39-40
• 4 討論40-41
• 5 小結(jié)41-42
• 第三部分：葡聚糖-明膠支架復(fù)合生物因子成軟骨的實(shí)驗(yàn)研究42-48
• 第六篇：葡聚糖-明膠支架復(fù)合生物因子成軟骨的實(shí)驗(yàn)研究42-48
• 摘要42
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑42-43
• 2 實(shí)驗(yàn)方法43-45
• 3 結(jié)果45-47
• 4 討論47
• 5 小結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 全文總結(jié)53-54
• 附錄一 綜述54-66
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 致謝66-67
• 研究生階段發(fā)表的文章67-68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 潘建鋒;郭常安;閻作勤;;關(guān)節(jié)軟骨原位再生研究進(jìn)展[J];國際骨科學(xué)雜志;2012年01期

2 莫湘濤;鄧力;李秀群;解慧琪;羅靜聰;郭尚春;楊志明;;軟骨細(xì)胞-海藻酸鈉水凝膠-SIS復(fù)合體修復(fù)全層關(guān)節(jié)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2009年08期

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本文編號：1035291