本文關(guān)鍵詞：念珠菌與黑色素相關(guān)性的初步研究

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【摘要】：真菌一詞來源于拉丁文的"sfungus",為蘑菇的意思。真菌在自然界中廣泛存在,據(jù)估計(jì)大約有150萬種,但是大多數(shù)真菌對人類有益,只有少數(shù)真菌對人類有害。由真菌引起的人類、動物疾病,稱為真菌病。真菌可通過感染、致敏等途徑導(dǎo)致人類和動物疾病。臨床上將真菌感染分為淺部真菌感染和深部真菌感染。淺部真菌感染為僅侵犯人體皮膚的角質(zhì)蛋白組織等一些淺部組織；深部真菌感染是指致病性真菌侵犯皮下組織、黏膜和內(nèi)臟所引起的真菌感染性疾病。深部真菌感染的發(fā)生取決于病原體、宿主和環(huán)境多種因素的相互作用。近幾十年來,隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展,糖皮質(zhì)激素、高效廣譜抗菌藥物、免疫抑制劑的大量應(yīng)用,干細(xì)胞移植、腫瘤的化療和其他介入性治療的普遍開展,以及艾滋病患者不斷的增加,由真菌引起的感染日趨增加,特別是呼吸系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)真菌感染明顯增多,成為院內(nèi)真菌感染增加的重要原因之一。引起深部感染的真菌主要包括：念珠菌屬、曲霉屬和隱球菌屬等,其中念珠菌屬占首位。念珠菌感染曾是白血病、接受干細(xì)胞移植或?qū)嶓w組織移植患者的主要死因,現(xiàn)已成為ICU病人的主要感染源。在念珠菌屬中最常見的致病菌是白念珠菌(C. albicans),它在深部真菌感染中常占據(jù)第一位。但是近年來,念珠菌感染的類型同樣也發(fā)生了很大的變化。國內(nèi)外資料都顯示雖然念珠菌感染中白念珠菌仍然占第一位,但是白念珠菌感染的地位呈逐漸下降趨勢,非白念珠菌的感染呈逐年上升趨勢。深部念珠菌感染多為院內(nèi)獲得性感染,而且多數(shù)為重癥病人,一旦發(fā)生了全身感染,病死率非常高。深部念珠菌感染早期診斷非常困難,即使診斷明確,對系統(tǒng)性感染的治療也非常困難。所以,了解真菌感染的流行病學(xué)知識,采取有效的預(yù)防及控制措施,對臨床醫(yī)生來說尤為重要。故為了解我院念珠菌感染的發(fā)病情況以及菌種分布特點(diǎn)等,本實(shí)驗(yàn)收集本院2014年1月～2014年10月臨床送檢標(biāo)本中念珠菌陽性標(biāo)本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,探討本院深部念珠菌病流行情況,希望對本院深部念珠菌病流行病學(xué)特點(diǎn)有一定的了解。念珠菌的研究一直為熱點(diǎn),特別是關(guān)于念珠菌的毒力問題。對念珠菌毒力因子的研究一般主要集中在：酵母相和菌絲相之間的轉(zhuǎn)換,粘附和侵襲,生物被膜的形成,接觸傳感和向觸性,水解酶的分泌,熱休克蛋白,表型轉(zhuǎn)換等。關(guān)于念珠菌的毒力和黑色素之間關(guān)系的研究甚少。國外有研究發(fā)現(xiàn)念珠菌的毒力可能和黑色素有關(guān)。但其具體機(jī)制和相關(guān)因素尚不明確。許多病原真菌致病性與黑色素緊密相關(guān),如：煙曲霉、新生隱球菌、馬拉色菌、著色芽生菌等。黑色素是許多真菌在自然環(huán)境中生存的必需因子；它是許多真菌致病過程中的重要毒力因子,可以抵抗防御素、抗微生物肽和吞噬細(xì)胞的吞噬作用。同時(shí)黑色素可以保護(hù)生物體不受輻射傷害,可以吸收紫外線、抗機(jī)體氧化等。黑色素能抵御日光、紫外線的輻射損傷,可以對抗真菌捕食者產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶,有抗電離輻射作用。由于國外關(guān)于念珠菌和黑色素關(guān)系的研究均局限于白念珠菌,且只用一種產(chǎn)黑培養(yǎng)基研究白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株,未對非白念珠菌和臨床分離念珠菌菌株進(jìn)行研究。關(guān)于念珠菌和黑色素的關(guān)系國內(nèi)尚未見相關(guān)研究。故本實(shí)驗(yàn)對收集分離的臨床念珠菌菌株,在三種產(chǎn)黑培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),并通過觀察培養(yǎng)基顏色變化、菌株超微結(jié)構(gòu)和電子自旋共振波譜等方法探討臨床分離的念珠菌是否能產(chǎn)生黑色素。