本文關(guān)鍵詞：外周感覺神經(jīng)元Fc-epsilon-R I參與過敏性瘙癢發(fā)生的機制

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【摘要】：背景與目的癢覺是一種由內(nèi)部或外部刺激引起不適進而引發(fā)搔抓意愿的感覺。瘙癢癥常見于皮膚、粘膜或系統(tǒng)性疾病,是困擾人類的健康難題之一。目前研究認(rèn)為,與痛的神經(jīng)機制類似,位于皮膚或粘膜的外周無髓鞘C類神經(jīng)纖維末梢的癢覺感受器被致癢介質(zhì)直接或間接激活產(chǎn)生癢覺。在各種瘙癢癥中,由過敏性疾病引起的過敏性瘙癢最為常見,而現(xiàn)有的抗過敏藥物治療往往效果欠佳。過敏性疾病的特征之一是血清或受累組織中抗原特異性免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)尤其是免疫球蛋白E(IgE)的增高。既往研究表明,部分外周痛覺傳入神經(jīng)元表達IgG Fc高親和力受體Fc-gamma-receptor I (FcγRI),并可以被IgG免疫復(fù)合物特異性激活,從而直接引起痛覺神經(jīng)元興奮性升高和放電。有研究發(fā)現(xiàn)IgE的高親和力激活受體Fc-epsilon-receptor I (FcεRI)在部分外周感覺神經(jīng)元上表達。我們假設(shè)外周感覺神經(jīng)元表達的FcεRI可以被IgE免疫復(fù)合物激活,從而參與過敏性瘙癢的發(fā)生。本研究的目的是探討在外周感覺神經(jīng)元表達的FcεRI參與過敏性瘙癢的發(fā)生機制。材料與方法采用雞卵清蛋白(OVA)和免疫佐劑(氫氧化鋁)皮下注射致敏小鼠。OVA致敏原滴眼激發(fā)過敏癥狀,建立小鼠過敏性眼部瘙癢模型。使用OVA和小鼠抗OVA IgE型抗體制備IgE-免疫復(fù)合物(IC)。采用在體和離體實驗研究小鼠瘙癢相關(guān)行為、Fc受體在小鼠三叉神經(jīng)節(jié)(TG)感覺神經(jīng)元的表達以及IgE-IC通過激活TG感覺神經(jīng)元引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。1、小鼠眼部瘙癢和疼痛行為的區(qū)分(1)使用致痛劑滴眼并觀察小鼠眼部的疼痛相關(guān)行為。(2)使用致癢劑滴眼并觀察小鼠眼部的瘙癢相關(guān)行為。2、建立小鼠過敏性眼部瘙癢模型及瘙癢相關(guān)行為的測定(1)滴加致敏原到過敏小鼠眼部,建立眼部瘙癢模型。(2)提前給予過敏小鼠組胺H1受體拮抗劑或肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑后再用致敏原激發(fā),測定激發(fā)后眼部癢覺行為。(3)提前過敏小鼠眼部給予Anti-FcεRIα抗體后再給予致敏原激發(fā),測定激發(fā)后眼部癢覺行為。3、應(yīng)用免疫組織熒光、實時定量PCR (qPCR)和Western Blotting檢測FcεRI和FcεRII在小鼠TG感覺神經(jīng)元的表達。4、分離培養(yǎng)C57BL/6小鼠TG神經(jīng)元,用鈣離子成像技術(shù)檢測不同濃度IgE-IC對TG神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。結(jié)果1、疼痛和瘙癢刺激分別在小鼠眼部引起不同的反射行為。致痛劑(5 μM Capsaicin)引起小鼠前爪在眼部明顯增加的拂掃(wiping)行為,而致癢劑(10μM BAM8-22)引起小鼠后爪在眼部明顯增加的搔抓(scratching)行為。2、致敏原激發(fā)小鼠眼部過敏,引起過敏小鼠產(chǎn)生肥大細(xì)胞和組胺非依賴性的癢搔抓行為。(1)0.1%、1%、5% OVA溶液在過敏小鼠眼部引起濃度依賴性的搔抓(癢覺相關(guān))行為。(2) 小鼠眼部過敏性瘙癢不能被肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑和組胺H1受體拮抗劑所完全抑制。(3)在過敏性小鼠眼部滴加Anti-FcεRIα抗體能明顯抑制致敏原引起的眼部瘙癢。3、FcSRI的α、β、γ三個亞基都在離體培養(yǎng)的TG神經(jīng)元細(xì)胞上有表達。