miR-210促進(jìn)人牙周膜干細(xì)胞血管向分化作用的初步研究
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【摘要】:目的構(gòu)建miR-210的慢病毒載體(Lenti-miR-210-Luciferase),轉(zhuǎn)染人牙周膜干細(xì)胞(h PDLSCs)后,檢測(cè)成血管因子低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在h PDLSCs的表達(dá)。方法分離培養(yǎng)h PDLSCs,并根據(jù)人miR-210基因(NC_000011.9)序列行引物設(shè)計(jì)及序列片段的PCR擴(kuò)增,將目的基因PCR產(chǎn)物連接到載體p LVX-EGFP-3FLAG-EF1-Luc上。將目的基因PCR產(chǎn)物和目的載體用EcoRⅠ和XbaⅠ分別進(jìn)行酶切,對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行鑒定。采用LR重組系統(tǒng)構(gòu)建慢病毒載體Lenti-miR-210-Luciferase(Lenti-Lac Z-Luciferase為對(duì)照組)。轉(zhuǎn)染h PDLSCs后,通過(guò)q PCR和免疫組化法檢測(cè)HIF-1α及VEGF的表達(dá)。結(jié)果通過(guò)對(duì)構(gòu)建質(zhì)?寺∵M(jìn)行測(cè)序及酶切,證實(shí)Lenti-miR-210-Luciferase構(gòu)建成功。Lenti-miR-210-Luciferase轉(zhuǎn)染h PDLSCs,0、1、4、7、14 d后行q PCR檢測(cè),結(jié)果表明第4天HIF-1α和VEGF明顯過(guò)表達(dá),且持續(xù)到第14天。免疫組化結(jié)果顯示,miR-210轉(zhuǎn)染h PDLSCs后,抗HIF-1α和抗VEGF染色呈陽(yáng)性,對(duì)照組呈陰性。結(jié)論成功構(gòu)建了慢病毒載體Lenti-miR-210-Luciferase,并且miR-210具有促進(jìn)h PDLSCs血管向分化的作用。
【作者單位】: 安徽醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔頜面外科;
【關(guān)鍵詞】: 牙周膜干細(xì)胞 miR- 低氧誘導(dǎo)因子-α 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 慢病毒載體
【基金】:安徽省科技廳重點(diǎn)課題(編號(hào):10021303003)
【分類號(hào)】:R318.08
【正文快照】: 2015-05-08接收microRNAs(miRNAs)是一種內(nèi)源性非編碼的單鏈小分子RNA,長(zhǎng)度為20~22個(gè)核苷酸,到目前為止,人類基因組中有超過(guò)1 400個(gè)miRNA序列(1424 miRbase:17.0)[1]。參與血管生成的內(nèi)皮miR-NAs,也被稱為angiomiRs[2],其中miR-210在細(xì)胞低氧時(shí)高表達(dá),在組織缺血時(shí),miR-210對(duì)
【共引文獻(xiàn)】
中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
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10 李春明;舒適;尤艷利;李莎莎;周爽;;microRNAs與血管新生最新研究進(jìn)展[J];遼寧中醫(yī)雜志;2014年12期
中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條
1 鄒凱杰;高海s,
本文編號(hào):1015933
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