1院內(nèi)深部念珠菌感染標(biāo)本的臨床分析1.1目的了解我院念珠菌感染的發(fā)病情況以及菌種分布、標(biāo)本種類、疾病種類和科室分布特點(diǎn)等,探討本院念珠菌感染的流行病學(xué)因素,對院內(nèi)念珠菌感染的診斷和預(yù)防進(jìn)行探討。1.2對象和方法收集本院2014年1月～2014年10月的臨床送檢標(biāo)本中念珠菌陽性標(biāo)本371例,分析其菌種分類、標(biāo)本種類、疾病種類和科室分布等。1.3結(jié)果(1)371株深部念珠菌感染標(biāo)本菌種分布371株深部念珠菌感染標(biāo)本分布和構(gòu)成比以白念珠菌175株最多(47.17%)、熱帶念珠菌73株(19.68%)、光滑念珠菌48株(12.94%)、克柔念珠菌28株(7.55%)、近平滑念珠菌26株(7.01%)、其他念珠菌21株(5.66%)。其中非白念珠菌所占比例為52.83%,高于白念珠菌的比例47.17%。(2)371株深部念珠菌感染標(biāo)本性別分布371株深部念珠菌感染標(biāo)本中男性214例(57.68%)；女性156例(42.05%),性別間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.851,P=-0.4340.05)。(3)371株深部念珠菌感染標(biāo)本來源及分布371株深部念珠菌感染標(biāo)本來源分布以痰最多145例(39.08%),其次為中段尿71例(19.14%)、血液為62例(16.71%)、分泌物48例(12.94%)、其他45例(12.13%)。(4)371株深部念珠菌感染標(biāo)本人群分布371株深部念珠菌感染標(biāo)本在不同年齡人群中分布特點(diǎn),其中年齡20歲12例(3.23%),20～40歲64例(17.25%),40～60歲103例(27.76%),60歲的192例(51.75%)。以20歲年齡段最少,為12例(3.23%)；60歲年齡段最多,192例(51.75%)。(5)371株深部念珠菌感染標(biāo)本科室分布371株深部念珠菌感染標(biāo)本科室分布以呼吸內(nèi)科最多114例(30.73%)；其次普外科103例(27.76%)、腫瘤科31例(8.36%)、神經(jīng)內(nèi)科19例(5.12%)、腎臟科17例(4.58%)、婦產(chǎn)科17例(4.58%)、血液科13例(3.50%)、消化內(nèi)科12例(3.23%)、其他45例(12.13%)。(6)371株深部念珠菌感染患者相關(guān)基礎(chǔ)疾病分布371株深部真菌感染患者相關(guān)基礎(chǔ)疾病分布以呼吸系統(tǒng)疾病最多100例(26.95%)；其次為消化系統(tǒng)疾病93例(25.07%)、泌尿系統(tǒng)疾病33例(8.89%)、外傷和術(shù)后32例(8.63%)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病29例(7.82%)、血液系統(tǒng)疾病17例(4.58%)、循環(huán)系統(tǒng)疾病15例(4.04%)、其他疾病52例(14.02%)。1.4結(jié)論(1)我院念珠菌感染中白念珠菌仍然是主要的病原真菌,但是非白念珠菌的總體比率已經(jīng)超過了白念珠菌。(2)臨床念珠菌感染標(biāo)本中男性高于女性,但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)念珠菌感染中標(biāo)本來源最主要的是痰,其次為中段尿,血液感染占第三位。血液感染中非白念珠菌所占比例為74.19%。(4)念珠菌感染患者主要分布在呼吸內(nèi)科,其次為普外科；深部念珠菌感染患者基礎(chǔ)疾病最常見的為呼吸系統(tǒng)疾病。(5)深部念珠菌感染的主要危險(xiǎn)因素是：老年人,體弱多病,長期使用廣譜抗生素、免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素,惡性腫瘤以及外科手術(shù)等。2念珠菌與黑色素相關(guān)性的初步研究2.1目的對第一部份收集分離的臨床念珠菌菌株,在三種產(chǎn)黑培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),并通過觀察培養(yǎng)基顏色變化、菌株超微結(jié)構(gòu)和電子自旋共振波譜等方法探討臨床分離的念珠菌是否能產(chǎn)生黑色素。