4、Fc8RI在過敏性小鼠TG神經(jīng)元上表達增加(1)過敏組TG神經(jīng)元表達的FcsRIp和p亞基蛋白水平明顯高于Naive(正常對照)組和OVA(非致敏)組小鼠TG神經(jīng)元。(2) FcsRIp亞基在小鼠TG的MrgprD+神經(jīng)元、MrgprA3+(癢覺特異性)神經(jīng)元上表達并在TG部分肽能神經(jīng)元和非肽能神經(jīng)元上有表達。(3)過敏組小鼠TG神經(jīng)元表達的Fc8RI7亞基蛋白水平無明顯變化。5、IgE-IC激活離體培養(yǎng)的TG神經(jīng)元(1) IgE-IC細(xì)胞外給藥可引起正常和過敏小鼠TG小神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加,且具有劑量-反應(yīng)強度依賴性。(2)與對照組比較,應(yīng)用FcεRⅠα siRNA使離體培養(yǎng)的TG神經(jīng)元FcεRIα亞基表達降低。(3)與對照組比較,IgE-IC細(xì)胞外給藥激活siRNA組神經(jīng)元的比例明顯降低且引起的細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加幅度也明顯降低。6、IgE低親和力受體FcεRⅡ (CD23)在過敏性眼部瘙癢小鼠的TG神經(jīng)元上表達下降。結(jié)論我們的研究結(jié)果表明：(1)小鼠TG感覺神經(jīng)元表達功能性的FcεRI和FcεRII。(2)IgE-IC通過FcεRIa激活TG感覺神經(jīng)元,引起細(xì)胞內(nèi)鈣增加。(3)過敏性眼部瘙癢小鼠TG感覺神經(jīng)元FcεRI表達增加,提高了TG感覺神經(jīng)元對IgE-IC的敏感度。(4)外周感覺神經(jīng)元FcεRⅠ被IgE-IC激活可能直接參與了組胺非依賴性過敏性瘙癢的產(chǎn)生。(5)TG神經(jīng)元FcεRI和FcεRⅡ表達的失調(diào)可能參與小鼠眼部的過敏性瘙癢。臨床意義本項研究在小鼠過敏性眼結(jié)膜瘙癢模型上揭示了一個全新的關(guān)于過敏性瘙癢的機制：IgE免疫復(fù)合物直接作用于外周感覺神經(jīng)元的Fc8RI而導(dǎo)致癢覺和瘙癢癥的發(fā)生。此機制的闡明可能為過敏性瘙癢的治療提供了一個全新的思路和靶點。
【關(guān)鍵詞】：免疫復(fù)合物 Fc-epsilon-R I 瘙癢 三叉神經(jīng)節(jié) 感覺神經(jīng)元
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R758.31
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-22
• 實驗材料與方法22-55
• 實驗結(jié)果55-73
• 1、瘙癢和疼痛在小鼠眼部呈現(xiàn)不同的行為55-56
• 2、小鼠過敏模型的建立56-57
• 3、致敏原在過敏小鼠眼睛引起過敏性眼部瘙癢57-58
• 4、致敏原在過敏小鼠眼睛引起肥大細(xì)胞和組胺非依賴性的瘙癢58-59
• 5、Anti-FcεRⅠα抑制致敏原引起的小鼠過敏性眼部瘙癢59-60
• 6、小鼠TG神經(jīng)元表達IgE受體FcεRⅠ60-62
• 7、小鼠TG神經(jīng)元表達FcεRⅠ的α、β和γ三種亞基62-63
• 8、FcεRⅠ在過敏性眼部瘙癢小鼠的TG神經(jīng)元表達上調(diào)63-67
• 9、IgE-IC引起離體培養(yǎng)TG小神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高67-69
• 10、IgE-IC通過FcεRⅠ引起離體培養(yǎng)TG小神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高69-71
• 11、FcεRⅡ在過敏性眼結(jié)膜炎小鼠TG表達下調(diào)71-73
• 討論73-78
• 結(jié)論78-79
• 參考文獻79-87
• 綜述87-93
• 參考文獻90-93
• 附錄93-97
• Ⅰ 縮略詞表93-96
• Ⅱ 研究生期問參加會議和發(fā)表文章96-97
• 致謝97-98

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本文編號：916435