發(fā)布時間：2017-10-12 01:36

  本文關(guān)鍵詞：miR-210促進人牙周膜干細胞血管向分化作用的初步研究

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【摘要】：目的構(gòu)建miR-210的慢病毒載體(Lenti-miR-210-Luciferase),轉(zhuǎn)染人牙周膜干細胞(h PDLSCs)后,檢測成血管因子低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在h PDLSCs的表達。方法分離培養(yǎng)h PDLSCs,并根據(jù)人miR-210基因(NC_000011.9)序列行引物設(shè)計及序列片段的PCR擴增,將目的基因PCR產(chǎn)物連接到載體p LVX-EGFP-3FLAG-EF1-Luc上。將目的基因PCR產(chǎn)物和目的載體用EcoRⅠ和XbaⅠ分別進行酶切,對質(zhì)粒進行鑒定。采用LR重組系統(tǒng)構(gòu)建慢病毒載體Lenti-miR-210-Luciferase(Lenti-Lac Z-Luciferase為對照組)。轉(zhuǎn)染h PDLSCs后,通過q PCR和免疫組化法檢測HIF-1α及VEGF的表達。結(jié)果通過對構(gòu)建質(zhì)�？寺∵M行測序及酶切,證實Lenti-miR-210-Luciferase構(gòu)建成功。Lenti-miR-210-Luciferase轉(zhuǎn)染h PDLSCs,0、1、4、7、14 d后行q PCR檢測,結(jié)果表明第4天HIF-1α和VEGF明顯過表達,且持續(xù)到第14天。免疫組化結(jié)果顯示,miR-210轉(zhuǎn)染h PDLSCs后,抗HIF-1α和抗VEGF染色呈陽性,對照組呈陰性。結(jié)論成功構(gòu)建了慢病毒載體Lenti-miR-210-Luciferase,并且miR-210具有促進h PDLSCs血管向分化的作用。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔頜面外科;
【關(guān)鍵詞】： 牙周膜干細胞 miR- 低氧誘導(dǎo)因子-α 血管內(nèi)皮生長因子 慢病毒載體
【基金】：安徽省科技廳重點課題(編號:10021303003)
【分類號】：R318.08
【正文快照】： 2015-05-08接收microRNAs(miRNAs)是一種內(nèi)源性非編碼的單鏈小分子RNA,長度為20~22個核苷酸,到目前為止,人類基因組中有超過1 400個miRNA序列(1424 miRbase:17.0)[1]。參與血管生成的內(nèi)皮miR-NAs,也被稱為angiomiRs[2],其中miR-210在細胞低氧時高表達,在組織缺血時,miR-210對

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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10 李春明;舒適;尤艷利;李莎莎;周爽;;microRNAs與血管新生最新研究進展[J];遼寧中醫(yī)雜志;2014年12期

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1 鄒凱杰;高海s，

本文編號：1015933