本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)EGFR在人類黑色素瘤腦轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞系H1中的影響

  更多相關(guān)文章： 表皮生長因子受體 表皮生長因子 轉(zhuǎn)化生長因子α 黑色素瘤

【摘要】：背景與目的黑色素瘤是一種具有高度侵襲及轉(zhuǎn)移性的惡性腫瘤,它盡管只占據(jù)了皮膚腫瘤中的4%,卻導(dǎo)致了皮膚腫瘤相關(guān)疾病死亡率中的80%。在過去的60年中,黑色素瘤的發(fā)生率提高了近700%,而死亡率也提高了165%。現(xiàn)在,黑色素瘤的首選治療方案仍然是手術(shù)切除,但是治愈率卻很大程度上取決于其是否能早期診斷。黑色素瘤轉(zhuǎn)移迅速,由于預(yù)后因素復(fù)雜且對標(biāo)準(zhǔn)化療的反應(yīng)率較低,轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的存活時間中位數(shù)低于一年。雖然全世界不少學(xué)者致力于黑素瘤的研究,但是至今為止黑色素瘤發(fā)展及轉(zhuǎn)移的機(jī)制仍未闡述清楚。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)是170KD大小具有酪氨酸激酶活性的膜受體,可被表皮樣生長因子如表皮生長因子(EGF)和轉(zhuǎn)化生長因子α (TGF-α)等激活,同ErbB2 (HER2 or Neu), ErbB3 (HER3)和ErbB4 (HER4)一樣隸屬于ErbB受體家族。EGFR被證實與很多人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展及不良預(yù)后有關(guān),同樣其也參與了黑色素瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移。我們的研究目的是探索EGFR在黑色素瘤轉(zhuǎn)移過程中的作用,從而為黑色素瘤的靶向治療提供可能的理論依據(jù)。材料與方法選用本實驗室已經(jīng)建立的人黑色素瘤腦轉(zhuǎn)移瘤的細(xì)胞系(H1),病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染野生型EGFR使其呈EGFR過表達(dá)狀態(tài)細(xì)胞(HIEGFRwt),同時對照組轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白GFP (H1GFP)。觀察不同濃度的表皮生長因子(EGF)以及轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-α)刺激下的創(chuàng)傷愈合實驗結(jié)果,集落形成實驗來觀察EGFR對細(xì)胞獨立生存能力和集落形成能力的影響,免疫印跡實驗(western blot)探索不同濃度的EGF以及TGF-a刺激下EGFR激活的信號通路。將H1EGFRwt細(xì)胞和H1GFP細(xì)胞注入免疫缺陷小鼠心臟,采用磁共振成像(MRI)方法觀察腫瘤形成和轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果創(chuàng)傷愈合實驗中過表達(dá)的EGFR在EGF和TGF-a的刺激下均提高了H1細(xì)胞的遷移能力,與對照組相比愈合速度明顯增快(P0.05)。集落形成實驗證實EGFR過表達(dá)H1細(xì)胞的獨立生存以及集落形成能力與對照組相比明顯提高。Western blot結(jié)果顯示EGFR可在EGF的刺激下激活下游信號磷酸化磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C(pPLCg)、磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子5 (pSTAT5)、磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3 (pSTAT3)、磷酸化絲/蘇氨酸蛋白激酶(p-AKT) (Ser473)和磷酸化有絲裂原活化蛋白激酶(pMAPK),然而當(dāng)予以相同濃度TGF-a刺激時,以上信號通路均不能激活。MRI結(jié)果顯示,H1EGFRwt細(xì)胞植入后,只可以在小鼠腦部檢測到腫瘤信號,其他器官均為發(fā)現(xiàn),且與對照組相比無明顯差異。結(jié)論過表達(dá)的EGFR在人黑色素瘤轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞系H1細(xì)胞的轉(zhuǎn)移機(jī)制中提高了細(xì)胞的獨立生存和集落形成能力,在EGF和TGF-a的刺激下可明顯提高H1EGFRwt的遷移能力。此外,在EGF的刺激下可激活pPLC γ、pSTAT 5、pSTAT 3、pAKT和pMAPK等下游信號,但我們無法解釋TGF-a的刺激下所測信號均不能激活的原因。同樣,對于實驗性動物實驗所得數(shù)據(jù),我們認(rèn)為仍需更多的體內(nèi)實驗以及可動態(tài)監(jiān)測腫瘤生長轉(zhuǎn)移情況的PET-CT檢測結(jié)果才可進(jìn)一步得出結(jié)論。綜上所述,EGFR對黑色素瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制有一定的促進(jìn)意義,但仍需要更多的體內(nèi)體外實驗研究,EGFR有可能成為黑色素瘤轉(zhuǎn)移治療中的靶向目標(biāo),我們的研究可能為此也提供了一定的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：表皮生長因子受體 表皮生長因子 轉(zhuǎn)化生長因子α 黑色素瘤
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 符號說明13-14
• 前言14-17
• 材料和方法17-24
• 1.1 材料17
• 1.1.1 細(xì)胞17
• 1.1.2 試劑17
• 1.1.3 抗體17
• 1.2 實驗方法17-24
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)分析H1細(xì)胞系中EGFR的表達(dá)18
• 1.2.3 EGFR的過表達(dá)與分選18-19
• 1.2.4 創(chuàng)傷愈合實驗19-20
• 1.2.5 集落形成實驗20-21
• 1.2.6 免疫印跡實驗(Western blot)21-23
• 1.2.7 磁共振檢測23-24
• 結(jié)果24-33
• 1.1 H1細(xì)胞系的EGFR表達(dá)24-25
• 1.2 創(chuàng)傷愈合實驗結(jié)果25-30
• 1.3 集落形成實驗結(jié)果30
• 1.4 Western blot結(jié)果30-31
• 1.5 MRI檢測結(jié)果31-33
• 討論33-43
• 1.1 EGFR在黑色素瘤中的表達(dá)與意義33-34
• 1.2 EGFR與黑色素瘤轉(zhuǎn)移間的關(guān)系34-36
• 1.3 EGFR激活的信號通路36-37
• 1.4 EGF和TGF-α37-40
• 1.4.1 TGF-α及其功能37-39
• 1.4.2 EGF及其功能39-40
• 1.4.3 TGF-α與EGF40
• 1.5 動物實驗40-41
• 1.6 EGFR相關(guān)的靶向治療41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-57
• 致謝57-58
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄58-59
• 附件59

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4 實習(xí)生 易立;黑色素瘤,是否無藥可治？[N];科技日報;2011年

5 記者 張e，

本文編號：997678