本文關(guān)鍵詞：微小RNA在早期蕈樣肉芽腫發(fā)病機(jī)制中的相關(guān)性研究初探及6例肉芽腫性皮膚松弛癥臨床病理分析

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【摘要】：蕈樣肉芽腫(Mycosis fungoides, MF) MF是原發(fā)性皮膚T細(xì)胞淋巴瘤(primary cutaneous T-cell lymphoma, CTCL)中最常見(jiàn)的一種,發(fā)病機(jī)制尚不明確,臨床表現(xiàn)多樣。經(jīng)典MF分為斑片期、斑塊期、腫瘤期,進(jìn)展緩慢,早期極易誤診,若治療不當(dāng)可能導(dǎo)致病情延誤。此外,MF有3種變異型：親(嗜)毛囊性MF、佩吉特樣網(wǎng)狀細(xì)胞增生癥、肉芽腫性皮膚松弛癥(granuloma slack skin, GSS)。微小RNA (microRNA, miRNA)是一種長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,參與細(xì)胞分化、增殖、代謝、凋亡等幾乎所有生命活動(dòng),且對(duì)很多腫瘤的發(fā)病起關(guān)鍵作用。目前發(fā)現(xiàn)一些miRNA在MF的發(fā)病、輔助診斷、判斷預(yù)后起重要作用,并對(duì)MF的治療具有潛在價(jià)值。第一部分是國(guó)內(nèi)首次探討miRNA與早期蕈樣肉芽腫之間的關(guān)系,并初步探討n(yōu)iRNA在MF發(fā)病中可能的作用機(jī)制。第二部分對(duì)我院診斷的6例GSS進(jìn)行臨床病理分析,以提高大家對(duì)該病的認(rèn)知。第一部分：miRNA在早期蕈樣肉芽腫發(fā)病機(jī)制中的相關(guān)性研究初探第一章：篩選與早期MF相關(guān)的miRNA目的篩選與早期蕈樣肉芽腫相關(guān)的microRNA (miRNA)。方法采用高通量miRNA PCR芯片,檢測(cè)6例早期蕈樣肉芽腫(MF)與6例對(duì)照(濕疹、扁平苔蘚)的皮損中microRNA的表達(dá)差異。針對(duì)差異表達(dá)的nicroRNA,進(jìn)行組織標(biāo)本及Myla、Hut-78細(xì)胞株的實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-qPCR)的驗(yàn)證。結(jié)果芯片結(jié)果示,相較于對(duì)照組,3個(gè)microRNA在早期蕈樣肉芽腫中顯著性高表達(dá):hsa-miR-378a-5p、 hsa-miR-107、hsa-miR-302c-3p,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。皮損組織的R T-qPCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片結(jié)果一致。與正常人外周血T淋巴細(xì)胞相比,Myla細(xì)胞株中hsa-miR-378a-5p、hsa-miR-107顯著上調(diào),與芯片結(jié)果一致；而未見(jiàn)hsa-miR-302c-3p的顯著差異性表達(dá)。3個(gè)miRNA在Hut-78細(xì)胞株中均不顯著差異性表達(dá)。結(jié)論與炎癥性皮膚病相比,早期蕈樣肉芽腫存在差異表達(dá)的nicroRNA表達(dá)譜。第二章： 生物信息學(xué)工具預(yù)測(cè)hsa-miR-378a-5p的靶基因及可能作用通路目的利用生物信息學(xué)工具預(yù)測(cè)hsa-miR-378a-5p靶基因及信號(hào)通路,并進(jìn)行CTCL細(xì)胞株的驗(yàn)證。方法應(yīng)用TargetScan等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),并進(jìn)行GO信號(hào)通路富集分析。結(jié)合文獻(xiàn)檢索結(jié)果選擇hsa-miR-378a-5p的可能靶基因SUFU,IGF1R,及經(jīng)典MAPK、p38 MAPK信號(hào)通路的關(guān)鍵基因ERK1、ERK2、p38,進(jìn)行CTCL細(xì)胞株中RT-qPCR的驗(yàn)證。結(jié)果hsa-miR-378a-5p的預(yù)測(cè)靶基因與細(xì)胞的增殖、T細(xì)胞分化、凋亡、免疫調(diào)節(jié)、血管生成等生物學(xué)功能密切相關(guān),可能參與TGF-β信號(hào)通路、p53信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路、p38 MAPK信號(hào)通路等。對(duì)Myla、Hut-78細(xì)胞株及正常T淋巴細(xì)胞進(jìn)行RT-qPC R,發(fā)現(xiàn)Myla細(xì)胞株中SUFU、IGF1R均高表達(dá),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；而Hut-78細(xì)胞株中均未見(jiàn)顯著差異。ERK1、ERK2、p38的RT-qPCR結(jié)果是,Myla細(xì)胞株中,三者均顯著高表達(dá)；Hut-78細(xì)胞株中,僅ERK1、p38顯著高表達(dá)(P0.05)。