2.2對象和方法對象：從南京軍區(qū)南京總院2014年1月～2014年10月的臨床送檢標(biāo)本中分離出371株念珠菌；新生隱球菌標(biāo)準(zhǔn)株H99和白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株SC5314(由中國衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)微生物菌(毒)種保藏管理委員會醫(yī)學(xué)真菌中心饋贈)。方法：(1)在三種產(chǎn)黑培養(yǎng)基上培養(yǎng)臨床送檢標(biāo)本中分離到的念珠菌菌株371株、白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株SC5314和新生隱球菌標(biāo)準(zhǔn)株H99。分別于第3d、5d、7d、10d觀察培養(yǎng)基及菌落顏色變化,并拍照。(2)對新生隱球菌、變色最明顯的SC5314和臨床念珠菌做透射電鏡,電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)(3)對變色最明顯的SC5314測其電子自旋共振波譜信號2.3結(jié)果(1)培養(yǎng)基上菌落顏色變化結(jié)果新生隱球菌在三種培養(yǎng)基上在3d左右時(shí)就開始變?yōu)樽睾稚?第5d、7d時(shí)變?yōu)楹谏�；SC5314在第5d時(shí),在多巴和添加了多巴的基本培養(yǎng)基上變棕褐色,第7d時(shí),多巴培養(yǎng)基上變黑色,基本培養(yǎng)基上為棕褐色；371株臨床念珠菌中,有12株在第10d時(shí),在多巴培養(yǎng)基上變棕褐色(陰道4株、口腔3株、中段尿3株、血液1株、引流液1株)；15株在基本培養(yǎng)基上變棕褐色(陰道5株、中段尿5株、口腔4株、血液1株)；且全為白念珠菌.(2)透射電鏡結(jié)果產(chǎn)黑的新生隱球菌在透射電子顯微鏡下看到在細(xì)胞壁外有一層高電子致密層,SC5314和變色的臨床念珠菌在細(xì)胞壁外層未看到類似結(jié)構(gòu)。(3)電子自旋共振波譜(ESR)結(jié)果對照組新生隱球菌檢測到信號,對于變色最明顯的SC5314測其ESR波譜,未檢測到信號。2.4結(jié)論(1)僅憑觀察培養(yǎng)基顏色變化來判斷念珠菌是否能產(chǎn)黑色素可靠度尚有欠缺,還需結(jié)合透射電鏡和電子自旋共振波譜儀進(jìn)一步驗(yàn)證。(2)需要繼續(xù)進(jìn)一步加大樣本進(jìn)行篩選。同時(shí),可以進(jìn)一步用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證黑色素。
【關(guān)鍵詞】：念珠菌感染 流行病學(xué) 高危因素 毒力因子 黑色素 相關(guān)性
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R756
【目錄】：

• 中文摘要3-8
• ABSTRACT8-16
• 前言16-18
• 第一章 院內(nèi)深部念珠菌感染標(biāo)本的臨床分析18-41
• 1 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-34
• 4 討論34-39
• 5 結(jié)論39-41
• 第二章 念珠菌與黑色素相關(guān)性的初步研究41-55
• 1 實(shí)驗(yàn)材料41-43
• 2 實(shí)驗(yàn)方法43-48
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-50
• 4 討論50-53
• 5 結(jié)論53-55
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 綜述60-72
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 附錄72-73
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文73-74
• 致謝74-75

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