結(jié)論通過(guò)對(duì)hsa-miR-378a-5p的靶基因分析,為hsa-miR-378a-5p在MF中的功能及機(jī)制研究提供了線(xiàn)索和理論依據(jù)。第三章：hsa-miR-378a-5p基因干擾對(duì)MF細(xì)胞株Myla的影響目的探討hsa-miR-378a-5p基因干擾對(duì)MF細(xì)胞株Myla的影響。方法采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對(duì)Myla細(xì)胞株轉(zhuǎn)染niR-378a-5p小干擾RNA(siRNA)、陰性對(duì)照(NC)。CCK-8法檢測(cè)不同處理組的增殖。免疫印跡法測(cè)SUFU蛋白在不同處理組的表達(dá)水平。結(jié)果構(gòu)建Myla/miR-378a-5p-siRNA組、Myla/NC-siRNA組、未處理Myla組,RT-qPCR結(jié)果示Myla/miR-378a-5p-siRNA組的miR-378a-5p表達(dá)水平顯著抑制。CCK-8結(jié)果示24h, Myla/miR-378a-5p-siRNA組的增殖明顯下調(diào)；而48h、72h、96h三組細(xì)胞的增殖情況無(wú)顯著差異o Myla/miR-378a-5p-siRNA組較于其它兩組,SUFU蛋白在24h、48h、72h的表達(dá)水平均上調(diào)。結(jié)論成功構(gòu)建hsa-miR-378a-5p基因干擾Myla細(xì)胞株模型。MF中,SUFU可能不是miR-378a-5p靶基因。第二部分：6例肉芽腫性皮膚松弛癥臨床及組織病理分析目的分析6例肉芽腫性皮膚松弛癥(GSS)的臨床病理特點(diǎn)、診斷及治療,提高對(duì)本病的認(rèn)識(shí)。方法 回顧性分析近7年在我院診治的6例GSS患者的臨床和病理學(xué)資料。結(jié)果 6例患者均為男性,平均發(fā)病年齡29歲。所有病例均見(jiàn)松弛斑塊甚至垂懸狀腫塊,5例發(fā)生于褶皺部位(或?yàn)橹?,1例僅發(fā)生于右胸部。其中1例合并蕈樣肉芽腫。除1例合并瘙癢外,其他均無(wú)明顯自覺(jué)癥狀。組織病理均可見(jiàn)真皮內(nèi)非干酪性肉芽腫,伴中等大小的淋巴樣細(xì)胞、多核巨細(xì)胞浸潤(rùn)。1例見(jiàn)淋巴樣細(xì)胞異型性,余5例異型性不明顯。1例伴有親表皮現(xiàn)象。免疫組化均見(jiàn)CD4+T細(xì)胞為主的單克隆增生。4例行彈力纖維染色見(jiàn)彈力纖維卷曲、斷裂甚至消失,2例見(jiàn)多核巨細(xì)胞吞噬彈力纖維現(xiàn)象。2例行TCR基因重排,均為γ單克隆增生。2例患者采用淺層X(jué)線(xiàn)照射或電子束照射,皮損變小后手術(shù)切除,未再?gòu)?fù)發(fā)。其余4例患者采用干擾素α-2b肌注、0.02%氮芥外用等,較前改善。結(jié)論GSS罕見(jiàn),結(jié)合典型的臨床、病理、免疫組化,一般可診斷。該病進(jìn)展緩慢,不推薦過(guò)度治療。局限于皺褶部位的GSS推薦手術(shù)切除治療。
【關(guān)鍵詞】：微小RNA 芯片 蕈樣肉芽腫 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) Myla細(xì)胞株 miR-378a-5p miR-107 miR-302c-3p SUFU IGF1R MAPK p38 Hedgehog 淋巴瘤 T細(xì)胞 皮膚 蕈樣肉芽腫 皮膚表現(xiàn) 病理 治療
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 全文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-17
• 參考文獻(xiàn)14-17
• 第一部分 miRNA在早期蕈樣肉芽腫發(fā)病機(jī)制中的相關(guān)性研究初探17-60
• 第一章 篩選與早期MF相關(guān)的miRNA17-33
• 引言18
• 材料與方法18-26
• 結(jié)果26-30
• 討論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 第二章 生物信息學(xué)工具預(yù)測(cè)hsa-miR-378a-5p的靶基因及作用通路33-44
• 引言34
• 材料與方法34-37
• 結(jié)果37-41
• 討論41-43
• 參考文獻(xiàn)43-44
• 第三章 hsa-miR-378a-5p基因干擾對(duì)MF細(xì)胞株Myla的影響44-60
• 引言44-45
• 材料與方法45-52
• 結(jié)果52-57
• 討論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-60
• 第二部分 6例肉芽腫性皮膚松弛癥臨床及病理分析60-69
• 引言61
• 一、 資料和方法61
• 二、結(jié)果61-67
• 討論67-68
• 參考文獻(xiàn)68-69
• 全文小結(jié)69-71
• 綜述71-77
• 參考文獻(xiàn)75-77
• 在讀期間發(fā)表的文章及參加學(xué)術(shù)活動(dòng)的情況77-79
• 致謝79-81

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9 盛珉e，

本文編號(hào)：874528